- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Samples and Chemicals. Five cultiva
Samples and Chemicals. Five cultivars of black rice (Heugjinjubyeo,
BR-1; Heugseolbyeo, BR-2; Josengheugchalbyeo, BR-3; Heugnambyeo,
BR-4; and Heughyangbyeo, BR-5), two cultivars of red rice (Hongjinjubyeo, RR-1; and Jeogjinjubyeo, RR-2), and one cultivar of white rice
(Hwasungbyeo, WR-1) were used in this study. All of the rice grains were
harvested at the National Institute of Crop Science farm in 2008. They
were manually hulled and ground to obtain a fine powder using a cyclone
mixer mill (HMF-590, Hanil, Seoul, Korea) and a mortar and pestle. The
milled rice powders were kept at -80 C before extraction. Apigenin,
kaempferol, quercetin, and β-apo-80-carotenal were purchased from
Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Lutein, β-carotene, and zeaxanthin
were obtained from CaroteNature (Lupsingen, Switzerland). Cyanidin-3-
O-glucoside and peonidin-3-O-glucoside were purchased from Extrasynthese (Genay, France).
Extraction and Analysis of Flavonoids. Extraction, separation, and
measurement of flavonoid aglycones by high-performance liquid chromatography (HPLC) were performed as described by our group (15). Flavonoids were released and hydrolyzed from the powdered rice (100 mg,
approximately five grains) by adding 1.2 mL of 50% MeOH containing
1.2 M HCl at 80 C in a water bath for 2 h. The crude suspensions were
centrifuged at 10000g at 4 C for 5 min. The crude extracts were passed
through 0.22 μm Teflon polytetrafluoroethylene (PTFE) syringe filters
and injected directly into the HPLC column. Flavonoid aglycones were
separated on a C18 column (250 4.6 mm, 5 μm, Inertsil ODS-3, GL
Sciences, Tokyo, Japan) by HPLC (Shimadzu, Kyoto, Japan) equipped
with a photodiode array (PDA) detector. Elution was performed using a
binary gradient of 0.1% formic acid in water (mobile phase A) and 0.1%
formic acid in acetonitrile (mobile phase B) according to the following
program: 0 min, 95% A/5% B; 30 min, 60% A/40% B; 45 min, 50% A/
50% B; 50 min, 0% A/100% B; 60 min, 0% A/100% B; 62 min, 95% A/
5% B; and 70 min, 95% A/5% B. The flow rate was 1.0 mL/min, and the
column temperature was 40C. The ultraviolet-visible (UV-vis) detector
wavelength was set at 364 nm. For quantification purposes, a mixture of
three flavonoid standards (apigenin, kaempferol, and quercetin) was used
to create a calibration curve of the individual flavonoids. For identification
of kaempferol and quercetin in WR-1 cultivar, the extracts were separated
on a Waters (Milford, MA) symmetry C18 (150 2.1 mm, 5 μm) column
using a HPLC system. The elution buffer and column temperature were
the same as described above. The following elution program was applied:
0 min, 100% A/0% B; 25 min, 0% A/100% B; 35 min, 0% A/100% B;
37 min, 100% A/0% B; and 47 min, 100% A/0% B. The flow rate was
0.2 mL/min. The eluate was diverted to a quadrupole mass spectrometer
(LC/MS2010A, Shimadzu) equipped with a negative electrospray ionization source. The spray voltage was set to 4.5 kV, and the capillary temperature was set to 250 C.
Extraction of anthocyanin was performed according to a slightly
modification of the method by Abdel-Aal et al. (9). A total of 50 mg of
sample was extracted with 0.8 mL of 85% methanol acidified with 1.0 N
HCl followed by sonication for 1 min. The extracts were then incubated at
Figure 1. HPLC chromatograms of (A) flavonoid aglycones, (B) anthocyanins, and (C) carotenoids in rice seed (BR-1). The peaks correspond to the
following: 1, quercetin; 2, apigenin; 3, kaempferol; 4, cyanidin-3-O-glucoside; 5, peonidin-3-O-glucoside; 6, lutein, 7, zeaxanthin; 8, β-carotene; and IS, internal
standard (β-apo-80-carotenal).
