2.3.4. 5-Hydroxymethylfurfural (HMF)
The compound 5-hydroxymethylfurfural (HMF) is an important
intermediate that is widely used as an indicator of the Maillard
reaction. To determine HMF, the method developed by
Rattanthanalerk, Chiewchan, and Srichumpoung (2005) was
adapted. One gramof samplewas mixed with 20 ml of 90% ethanol.
The mixture was homogenized for 1 min and subsequently
centrifuged at 18000 g for 1 min. Two ml of the supernatant was
transferred to a test tube and mixed with 2 ml of 12 g/100 ml trichloroacetic
acid (TCA) and 2 ml of 0.025 mol/L thiobarbituric acid
(TBA). The mixture was incubated at 40 C for 50 min and then
cooled. The sample was subjected to absorbance measurement at
443 nm using a UV-VIS spectrophotometer. A calibration curve was
established to quantify the HMF concentration and the result was
expressed in mmol/L per g of sample. An increase of absorbance
was related to the formation of HMF.
2.3.5. Polyphenol oxidase (PPO) activity
Polyphenol oxidase (PPO) activity was assayed using the
method of Nicoli, Elizalde, Pitotti, and Lerici (1991), with some
modification. The enzyme was extracted by homogenizing 2 g of
sample with 10 ml of 0.1 mol/L phosphate citrate buffer (pH 4.0)
and 0.2 g of polyvinylpyrolidone (PVP insoluble) to bind polyphenols.
The extract was then centrifuged at 4 C at 19000 g for
20 min. The supernatant was collected as the crude enzyme. PPO
analysis was based on the absorption at 420 nm of the brown
polymers formed when L-DOPA oxidizes in the presence of the PPO
solution. The reactionwas started by mixing 20 ml of crude enzyme
extract solution with 3 ml of incubation medium containing
0.1 mol/L potassiumphosphate buffer (pH 7.0) and 1.5 103 mol/L
L-DOPA as substrate. PPO activity was expressed as change in
absorbance unit per minute per g of sample.
2.3.6. Total phenolic (TP) contents
The extraction of total phenolics (TP) and antioxidants from
fresh and dried papayas was performed using an ultrasonic bath
(model T 780/H, Elma, Singen, Germany) with thermostatic temperature
control. Approximately 2 g of dried sample was mixed
with 95% ethanol at a ratio 1:5 in a conical flask that was wrapped
with an aluminium foil. The mixture was experimentally extracted
at 35 kHz and 50 C for 2 h. The sample was filtered through
Whatman No. 4 paper to obtain a clear solution. The extracted
sample was stored at 20 C prior to analysis. Total phenolic contents
were evaluated using the Folin-Ciocalteu assay based on the
method of Ikram et al. (2009), with slight modification. A total of
200 ml of extracted sample was mixed with 1.50 ml of 10 fold
diluted Folin-Ciocalteu reagent in a test tube. The mixture was
