The present work describes a simple

The present work describes a simple and sensitive spectrophotometric method based on the release of p-nitrophenyl butyrate (p-NPB) for the estimation of lipase activity. The method was optimized and validated in biphasic complex media containing methyl ricinoleate (MR) or olive mill wastewater (OMW), although it may be used for other biphasic media. Reaction mixtures containing substrate (2.63 mM p-NPB in sodium acetate buffer, 0.05 M and pH 5.6, with 4% (v/v) Triton X-100) and lipase are incubated at 37 °C during 15 minutes. After this time, 2 mL of acetone are added to stop the reaction and the corresponding absorbances are measured at 405 nm in a microplate reader. A linear response was obtained for Candida rugosalipase concentrations in the range of 0.0054 to 0.1 g L−1 and 0.093 to 0.5 g L−1 for MR and OMW media, respectively. The method revealed to be more sensitive for MR medium. This conclusion was corroborated by the detection and quantification limits, which were smaller for MR than for OMW medium. The method is precise for both tested media, according to the Horwitz criterion. Besides the simplicity of this method, it is sensitive and precise, and could be adopted for routine analysis, as a tool for screening and detection of lipase activity. In addition, the fact of measuring the absorbances of the samples in a microplate reader, allows to analyze a great number of samples at the same time and to achieve a considerable time saving.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

งานนำเสนออธิบายง่าย และสำคัญ spectrophotometric วิธีตามของ p nitrophenyl butyrate (p-NPB) สำหรับการประเมินกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปส วิธีการปรับให้เหมาะสม และตรวจสอบสื่อที่ซับซ้อน biphasic ที่ประกอบด้วย methyl ricinoleate (MR) หรือบำบัดสีมะกอก (OMW), แม้ว่ามันอาจใช้สื่ออื่น ๆ biphasic น้ำยาผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วยพื้นผิว (NPB p 2.63 มม.ในโซเดียม acetate บัฟเฟอร์ 0.05 M และ pH 5.6, 4% (v/v) ไตรตั้น X 100) และเอนไซม์ไลเปสจะ incubated ที่ 37 ° C ในช่วง 15 นาที เวลา เพิ่ม 2 mL ของอะซีโตนเพื่อหยุดปฏิกิริยา และ absorbances ที่สอดคล้องกันที่วัดที่ 405 nm ใน microplate อ่าน การตอบสนองเชิงเส้นได้รับสำหรับแคน rugosalipase ความเข้มข้นในช่วง 0.0054-0.1 g L−1 และ 0.093-0.5 g L−1 นายและ OMW สื่อ ตามลำดับ วิธีการเปิดเผยน้อยมากสำหรับนายปานกลาง ข้อสรุปนี้ถูก corroborated โดยการตรวจจับและนับขีดจำกัด ซึ่งมีขนาดเล็กสำหรับนายกว่า OMW กลาง วิธีการได้แม่นยำทั้งสื่อทดสอบ ตามเกณฑ์ Horwitz นอกจากความเรียบง่ายของวิธีการนี้ มันมีความละเอียดอ่อน และแม่นยำ และสามารถนำการวิเคราะห์งานประจำ เป็นเครื่องมือในการคัดกรองและตรวจพบกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปส ข้อเท็จจริงของวัด absorbances อย่างในอ่าน microplate ช่วยให้ การวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนมากในเวลาเดียวกัน และ เพื่อให้ประหยัดเวลามาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำงานในปัจจุบันจะอธิบายวิธีสเปกง่ายและที่สำคัญขึ้นอยู่กับการเปิดตัวของพี Nitrophenyl butyrate (P-NPB) สำหรับการประมาณของกิจกรรมไลเปส วิธีการที่ดีที่สุดและได้รับการตรวจสอบในสื่อที่ซับซ้อน biphasic ที่มีเมธิล ricinoleate (MR) หรือน้ำเสียโรงงานมะกอก (OMW) แม้ว่ามันอาจจะใช้สำหรับสื่อ biphasic อื่น ๆ ผสมปฏิกิริยาที่มีพื้นผิว (2.63 มิลลิพี NPB โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์, 0.05 M และพีเอช 5.6, 4% (v / v) Triton X-100) และเอนไซม์ไลเปสได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในช่วง 15 นาที หลังจากเวลานี้ 2 มิลลิลิตรอะซิโตนมีการเพิ่มเพื่อหยุดปฏิกิริยาและ absorbances ที่สอดคล้องกันที่วัดที่ 405 นาโนเมตรในเครื่องอ่าน microplate การตอบสนองเชิงเส้นที่ได้รับสำหรับ Candida rugosalipase ความเข้มข้นในช่วงของ 0.0054-.1 กรัม L-1 และ 0.093-0.5 กรัม L-1 สำหรับนายและสื่อ OMW ตามลำดับ วิธีการที่จะเผยให้เห็นความสำคัญมากขึ้นสำหรับการขนาดกลางนาย ข้อสรุปนี้ได้รับการยืนยันจากการตรวจสอบและข้อ จำกัด ปริมาณซึ่งมีขนาดเล็กกว่าสำหรับ MR กลาง OMW วิธีการที่ถูกต้องสำหรับการทดสอบทั้งสื่อตามเกณฑ์ Horwitz นอกจากความเรียบง่ายของวิธีนี้ก็เป็นสิ่งที่มีความสำคัญและมีความแม่นยำและสามารถจะนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ประจำเป็นเครื่องมือสำหรับการคัดกรองและการตรวจสอบของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปส นอกจากนี้ความเป็นจริงในการวัด absorbances ของกลุ่มตัวอย่างในการอ่าน microplate ที่จะช่วยให้การวิเคราะห์จำนวนมากของกลุ่มตัวอย่างในเวลาเดียวกันและเพื่อให้เกิดการประหยัดเวลามาก

