2. Materials and methods2.1. Cells

2. Materials and methods
2.1. Cells and virus
Vero Cells (ATCCCCL-81) Were cultured in alpha minimum essential medium(α-MEM; Invitrogen,Carlsbad,CA) With 5% Fetal bovine serum (FBS;Invitrogen) And antibiotic-antimycotic solu tions (100×;Invitrogen) And maintained at 37◦C In a humidified 5% CO2 incubator. A Korean PEDV strain, KOR/KNU-141112/2014, Was isolated and propagated in Vero Cells in our lab as described previously (Lee at al., 2015). A Viral stock at the 10 th Passage in cell culture (KNU-141112-P10) Was prepared and used in this study. Briefly, confluent Vero Cells grown in 100-mm Diameter tissue cul ture dishes were washed with PBS And inoculated with 1 Ml of 10-fold Diluted PEDV KNU-141112 Containing trypsin (USB,Cleve land,OH). After Incubating at 37◦C For 1 h, 7 Ml of virus growth medium [α-MEM Supplemented with antibiotic-antimycotic solu tions, 0.3% Tryptose phosphate broth (TPB; Sigma,St.Louis,MO), 0.02% Yeast extract (Difco,Detroit,MI),10 M MHEPES (Invitrogen),and 5µg/ml Of trypsin] was added. The Inoculated cells were maintained at 37◦C under 5% CO2 and Monitored daily for cyto pathic effects (CPE). When 70% CPE appeared, inoculated cells were subjected to three rounds of freezing and thawing. The Cul ture supernatants were then centrifuged for 10 Min at 400g (Hanil Centrifuge FLETA5, Incheon, South Korea) And filtered through a 0.45-µm-pore-size filter (Millipore, Billerica, MA).The clarified supernatants were aliquoted and stored at −80◦C As the viral stock until use.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เซลล์ และไวรัสแอนนาเซลล์ (ATCCCCL-81) ถูกล้างในกลางจำเป็นต่ำสุดอัลฟา (α-MEM Invitrogen คาร์ลบาด CA) กับ 5% ทารกวัวซีรั่ม (FBS; Invitrogen) และยาปฏิชีวนะ antimycotic ไหลยวี่ (100 × Invitrogen) และ 37◦C ในตู้อบ 5% CO2 ที่ humidified สายพันธุ์ PEDV เกาหลี กอ KNU-141112/มาส แยก และขยายพันธุ์ในเซลล์แอนนาในห้องแล็บของเราตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Lee ที่ al., 2015) ทาง th ทนัทีณ 10 ไวรัสในเซลล์วัฒนธรรม (KNU 141112 P10) จัดทำ และใช้ในการศึกษานี้ Briefly, confluent แอนนาเซลล์เติบโตในจาน ture cul 100 มม.เส้นผ่าศูนย์กลางเนื้อเยื่อถูกล้าง ด้วย PBS และ inoculated กับ 1 มิลลิลิตรของ 10-fold นปรับลด 141112 PEDV KNU ที่ประกอบด้วยทริปซิน (USB ที่ดิน Cleve, OH) หลังจาก Incubating ที่ 37◦C สำหรับ 1 h, 7 Ml ขนาดกลางเจริญเติบโตของไวรัส [Supplemented α-MEM กับไหล antimycotic ยาปฏิชีวนะทุกระดับ 0.3% Tryptose ฟอสเฟตซุป (พีบี Sigma,St.Louis,MO), 0.02% สารสกัดจากยีสต์ (Difco ดีทรอยต์ MI), 10 M MHEPES (Invitrogen), และ 5 µg/ml ของทริปซิน] เพิ่มขึ้น Inoculated เซลล์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 37◦C ภายใต้ 5% CO2 และ Monitored วันสำหรับผล cyto pathic (CPE) เมื่อ 70% ปรากฏ CPE, inoculated เซลล์ถูกสามรอบของแช่แข็ง และละลาย การ supernatants ture Cul ได้แล้วจาก 10 นาทีที่ 400 กรัม (Hanil เหวี่ยง FLETA5 อินชอน เกาหลีใต้) และ filtered ผ่านการ filter 0.45 µm รูขุมขนขนาด (มิลลิพอร์ Billerica, MA) Clarified supernatants ถูกเก็บไว้ที่ −80◦C และ aliquoted เป็นสต็อกไวรัสจนกว่าจะใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 เซลล์และไวรัส
เวโรเซลล์ (ATCCCCL-81) ได้รับการเพาะเลี้ยงในอาหารที่จำเป็นขั้นต่ำอัลฟา (α-Mem; Invitrogen, Carlsbad, CA) 5% ของทารกในครรภ์วัวซีรั่ม (FBS; Invitrogen) และยาปฏิชีวนะฆ่าเชื้อรา tions Solu (100 ×; Invitrogen ) และการบำรุงรักษาที่37◦Cใน humidi Fi เอ็ด 5% CO2 ศูนย์บ่มเพาะ สายพันธุ์ PEDV เกาหลี, KOR / KNU-141112/2014 ได้รับการแยกและการแพร่กระจายในเซลล์เวโรในห้องปฏิบัติการของเราตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (ลี al., 2015) ต็อกไวรัสที่ Passage ที่ 10 ในการเพาะเลี้ยงเซลล์ (KNU-141112-P10) จัดทำและนำมาใช้ในการศึกษาครั้งนี้ บรีฟลอริด้า Y, Con FL uent เซลล์เวโรปลูกใน 100 มิลลิเมตรจาน ture เส้นผ่าศูนย์กลางเนื้อเยื่อตรอกถูกล้างด้วยพีบีเอสและเชื้อด้วย 1 มิลลิลิตรของ 10 เท่าปรับลด PEDV KNU-141112 ที่มีส่วนผสมของ trypsin (USB, Cleve ที่ดิน OH) หลังจากบ่มที่37◦Cเป็นเวลา 1 ชั่วโมง 7 มลเจริญเติบโตปานกลางไวรัส [α-Mem เสริมด้วยการนำยาปฏิชีวนะฆ่าเชื้อรา Solu 0.3% Tryptose ฟอสเฟตน้ำซุป (TPB; Sigma, เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่), สารสกัดจากยีสต์ 0.02% ( Difco, ดีทรอยต์, มิชิแกน), 10 M MHEPES (Invitrogen) และ5μg / มิลลิลิตร trypsin] ถูกเพิ่มเข้ามา เซลล์เชื้อได้รับการดูแลที่37◦Cอายุต่ำกว่า 5% CO2 และตรวจสอบทุกวันสำหรับผล pathic Cyto (CPE) เมื่อ 70% CPE ปรากฏเซลล์เชื้อถูกยัดเยียดให้สามรอบของการแช่แข็งและละลาย Cul supernatants ture ถูกปั่นแล้วเป็นเวลา 10 นาทีที่ 400g (Hanil เหวี่ยง FLETA5, อินชอน, เกาหลีใต้) และ Fi ltered ผ่าน 0.45 ไมครอนรูขุมขนขนาด Fi กรอง (คริกา MA) ได้โดยง่าย Clari Fi supernatants เอ็ดถูก aliquoted และเก็บไว้ที่ -80◦Cเป็นหุ้นที่ไวรัสจนการใช้งาน