To purify the protein, 2 g of the d

To purify the protein, 2 g of the dry pellet was suspended in a mixture of 10 ml of Ph/Tris-buffer at pH 8.0, and 10 ml of dense SDS buffer (2%[w/v] SDS, 5%[w/v] sucrose, 0.1 M Tris-HCl, pH 8.0, 5% [v/v] β-mercaptoethanol). The mixture was vortex mixed and the pellet was obtained by centrifugation at 10,000 rpm for 10 min at 4 °C, using a Beckman Avanti J26-XP centrifuge fitted with a JA25.50 rotor (Beckman-Coulter, High Wycombe, UK). The pellet was re-suspended in Ph/Tris-buffer and dense SDS solution, and centrifuged again under the same conditions. The pellets from both centrifugations were mixed and precipitated with five volumes of cold 0.1 M ammonium acetate in methanol, refrigerated at 4 °C overnight and then centrifuged at 10,000 rpm for 10 min at 4 °C. The pellet from this centrifugation was then washed three times with cold methanol, plus 0.1 M ammonium acetate and centrifuged as above, followed by the same process with cold 80% (v/v) acetone. Half a gram of the dried pellet was then mixed with 5 ml of cold aqueous 24% (w/v) TCA, vortex mixed and left to precipitate on ice for 30 min, followed by centrifugation at 13,000 rpm for 15 min at 4 °C. The pellet was washed with 2 ml of ice cold acetone, incubated for 15 min on ice and then centrifuged at 13,000 rpm for 15 min at 4 °C. The final pellet or date seed protein concentrate (DSPC) was air-dried in an oven at 30 °C overnight (16 h) and stored at −20 °C, until required for further analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ให้บริสุทธิ์โปรตีน เม็ดแห้ง 2 กรัมถูกระงับใน 10 มล. Ph/ทริ บัฟเฟอร์ที่ pH 8.0 และ 10 ml ของบัฟเฟอร์ SDS หนาแน่น (2%[w/v] SDS, 5%[w/v] ซูโครส 0.1 M ทริสเรทติ้ง HCl, pH 8.0, 5% [v/v] β-mercaptoethanol) ส่วนผสมคือ ผสม vortex และเม็ดได้รับ โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 ° C ใช้เครื่องหมุนเหวี่ยง Beckman งติ J26-XP ที่ประกอบ ด้วยใบพัด JA25.50 (Beckman Coulter วิคคัมบ์สูง สหราชอาณาจักร) เม็ดที่ลอยอยู่ใน Ph/ทริ บัฟเฟอร์และแก้ไข SDS หนาแน่นอีกครั้ง และผลิตภัณฑ์อีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดจาก centrifugations ทั้งผสม และตกตะกอนกับห้าอะซิเตทแอมโมเนีย 0.1 M เย็นในเมทานอล ตู้แช่เย็นที่ 4 ° C ค้างคืนแล้ว จากที่ 10,000 rpm 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เม็ดจากนี้หมุนเหวี่ยงแล้วล้าง 3 ครั้ง ด้วยเมทานอลเย็น บวก 0.1 M แอมโมเนียอะซิเตท และผลิตภัณฑ์ดังกล่าวข้างต้น ตาม ด้วยกระบวนการเดียวกันกับเย็น 80% (v/v) อะซิโตน กรัมเป็นครึ่งหนึ่งของเม็ดแห้งแล้วถูกผสม ด้วย 5 ml ของเย็นละลาย 24% (w/v) TCA วนผสม และทิ้งให้ตกตะกอนในน้ำแข็ง 30 นาที ตาม ด้วยหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีที่ 4 องศาเซลเซียส 15 นาที เม็ดถูกล้าง ด้วย 2 ml ของน้ำแข็งเย็นอะซิโตน 15 นาทีบนน้ำแข็งได้รับการกกแล้ว จากที่ 13,000 รอบต่อนาทีที่ 4 องศาเซลเซียส 15 นาที สุดท้ายเม็ดหรือวันเมล็ดโปรตีนเข้มข้น (DSPC) เป็น air-dried ในเตาที่ 30 ° C ค้างคืน (16 ชั่วโมง) และเก็บไว้ที่ −20 ° C จนกว่าจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์เพิ่มเติม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การชำระล้างโปรตีน 