12806 J. Agric. Food Chem., Vol. 58, No. 24, 2010 Kim et al.
38C for 30 min with a mixing frequency of 500 rpm using a Thermomixer
compact (Eppendorf, Hamburg, Germany). The crude suspension was
centrifuged at 10000g at 4 C for 5 min, and the crude extract was passed
through a 0.22 μm Teflon PTFE syringe filter before HPLC analysis.
Anthocyanin was separated on a C18 column (250 4.6 mm, 5 μm, Inertsil
ODS-3, GL Sciences, Tokyo, Japan) by HPLC as described above. Elution
was performed using a binary gradient of 0.1% formic acid in water
(mobile phase A) and 0.1% formic acid in acetonitrile (mobile phase B)
according to the following program: 0 min, 95% A/5% B; 40 min, 50% A/
50% B; 42 min, 0% A/100% B; 52 min, 0% A/100% B; 54 min, 95% A/
5% B; and 64 min, 95% A/5% B. The flow rate was 1.0 mL/min, and the
column temperature was 40 C. The UV-vis detector wavelength was set
at 520 nm. The anthocyanin contents were calculated by HPLC peak areas
compared to external standard calibration curves. The linear equations
and regression coefficients for cyanidin-3-O-glucoside and peonidin-3-Oglucoside were y = 12100x - 934.5, with r = 0.9967, and y = 22981x -
3972, with r = 0.9999, respectively.
Extraction and Analysis of Carotenoids. The extraction method
used for carotenoid analysis was similar to that described elsewhere (16).
Briefely, carotenoids were released from the rice samples (0.6 g) by adding
3 mL of ethanol containing 0.1% ascorbic acid (w/v), vortex mixing for
20 s, and placing in a water bath at 85C for 5 min. The carotenoid extract
was saponified with potassium hydroxide (120 μL, 80%, w/v) at the 85 C
water bath for 10 min. After saponification, samples were placed immediately on ice and cold deionized water (1.5 mL) was added. β-Apo-80-
carotenal (0.05 mL, 25 μg/mL) was added as an internal standard. Carotenoids were extracted twice with hexane (1.5 mL) by centrifugation at
1200g to separate the layers. Aliquots of the extracts were dried under
a stream of nitrogen and redissolved in 50:50 (v/v) dichloromethane/
methanol before analysis by HPLC. The carotenoids were separated on a
C30 YMC column (250 4.6 mm, 3 μm, Waters Corporation, Milford,
MA) by HPLC as described above. Chromatograms were generated at
450 nm. Solvent A consisted of methanol/water (92:8, v/v) with 10 mM
ammonium acetate. Solvent B consisted of 100% methyl tert-butyl ether.
Gradient elution was performed at 1 mL/min under the following
conditions: 0 min, 83% A/17% B; 23 min, 70% A/30% B; 29 min, 59%
A/41% B; 35 min, 30% A/70% B; 40 min, 30% A/70% B; 44 min, 83% A/
17% B; and 55 min, 83% A/17% B. For quantification purposes,
calibration curves were drawn by plotting at four different concentrations
of carotenoid standards according to the peak area ratios with β-apo-
80-carotenal. The responses were linear in the following ranges: 0.03-
0.25 μg/mL (y = 0.1048x þ 0.0017, with r = 0.9846), 0.03-0.25 μg/mL
(y = 0.0656x þ 0.0010, with r = 0.9896), and 0.03-0.50 μg/mL (y =
0.3340x þ 0.0051, with r = 0.9968) for β-carotene, lutein, and zeaxanthin,
respectively.
Statistical Analysis. All analyses were carried out at least in triplicate.
Experimental data were analyzed by the analysis of variance (ANOVA),
and the significant differences among means were determined by Duncan’s
multiple range test. Correlation analysis and principal component analysis
(PCA) of the results were performed using SAS 9.1 (SAS Institute, Cary,
NC). PCA was performed on the basis of the correlation matrix and the
calculated eigenvalues and eigenvectors. The principal components with
eigenvalues >1.0 were extracted. The output from PCA consisted of score
plots to visualize the contrast between different samples and loading plots
to explain the reason for cluster separation. Pearson correlation analysis
was carried out among the contents of eight metabolites.