2.3.4 พัฒนา,. 5-Hydroxymethylfurfural (HMF)การผสม 5-hydroxymethylfurfural (HMF) เป็นสำคัญกลางที่จะใช้เป็นตัวบ่งชี้การ Maillardปฏิกิริยาการ HMF วิธีการพัฒนาโดยกำหนดRattanthanalerk, Chiewchan และ Srichumpoung (2005)ดัดแปลง Samplewas gramof หนึ่งผสมกับ 20 ml ของ 90% เอทานอลส่วนผสมถูก homogenized เป็นกลุ่ม 1 นาที และในเวลาต่อมาcentrifuged ที่ 18000 g ใน 1 นาที Ml สองของ supernatant ถูกโอนย้ายไปหลอดทดสอบ และผสมกับ 2 ml ของ trichloroacetic 12 g/100 mlกรด (TCA) และ 2 ml ของ 0.025 โมล/L thiobarbituric กรด(TBA) ส่วนผสมคือ incubated ที่ C 40 สำหรับ 50 นาทีแล้วระบายความร้อนด้วย ตัวอย่างที่ต้องการวัด absorbance ที่443 nm โดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง UV VIS เส้นโค้งเทียบได้ก่อตั้งขึ้นเพื่อกำหนดปริมาณความเข้มข้นของ HMF และผลลัพธ์ได้แสดงเป็น mmol/L ต่อกรัมของตัวอย่าง การเพิ่มขึ้นของ absorbanceเกี่ยวข้องกับการก่อตัวของ HMF2.3.5 การ Polyphenol oxidase (PPO) กิจกรรมPolyphenol oxidase (PPO) กิจกรรมถูก assayed ใช้การวิธี Nicoli, Elizalde, Pitotti และ Lerici (1991), กับปรับเปลี่ยน เอนไซม์นี้ถูกสกัด โดย homogenizing g 2 ของตัวอย่างกับ 10 ml 0.1 โมล/L ฟอสเฟตซิเตรตบัฟเฟอร์ (pH 4.0)และ 0.2 g ของ polyvinylpyrolidone (PVP ไม่ละลาย) ผูกโพลีฟีนการดึงข้อมูลแล้วได้ถูก centrifuged ที่ 4 C ที่ g 19000 สำหรับ20 นาที Supernatant ถูกรวบรวมเป็นเอนไซม์ดิบ PPOวิเคราะห์แบบดูดซึมที่ 420 nm ของน้ำตาลโพลิเมอร์ที่เกิดขึ้นเมื่อ L-DOPA oxidizes ในต่อหน้าของ PPOการแก้ปัญหา Reactionwas เริ่มต้น โดยผสม 20 ml ของเอนไซม์ดิบแยกด้วย 3 ml ของคณะทันตแพทยศาสตร์ที่ประกอบด้วยขนาดกลาง0.1 โมล/L potassiumphosphate บัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 1.5 10 3 โมล/LL-DOPA เป็นพื้นผิว กิจกรรม PPO ถูกแสดงเป็นการเปลี่ยนแปลงหน่วย absorbance ต่อนาทีต่อกรัมของตัวอย่าง2.3.6 การรวมฟีนอ (TP) เนื้อหาการสกัดรวม phenolics (TP) และสารต้านอนุมูลอิสระจากทำ papayas อาหารสด และแห้งโดยใช้น้ำเป็นอัลตราโซนิก(รุ่น T 780/H, Elma, Singen เยอรมนี) กับอุณหภูมิ thermostaticควบคุม มีผสมตัวอย่างแห้งประมาณ 2 กรัมมีเอทานอล 95% ที่ 1:5 เป็นอัตราส่วนในหนาวทรงกรวยที่ถูกห่อด้วยมีอะลูมิเนียมฟอยล์ ส่วนผสมที่สกัด experimentallyที่ 35 kHz และ C 50 สำหรับ 2 h ตัวอย่างที่ถูกกรองผ่านกระดาษ Whatman หมายเลข 4 จะได้รับการแก้ไขปัญหาที่ชัดเจน การแยกตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่ 20 C ก่อนวิเคราะห์ ฟีนอเนื้อหาทั้งหมดถูกประเมินโดยใช้ทดสอบ Folin-Ciocalteu ตามวิธีของ Ikram et al. (2009), มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ผลรวมของ200 มล.ของตัวอย่างแยกที่ผสมกับ ml 1.50 ของพับ 10รีเอเจนต์ Folin-Ciocalteu แตกออกในหลอดทดสอบ มีส่วนผสม
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3.4 5- Hydroxymethylfurfural (HMF)
สารประกอบ 5-hydroxymethylfurfural (HMF) เป็นสิ่งสำคัญ
ที่เป็นสื่อกลางที่มีการใช้กันอย่างแพร่หลายเป็นตัวบ่งชี้ของ Maillard
ปฏิกิริยา การตรวจสอบ HMF วิธีที่พัฒนาโดย
Rattanthanalerk, Chiewchan และ Srichumpoung (2005) ได้รับการ
ดัดแปลง หนึ่ง samplewas gramof ผสมกับ 20 มิลลิลิตรของเอทานอล 90%.