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

งานวิจัยนี้อธิบายง่าย และผู้เรียนเกิดไว ขึ้นอยู่กับรุ่นของ p-nitrophenyl บิว ( p-npb ) ค่ากิจกรรมของเอนไซม์ . วิธีที่ดีที่สุดและตรวจสอบในสื่อแบบ biphasic ซับซ้อนประกอบด้วยเมทิล ( MR ) หรือมะกอกน้ำเสียโรงงาน ( omw ) ถึงแม้ว่ามันอาจจะใช้สำหรับ biphasic สื่ออื่น ๆ ปฏิกิริยาของของผสมที่มีพื้นผิว ( 263 มม. p-npb ในโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ 0.01 m และ pH 5.6 กับ 4 เปอร์เซ็นต์ ( v / v ) Triton X-100 ) และไลเปสจะบ่มที่ 37 ° C ในช่วง 15 นาที หลังจากเวลานี้ 2 มิลลิลิตร สำหรับเพิ่ม เพื่อหยุดปฏิกิริยาและ absorbances ที่สอดคล้องกันเป็นวัดที่ 405 nm ในการอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . การตอบสนองเชิงเส้นได้สำหรับ Candida rugosalipase ความเข้มข้นในช่วง 0.0054 0.1 g L − 1 และ 0093 0.5 g L − 1 สำหรับคุณและ omw สื่อตามลำดับ วิธีการเปิดเผยจะอ่อนไหวมากสำหรับคุณกลาง ข้อสรุปนี้ถูกยืนยันโดยการตรวจหา และ ปริมาณ จำกัด ซึ่งมีขนาดเล็กสำหรับคุณกว่า omw ปานกลาง วิธีทดสอบมีความแม่นยำทั้งสื่อ ตามเกณฑ์ Horwitz . นอกจากความเรียบง่ายของวิธีนี้ก็มีความไวและแม่นยำและสามารถนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ตามปกติ เป็นเครื่องมือในการคัดกรองและตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์ . นอกจากนี้ เรื่องของการวัด absorbances ของกลุ่มตัวอย่างในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย เป็นผู้อ่านช่วยวิเคราะห์ได้หลายอย่างในเวลาเดียวกัน และบรรลุผลมากประหยัดเวลา