BR-1; Heugseolbyeo, BR-2; Josengheugchalbyeo, BR-3; Heugnambyeo,
BR-4; and Heughyangbyeo, BR-5), two cultivars of red rice (Hongjinjubyeo, RR-1; and Jeogjinjubyeo, RR-2), and one cultivar of white rice
(Hwasungbyeo, WR-1) were used in this study. All of the rice grains were
harvested at the National Institute of Crop Science farm in 2008. They
were manually hulled and ground to obtain a fine powder using a cyclone
mixer mill (HMF-590, Hanil, Seoul, Korea) and a mortar and pestle. The
milled rice powders were kept at -80 C before extraction. Apigenin,
kaempferol, quercetin, and β-apo-80-carotenal were purchased from
Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). Lutein, β-carotene, and zeaxanthin
were obtained from CaroteNature (Lupsingen, Switzerland). Cyanidin-3-
O-glucoside and peonidin-3-O-glucoside were purchased from Extrasynthese (Genay, France).
Extraction and Analysis of Flavonoids. Extraction, separation, and
measurement of flavonoid aglycones by high-performance liquid chromatography (HPLC) were performed as described by our group (15). Flavonoids were released and hydrolyzed from the powdered rice (100 mg,
approximately five grains) by adding 1.2 mL of 50% MeOH containing
1.2 M HCl at 80 C in a water bath for 2 h. The crude suspensions were
centrifuged at 10000g at 4 C for 5 min. The crude extracts were passed
through 0.22 μm Teflon polytetrafluoroethylene (PTFE) syringe filters
and injected directly into the HPLC column. Flavonoid aglycones were
separated on a C18 column (250 4.6 mm, 5 μm, Inertsil ODS-3, GL
Sciences, Tokyo, Japan) by HPLC (Shimadzu, Kyoto, Japan) equipped
with a photodiode array (PDA) detector. Elution was performed using a
binary gradient of 0.1% formic acid in water (mobile phase A) and 0.1%
formic acid in acetonitrile (mobile phase B) according to the following
program: 0 min, 95% A/5% B; 30 min, 60% A/40% B; 45 min, 50% A/
50% B; 50 min, 0% A/100% B; 60 min, 0% A/100% B; 62 min, 95% A/
5% B; and 70 min, 95% A/5% B. The flow rate was 1.0 mL/min, and the
column temperature was 40C. The ultraviolet-visible (UV-vis) detector
wavelength was set at 364 nm. For quantification purposes, a mixture of
three flavonoid standards (apigenin, kaempferol, and quercetin) was used
to create a calibration curve of the individual flavonoids. For identification
of kaempferol and quercetin in WR-1 cultivar, the extracts were separated
on a Waters (Milford, MA) symmetry C18 (150 2.1 mm, 5 μm) column
using a HPLC system. The elution buffer and column temperature were
the same as described above. The following elution program was applied:
0 min, 100% A/0% B; 25 min, 0% A/100% B; 35 min, 0% A/100% B;
37 min, 100% A/0% B; and 47 min, 100% A/0% B. The flow rate was
0.2 mL/min. The eluate was diverted to a quadrupole mass spectrometer
(LC/MS2010A, Shimadzu) equipped with a negative electrospray ionization source. The spray voltage was set to 4.5 kV, and the capillary temperature was set to 250 C.
Extraction of anthocyanin was performed according to a slightly
modification of the method by Abdel-Aal et al. (9). A total of 50 mg of
sample was extracted with 0.8 mL of 85% methanol acidified with 1.0 N
HCl followed by sonication for 1 min. The extracts were then incubated at
Figure 1. HPLC chromatograms of (A) flavonoid aglycones, (B) anthocyanins, and (C) carotenoids in rice seed (BR-1). The peaks correspond to the
following: 1, quercetin; 2, apigenin; 3, kaempferol; 4, cyanidin-3-O-glucoside; 5, peonidin-3-O-glucoside; 6, lutein, 7, zeaxanthin; 8, β-carotene; and IS, internal
standard (β-apo-80-carotenal).
12806 J. Agric. Food Chem., Vol. 58, No. 24, 2010 Kim et al.
38C for 30 min with a mixing frequency of 500 rpm using a Thermomixer
compact (Eppendorf, Hamburg, Germany). The crude suspension was
centrifuged at 10000g at 4 C for 5 min, and the crude extract was passed
through a 0.22 μm Teflon PTFE syringe filter before HPLC analysis.