ส่วนผสมที่ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันเป็นเวลา 1 นาทีและต่อมา
หมุนเหวี่ยงที่ 18,000? กรัมเป็นเวลา 1 นาที สองมิลลิลิตรของสารละลายที่ถูก
ถ่ายโอนไปยังหลอดทดลองและผสมกับ 2 มิลลิลิตร 12 g / 100 ml ไตรคลอโร
กรด (TCA) และ 2 มิลลิลิตร 0.025 mol / L กรดด่างทั้งหมดที่ระเหย
(TBA) ส่วนผสมที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส 50 นาทีแล้ว
ระบายความร้อนด้วย ตัวอย่างที่ถูกยัดเยียดให้การวัดการดูดกลืนแสงที่
443 นาโนเมตรโดยใช้สเปก UV-VIS กราฟมาตรฐานได้รับการ
จัดตั้งขึ้นเพื่อวัดปริมาณความเข้มข้น HMF และผลที่ได้รับการ
แสดงใน mmol / L ต่อกรัมตัวอย่าง การเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสง
ที่เกี่ยวข้องกับการก่อตัวของ HMF.
2.3.5 Polyphenol oxidase (PPO) กิจกรรม
Polyphenol oxidase (PPO) กิจกรรมได้รับการวิเคราะห์โดยใช้
วิธีการ Nicoli, Elizalde, Pitotti และ Lerici (1991) มีบาง
การปรับเปลี่ยน เอนไซม์ที่ถูกสกัดโดยการผสมยาง 2 กรัมของ
ตัวอย่างกับ 10 มิลลิลิตร 0.1 mol / L ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ซิเตรต (pH 4.0)
และ 0.2 กรัมของ polyvinylpyrolidone (PVP ที่ไม่ละลายน้ำ) ที่จะผูกโพลีฟีน.
สารสกัดที่ได้ปั่นแล้วที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสที่ 19000? กรัมสำหรับ
20 นาที ใสถูกเก็บเป็นเอนไซม์ PPO
วิเคราะห์ก็ขึ้นอยู่กับการดูดซึมที่ 420 นาโนเมตรสีน้ำตาล
โพลิเมอร์เกิดขึ้นเมื่อ L-DOPA oxidizes ในการปรากฏตัวของ PPO
การแก้ปัญหา reactionwas เริ่มต้นโดยการผสม 20 มิลลิลิตรของเอนไซม์
สารสกัดที่มี 3 มล. ของกลางที่มีการบ่ม
0.1 mol / L บัฟเฟอร์ potassiumphosphate (pH 7.0) และ 1.5? 10? 3 mol / L
L-DOPA เป็นสารตั้งต้น กิจกรรม PPO ก็แสดงการเปลี่ยนแปลงใน
หน่วยการดูดกลืนต่อนาทีต่อกรัมตัวอย่าง.
2.3.6 รวมฟีนอล (TP) เนื้อหา
สกัดจากทั้งหมดฟีนอล (TP) และสารต้านอนุมูลอิสระจาก
มะละกอสดและแห้งได้รับการดำเนินการโดยใช้อาบน้ำอัลตราโซนิก
(รุ่น T 780 / H, Elma, Singen, เยอรมนี) มีอุณหภูมิอุณหภูมิ
ควบคุม ประมาณ 2 กรัมของตัวอย่างแห้งผสม
กับเอทานอล 95% ในอัตราส่วน 1: 5 ในขวดรูปกรวยที่ถูกห่อ
ด้วยกระดาษฟอยล์อลูมิเนียม ส่วนผสมที่เป็นสารสกัดทดลอง
ที่ 35 kHz และ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตัวอย่างถูกกรองผ่าน
Whatman ฉบับที่ 4 กระดาษที่จะได้รับการแก้ปัญหาที่ชัดเจน สกัด
ตัวอย่างถูกเก็บไว้ที่? 20? C ก่อนที่จะมีการวิเคราะห์ เนื้อหาฟีนอลทั้งหมด
ได้รับการประเมินโดยใช้วิธี Folin-Ciocalteu ขึ้นอยู่กับ
วิธีการของ Ikram และคณะ (2009) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย รวม
200 มล. ของกลุ่มตัวอย่างที่สกัดได้เมื่อผสมกับ 1.50 มิลลิลิตร 10 เท่า
เจือจางน้ำยา Folin-Ciocalteu ในหลอดทดลอง ส่วนผสมที่เป็น
การแปล กรุณารอสักครู่..
