Total RNA was isolated from placent

Total RNA was isolated from placental samples using Trizol reagent followed by DNase treatment. cDNA was synthesized. Real-time PCR was done according to the manufacturer's protocol (Fermentas, CA) by using ABI 7500 instrument. OPN primers were as follows: forward, 5′-GAACATGAAATGCTTCTTTCTCAG-3′; reverse, 5′-TCCATGAAGCCACAAACTAAACTA-3′. Real-time PCR reactions were performed in 25 μl volumes, containing 1 μl cDNA. All samples were performed in triplicate for 40 cycles of PCR under the following conditions: initial enzyme activation and template denaturation for 10 min at 95 °C followed by 10 s at 95 °C, 20 s annealing at 60 °C and extension phase for 35 s at 72 °C. OPN were normalized to the mRNA levels of housekeeping gene GAPDH.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกต่างหากจากรกลอกตัวอย่างโดยใช้รีเอเจนต์ Trizol ตามรักษา DNase มีสังเคราะห์ cDNA PCR แบบเรียลไทม์ที่ทำตามของโพรโทคอล (Fermentas, CA) โดยเครื่อง ABI 7500 ไพรเมอร์ OPN มีดังนี้: ไปข้างหน้า 5′-GAACATGAAATGCTTCTTTCTCAG-3′ ย้อนหลัง 5′-TCCATGAAGCCACAAACTAAACTA-3′ ปฏิกิริยา PCR แบบเรียลไทม์ได้ดำเนินในไดรฟ์ μl 25, 1 μl cDNA ที่ประกอบด้วย ตัวอย่างทั้งหมดได้ดำเนินการใน triplicate สำหรับวงจร 40 ของ PCR ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: เอนไซม์เริ่มต้นเปิดใช้งานและแบบการ denaturation สำหรับ 10 นาทีที่ 95 ° C ตาม ด้วย 10 s ที่ 95 ° C, 20 s การอบเหนียวที่ 60 ° C และขยายระยะ 35 s ที่ 72 องศาเซลเซียส OPN ได้ตามปกติให้ระดับ mRNA ของยีนการทำความสะอาด GAPDH

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวมอาร์เอ็นเอที่แยกได้จากตัวอย่างรกใช้น้ำยา Trizol ตามด้วยการรักษา DNase ยีนสังเคราะห์ PCR แบบ Real-time ได้ทำตามโปรโตคอลของผู้ผลิต (Fermentas แคลิฟอร์เนีย) โดยใช้เครื่องมือ ABI 7500 ไพรเมอร์ OPN มีดังนี้ข้างหน้า 5'-GAACATGAAATGCTTCTTTCTCAG-3 '; ย้อนกลับ 5'-TCCATGAAGCCACAAACTAAACTA-3 ' ปฏิกิริยา PCR แบบ Real-time ได้ดำเนินการใน 25 ไมโครลิตรปริมาณที่มียีน 1 ไมโครลิตร ตัวอย่างทั้งหมดได้รับการดำเนินการในการเพิ่มขึ้นสามเท่าเป็น 40 รอบของ PCR ภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้: การเปิดใช้เอนไซม์เริ่มต้นและการสูญเสียสภาพธรรมชาติแม่แบบสำหรับ 10 นาทีที่ 95 ° C ตามด้วย 10 วินาทีที่ 95 องศาเซลเซียสการอบ 20 s ที่ 60 องศาเซลเซียสและขั้นตอนการขยายสำหรับ 35 s ที่ 72 ° C OPN ได้รับปกติในระดับ mRNA ของยีนดูแลทำความสะอาด GAPDH

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกจากตัวอย่างที่คนไทยใช้ trizol รีเอเจนต์ตามตรวจหา ADNase รักษา ยีนสังเคราะห์ . เวลาจริงและทำตามขั้นตอนของผู้ผลิต ( fermentas , CA ) โดยใช้ ABI 7 , 500 เครื่อง 2554 โดยเป็นดังนี้ : ไปข้างหน้า , 5 ’ - ’ gaacatgaaatgcttctttctcag-3 ; ย้อนกลับ 5 ’ - ’ tccatgaagccacaaactaaacta-3 .เวลาจริงในปฏิกิริยา PCR จำนวน 25 μ L ปริมาณที่มียีนผม 1 μ . กลุ่มตัวอย่างมีการปฏิบัติทั้งสามใบ 40 รอบของ PCR ภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้ : การกระตุ้นเอนไซม์เริ่มต้นและแม่แบบ ( สำหรับ 10 นาทีที่ 95 องศา C ตามด้วย 10 ที่ 95 องศา C 20 s 60 ° C และส่งเสริมการอบอ่อนที่ระยะ 35 s 72 ° C2554 เป็นปกติในระดับ mRNA ของยีน gapdh แม่บ้าน .