Anthocyanin was separated on a C18 column (250 4.6 mm, 5 μm, Inertsil
ODS-3, GL Sciences, Tokyo, Japan) by HPLC as described above. Elution
was performed using a binary gradient of 0.1% formic acid in water
(mobile phase A) and 0.1% formic acid in acetonitrile (mobile phase B)
according to the following program: 0 min, 95% A/5% B; 40 min, 50% A/
50% B; 42 min, 0% A/100% B; 52 min, 0% A/100% B; 54 min, 95% A/
5% B; and 64 min, 95% A/5% B. The flow rate was 1.0 mL/min, and the
column temperature was 40 C. The UV-vis detector wavelength was set
at 520 nm. The anthocyanin contents were calculated by HPLC peak areas
compared to external standard calibration curves. The linear equations
and regression coefficients for cyanidin-3-O-glucoside and peonidin-3-Oglucoside were y = 12100x - 934.5, with r = 0.9967, and y = 22981x -
3972, with r = 0.9999, respectively.
Extraction and Analysis of Carotenoids. The extraction method
used for carotenoid analysis was similar to that described elsewhere (16).
Briefely, carotenoids were released from the rice samples (0.6 g) by adding
3 mL of ethanol containing 0.1% ascorbic acid (w/v), vortex mixing for
20 s, and placing in a water bath at 85C for 5 min. The carotenoid extract
was saponified with potassium hydroxide (120 μL, 80%, w/v) at the 85 C
water bath for 10 min. After saponification, samples were placed immediately on ice and cold deionized water (1.5 mL) was added. β-Apo-80-
carotenal (0.05 mL, 25 μg/mL) was added as an internal standard. Carotenoids were extracted twice with hexane (1.5 mL) by centrifugation at
1200g to separate the layers. Aliquots of the extracts were dried under
a stream of nitrogen and redissolved in 50:50 (v/v) dichloromethane/
methanol before analysis by HPLC. The carotenoids were separated on a
C30 YMC column (250 4.6 mm, 3 μm, Waters Corporation, Milford,
MA) by HPLC as described above. Chromatograms were generated at
450 nm. Solvent A consisted of methanol/water (92:8, v/v) with 10 mM
ammonium acetate. Solvent B consisted of 100% methyl tert-butyl ether.
Gradient elution was performed at 1 mL/min under the following
conditions: 0 min, 83% A/17% B; 23 min, 70% A/30% B; 29 min, 59%
A/41% B; 35 min, 30% A/70% B; 40 min, 30% A/70% B; 44 min, 83% A/
17% B; and 55 min, 83% A/17% B. For quantification purposes,
calibration curves were drawn by plotting at four different concentrations
of carotenoid standards according to the peak area ratios with β-apo-
80-carotenal. The responses were linear in the following ranges: 0.03-
0.25 μg/mL (y = 0.1048x þ 0.0017, with r = 0.9846), 0.03-0.25 μg/mL
(y = 0.0656x þ 0.0010, with r = 0.9896), and 0.03-0.50 μg/mL (y =
0.3340x þ 0.0051, with r = 0.9968) for β-carotene, lutein, and zeaxanthin,
respectively.
Statistical Analysis. All analyses were carried out at least in triplicate.
Experimental data were analyzed by the analysis of variance (ANOVA),
and the significant differences among means were determined by Duncan’s
multiple range test. Correlation analysis and principal component analysis
(PCA) of the results were performed using SAS 9.1 (SAS Institute, Cary,
NC). PCA was performed on the basis of the correlation matrix and the
calculated eigenvalues and eigenvectors. The principal components with
eigenvalues >1.0 were extracted. The output from PCA consisted of score
plots to visualize the contrast between different samples and loading plots
to explain the reason for cluster separation. Pearson correlation analysis
was carried out among the contents of eight metabolites.