2.3.4 . 5-hydroxymethylfurfural ( hmf )
5-hydroxymethylfurfural ( hmf สารประกอบที่สำคัญคือ
กลางที่ใช้เป็นตัวบ่งชี้ของ
Maillard ปฏิกิริยา เพื่อตรวจสอบ hmf วิธีการที่พัฒนาขึ้นโดย
rattanthanalerk chiewchan , และ srichumpoung ( 2005 ) คือ
ดัดแปลง หนึ่ง gramof samplewas 20 มิลลิลิตร ผสมกับเอทานอล 90%
ผสมถูกบดนาน 1 นาที และภายหลัง
ระดับที่ 18 , 000 g 1 นาที 2 ml ของน่านคือ
ย้ายหลอดทดสอบและผสมกับ 2 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก
12 กรัม / 100 มิลลิลิตร ( TCA ) 2 มิลลิลิตร 0.025 โมลต่อลิตรเท่ากับกรด
( TBA ) ส่วนผสมจะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 40 C 50 นาทีแล้ว
เย็น ตัวอย่างการวัดการดูดกลืนแสงที่ถูกยัดเยียดให้
443 nm ใช้เหล็กวัสดุ เป็นรูปโค้งเป็น
ก่อตั้งขึ้นในช่วง hmf สมาธิและผลที่ได้คือ
แสดงออกในมิลลิโมล / ลิตร / กรัมของกลุ่มตัวอย่าง การเพิ่มขึ้นของค่า
คือที่เกี่ยวข้องกับการก่อตัวของ hmf .
2.3.5 . polyphenol oxidase ( PPO ) กิจกรรม
polyphenol oxidase ( PPO ) กิจกรรมถูก assayed โดยใช้วิธีของ นิโคลิ Elizalde ,
, pitotti และเลริชิ ( 1991 ) , กับบาง
ดัดแปลง เอนไซม์สกัดจากการเติม
2 กรัมตัวอย่าง 10 มิลลิลิตร 0.1 mol / l ซิเตรทฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 4.0 )
และ 0.2 กรัม polyvinylpyrolidone ( PVP ไม่ละลาย ) ผูก polyphenols
สกัดแล้ว ระดับที่ 4 C ที่ 19 , 000 g
20 นาทีน่านถูกรวบรวมเป็นเอนไซม์ดิบ การวิเคราะห์ PPO
ขึ้นอยู่กับการดูดซึมที่ 420 nm ของบราวน์
พอลิเมอร์ที่เกิดขึ้นเมื่อแอล - โดปา oxidizes ต่อหน้า PPO
โซลูชั่นที่พบว่า เริ่มจากการผสม 20 ml ของสารละลายสกัดเอนไซม์ดิบด้วย
3 มิลลิลิตรบ่มอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี
0.1 โมลต่อลิตร potassiumphosphate บัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 1.5 10 3 mol / l
แอล - โดปาเป็นสับสเตรท กิจกรรมของเอนไซม์ PPO ได้เป็นการเปลี่ยนแปลง
ค่าหน่วยต่อนาทีต่อกรัมตัวอย่าง .
2.3.6 . รวมฟีนอล ( TP ) เนื้อหา
การสกัดฟีนอลิกทั้งหมด ( TP ) และสารต้านอนุมูลอิสระจาก
มะละกอสดและแห้งมีการใช้อ่างอัลตราโซนิก (
T รุ่น 780 / ชั่วโมง เอ็ลม่าซินเกน , เยอรมนี ) ที่มีการควบคุมอุณหภูมิ
thermostatic . ตัวอย่างแห้งประมาณ 2 กรัมผสม
ด้วยเอทานอล 95% ในอัตราส่วน 1 : 5 ในขวดรูปกรวยที่ถูกห่อ
ด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ ส่วนผสมสกัดจากผลการทดลอง
35 kHz และ 50 C 2 H . ตัวอย่างถูกกรองผ่าน
whatman ไม่4 กระดาษที่จะได้รับโซลูชั่นที่ชัดเจน สกัด
ตัวอย่างเก็บไว้ที่ 20 C ก่อนการวิเคราะห์ รวมเนื้อหา ได้แก่ การใช้ฟีนอล
folin ciocalteu การทดสอบตามวิธีการ ikram et al . ( 2009 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย รวม
200 ml ของสกัดตัวอย่างที่ผสมกับ 1.50 มิลลิลิตรเจือจาง 10 เท่า
folin ciocalteu สารเคมีในหลอดทดลอง ส่วนผสมคือ
การแปล กรุณารอสักครู่..