2.4.3. Viral RNA extractionLysed vi

2.4.3. Viral RNA extraction
Lysed viral particles were processed on a NucliSens® easyMAG™ platform
(bioMérieux) for viral RNA extraction using the “off-board Specific
A” protocol according to the manufacturer's instructions. Nucleic acids
were then eluted in 70 μL of elution buffer and stored at −80 °C.
For a negative control of the RNA extraction, we added 100 μL of the
DEPC-treated water used to dilute the viruses to the lysis buffer.
Each experiment set, from spiking to RNA extraction, was performed
three times.
2.5. RT-qPCR conditions
One-step monoplex RT-qPCR amplifications were performed in duplicate
on the CFX96™ real-time PCR detection system (Bio-Rad).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4.3 การสกัดอาร์เอ็นเอไวรัส
lysed อนุภาคไวรัสที่ถูกประมวลผลบนแพลตฟอร์มNucliSens® easyMAG ™
(bioM? rieux) สำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอไวรัสโดยใช้
"ออกจากคณะกรรมการเฉพาะเป็น" โพรโทคอตามคำแนะนำของผู้ผลิต กรดนิวคลีอิกถูกชะแล้วใน 70 ไมโครลิตรของ buffer ชะและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส. สำหรับการควบคุมเชิงลบของการสกัดอาร์เอ็นเอที่เราเพิ่ม 100 ไมโครลิตรของน้ำDEPC รับการรักษาที่ใช้ในการเจือจางไวรัสไปยังบัฟเฟอร์สลายได้. การทดลองแต่ละ ตั้งองศาจากการสกัดอาร์เอ็นเอที่ได้ดำเนินการสามครั้ง. 2.5 RT-qPCR เงื่อนไขmonoplex ขั้นตอนเดียวเครื่องขยายเสียง RT-qPCR ได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันในCFX96 ™แบบ real-time PCR ระบบตรวจจับ (Bio-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4.3 . การสกัดอาร์เอ็นเอไวรัส
lysed ไวรัสอนุภาคที่ถูกประมวลผลใน nuclisens ® easymag ™แพลตฟอร์ม
( biom é rieux ) สำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอไวรัสโดยใช้ " ปิดบอร์ดเฉพาะ
" โปรโตคอลตามคำแนะนำของผู้ผลิต กรดนิวคลีอิก
แล้วตัวอย่างใน 70 μลิตรใช้บัฟเฟอร์ และ 80 องศา อุณหภูมิ−
สำหรับควบคุมเชิงลบของการสกัดอาร์เอ็นเอ เราเพิ่ม 100 μ l
depc น้ำถือว่าใช้เจือจางไวรัสกับการสลายบัฟเฟอร์
การทดลองแต่ละชุด เพื่อการสกัด DNA จาก spiking , สามครั้งได้
.
2.5 เงื่อนไข qpcr RT
ก้าว monoplex RT qpcr amplifications แสดงในซ้ำ
บน cfx96 ™ PCR แบบเรียลไทม์ ระบบตรวจจับ ( ไบโอ ราด )