0/5000
ตัวอย่างและสารเคมี พันธุ์ข้าวดำ (Heugjinjubyeo, 5BR-1 Heugseolbyeo, BR-2 Josengheugchalbyeo, BR-3 HeugnambyeoBR-4 และ Heughyangbyeo, BR-5), สองพันธุ์ข้าวแดง (Hongjinjubyeo, Jeogjinjubyeo, RR 2 และ RR-1 ), และ cultivar หนึ่งของข้าว(Hwasungbyeo เกิดจาก 1) ถูกใช้ในการศึกษานี้ ธัญพืชข้าวทั้งหมดได้เก็บเกี่ยวที่ฟาร์มสถาบันแห่งชาติของพืชวิทยาศาสตร์ในปี 2551 พวกเขาด้วยตนเอง hulled และดินรับละอองใช้พายุเครื่องผสมสี (HMF-590, Hanil โซล เกาหลี) และ โกร่ง ที่ผงข้าวสารที่ถูกเก็บไว้ที่-80 C ก่อนแยก Apigeninkaempferol, quercetin และβ-อาโป-80-carotenal ซื้อจากซิกเคมี จำกัด (St. Louis, MO) ลูทีน β-แคโรทีน และ zeaxanthinได้รับจาก CaroteNature (Lupsingen สวิตเซอร์แลนด์) Cyanidin-3 -O glucoside และ peonidin-3-O-glucoside ที่ซื้อจาก Extrasynthese (Genay ฝรั่งเศส)การสกัดและการวิเคราะห์ของ Flavonoids แยก แยก และวัด aglycones flavonoid ด้วยประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ตามกลุ่มของเรา (15) ออก และ hydrolyzed จากข้าวบดละเอียด (100 มิลลิกรัม flavonoidsประมาณห้าธัญพืช) โดยเพิ่ม 1.2 mL ของ 50% ทานอประกอบด้วย1.2 M HCl ที่ 80 C ในห้องน้ำสำหรับ 2 h บริการน้ำมันได้centrifuged ที่ 10000g ที่ C 4 ใน 5 นาที สารสกัดจากน้ำมันถูกส่งผ่านกรองผ่าน polytetrafluoroethylene 0.22 μm เทฟลอน (PTFE) เข็มและฉีดเข้าไปในคอลัมน์ HPLC มี flavonoid aglyconesแยกจากกันในคอลัมน์ C18 (250 4.6 มม. 5 μm, ODS Inertsil-3, GLวิทยาศาสตร์ โตเกียว ญี่ปุ่น) โดย HPLC (Shimadzu เกียวโต ญี่ปุ่น) พร้อมด้วยเครื่องตรวจจับเรย์ (PDA) photodiode Elution ถูกดำเนินการโดยใช้การการไล่ระดับสีแบบไบนารีของ 0.1% กรดน้ำ (โมบายระยะ A) และ 0.1%กรดใน acetonitrile (โมบายระยะ B) ตามโปรแกรม: 0 นาที 95% A/5% B 30 นาที 60% A/40% B 45 นาที 50% A /50% B 50 นาที 0% A/100% B 60 นาที 0% A/100% B นาที 62, 95% A /5% B นาที 70, 95% และบี A/5% อัตราการไหล 1.0 mL/min และอุณหภูมิของคอลัมน์ถูกค. 40 สามารถมองเห็นรังสีอัลตราไวโอเลต (UV-vis) เครื่องตรวจจับมีการตั้งค่าความยาวคลื่นที่ 364 nm สำหรับการนับ การผสมผสานระหว่างใช้มาตรฐาน flavonoid 3 (apigenin, kaempferol และ quercetin)การสร้างเส้นโค้งเทียบของ flavonoids ในแต่ละ สำหรับการระบุkaempferol และ quercetin ใน cultivar เกิดจาก 1 สารสกัดถูกแยกออกสมมาตรน้ำ (ลฟอร์ด MA) C18 (150 2.1 mm, 5 μm) ในคอลัมน์ใช้ระบบ HPLC บัฟเฟอร์ elution และอุณหภูมิของคอลัมน์เหมือนกับที่อธิบายไว้ข้างต้น ใช้โปรแกรม elution ดังต่อไปนี้:0 นาที 100% A/0% B 25 นาที 0% A/100% B 35 นาที 0% A/100% B37 นาที 