2 กรัมของเม็ดแห้งถูกระงับในส่วนผสมของ 10 มล. ของ ph / ทริสบัฟเฟอร์ที่ pH 8.0 และ 10 มล. ของบัฟเฟอร์ SDS หนาแน่น (2% [w / v] SDS, 5% [W / V] ซูโครส 0.1 M Tris-HCl พีเอช 8.0, 5% [v / V] β-mercaptoethanol) ส่วนผสมที่ถูกกระแสน้ำวนผสมและอัดเม็ดที่ได้รับจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C โดยใช้เครื่องปั่นแยก Beckman Avanti J26-XP พอดีกับโรเตอร์ JA25.50 (Beckman-โคลเตอร์สูงคัมบ์สหราชอาณาจักร) เม็ดเป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน Ph / ทริสบัฟเฟอร์และวิธีการแก้ปัญหา SDS หนาแน่นและปั่นอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดจากทั้ง centrifugations ถูกผสมและตกตะกอนกับห้าเล่มเย็นอะซิเตท 0.1 M แอมโมเนียมเมทานอลในตู้เย็นที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืนแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C เม็ดจากการหมุนเหวี่ยงนี้ถูกล้างแล้วสามครั้งด้วยเมทานอลเย็นบวก 0.1 M แอมโมเนียมอะซิเตทและปั่นข้างต้นตามด้วยกระบวนการเดียวกันกับความหนาวเย็น 80% (v / v) อะซีโตน ครึ่งกรัมเม็ดแห้งผสมกับ 5 มล. เย็นน้ำ 24% (w / v) TCA, Vortex ผสมและจากซ้ายไปตกตะกอนบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส . เม็ดถูกล้างด้วย 2 มิลลิลิตรของน้ำแข็งอะซีโตนเย็นบ่มเป็นเวลา 15 นาทีบนน้ำแข็งแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส เม็ดหรือโปรตีนเมล็ดวันสุดท้ายเข้มข้น (DSPC) เป็นอากาศแห้งในเตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน (16 ชั่วโมง) และเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บริสุทธิ์โปรตีน 2 กรัมเม็ดแห้งแขวนอยู่ในส่วนผสมของ 10 มิลลิลิตร pH / ทริสบัฟเฟอร์ ที่ pH 8.0 และ 10 มิลลิลิตร หนาแน่นเฉพาะบัฟเฟอร์ ( 2% [ w / v ] SDS , 5% [ w / v ] ซูโครส 0.1 M HCl ซึ่ง pH 8.0 , 5% [ 5 / 5 ] บีตา - mercaptoethanol ) ส่วนผสมจะถูกน้ำวนผสมเม็ดได้โดยการเหวี่ยงแยกที่ 10 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาทีที่ 4 ° C ใช้แบคแมนลุกขึ้น j26-xp ซึ่งพอดีกับ ja25.50 ใบพัด ( Beckman Coulter , High Wycombe สหราชอาณาจักร ) เม็ดเป็นอีกครั้งที่แขวนลอยใน pH / ทริสบัฟเฟอร์และหนาแน่นเฉพาะสารละลายไฟฟ้าอีกครั้งภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน เม็ดจากทั้ง centrifugations ถูกผสมและตกตะกอนกับห้าเล่ม 0.1 โมลาร์เตตในเย็นแอมโมเนีย เมทานอล ตู้เย็นที่ 4 ° C ในชั่วข้ามคืนและระดับที่ความเร็วรอบ 10 , 000 รอบ 10 นาทีที่ 4 องศา เม็ดจากปั่นก็ซักสามครั้งด้วยความหนาว เมทานอล บวก 0.1 M แอมโมเนียมอะซิเตท และไฟฟ้าเป็นข้างต้น ตามด้วยกระบวนการเดียวกันกับเย็น 80 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) อะซิโตน ครึ่งกรัมเม็ดแห้งแล้วผสมกับน้ำ 5 มิลลิลิตร เย็น 24 % ( w / v ) TCA vortex ผสมและทิ้งให้ตกตะกอนแข็ง 30 นาที ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงที่ 13 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศา เม็ดล้างด้วยอะซิโตนเย็นน้ำแข็ง 2 มิลลิลิตรบ่มสำหรับ 15 นาทีบนน้ำแข็งแล้วที่ 13 , 000 รอบต่อนาที ระดับ 15 นาทีที่ 4 องศา เม็ดสุดท้าย หรือโปรตีนเข้มข้นเมล็ดวันที่ ( dspc ) คืออากาศแห้งในเตาอบที่อุณหภูมิ 30 องศา C ค้างคืน ( 16 ชั่วโมง ) และเก็บรักษาที่ − 20 ° C , จนกว่าที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ต่อไป