100% A/0% B 47 นาที 100% และบี A/0% อัตราการไหลได้0.2 mL/นาที Eluate ถูกเบี่ยงเบนไปเป็น quadrupole โดยรวมสเปกโตรมิเตอร์(LC/MS2010A, Shimadzu) เพียบพร้อมไป ด้วยแหล่ง ionization วิธีพ่นละอองไฟฟ้าลบ แรงดันไฟฟ้าสเปรย์ถูกตั้งค่าให้ 4.5 kV และเส้นเลือดฝอยอุณหภูมิถูกตั้งค่าให้ค. 250ทำการสกัดมีโฟเลทสูงตามตัวเล็กน้อยการปรับเปลี่ยนวิธีการโดย Abdel Aal et al. (9) จำนวน 50 มก.ตัวอย่างที่สกัด ด้วย 0.8 mL ของเมทานอล 85% acidified กับ 1.0 NHCl ตาม sonication ใน 1 นาที สารสกัดได้จากนั้น incubated ที่รูปที่ 1 Chromatograms HPLC aglycones flavonoid (A), (B) anthocyanins และ (C) carotenoids ในเมล็ดข้าว (BR 1) แห่งที่สอดคล้องกับการต่อไปนี้: 1, quercetin 2, apigenin 3, kaempferol 4, cyanidin-3-O-glucoside 5, peonidin-3-O-glucoside 6, 7, zeaxanthin ลูทีน 8 β-แคโรทีน IS ภายในและมาตรฐาน (β-อาโป-80-carotenal)12806 J. Agric. อาหาร Chem., 58 ปี หมายเลข 24, 2010 Kim et alC 38 ใน 30 นาทีด้วยความถี่ 500 rpm โดยใช้ Thermomixer ผสมคอมแพค (Eppendorf ฮัมบูร์ก เยอรมนี) การระงับน้ำมันถูกcentrifuged ที่ 10000 กรัมที่ 4 C ใน 5 นาที และส่งสารสกัดหยาบผ่าน 0.22 μm เทฟลอน PTFE เข็มตัวก่อนวิเคราะห์ HPLCมีโฟเลทสูงถูกแยกจากกันในคอลัมน์ C18 (250 4.6 มม. 5 μm, InertsilODS-3, GL วิทยาศาสตร์ โตเกียว ญี่ปุ่น) โดย HPLC ที่อธิบายข้างต้น Elutionทำโดยใช้การไล่ระดับสีแบบไบนารีของ 0.1% กรดในน้ำ(โมบายระยะ A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (โมบายระยะ B)ตามโปรแกรมต่อไปนี้: ขั้นต่ำ 0, 95% A/5% B นาที 40, 50% A /50% B 42 นาที 0% A/100% B นาที 0% A/100% B 54 นาที 95% A /5% B นาที 64, 95% และบี A/5% อัตราการไหล 1.0 mL/min และอุณหภูมิของคอลัมน์ถูกค. 40 ตั้งค่าความยาวคลื่นตรวจจับรังสียูวีวิที่ 520 nm เนื้อหามีโฟเลทสูงได้ตามพื้นที่สูง HPLCเมื่อเทียบกับเส้นโค้งการปรับเทียบมาตรฐานภายนอก สมการเชิงเส้นและสัมประสิทธิ์การถดถอยสำหรับ cyanidin-3-O-glucoside และ peonidin-3-Oglucoside y = 12100 x - 934.5 กับ r = 0.9967 และ y = 22981 x -3972 กับ r = 0.9999 ตามลำดับการสกัดและการวิเคราะห์ของ Carotenoids สกัดด้วยวิธีการใช้สำหรับวิเคราะห์ carotenoid ที่ ที่อธิบายอื่น ๆ (16)Briefely, carotenoids ถูกปล่อยออกมาจากตัวอย่างข้าว (0.6 กรัม) โดยการเพิ่ม3 mL ของเอทานอลประกอบด้วยกรด 0.1% แอสคอร์บิค (w/v), vortex ผสมสำหรับ20 s และวางในอ่างน้ำที่ C 85 สำหรับ 5 นาที สารสกัด carotenoidมี saponified กับโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ (120 μL, 80%, w/v) ที่ 85 Cห้องน้ำสำหรับ 10 นาที หลังจากสะพอนิฟิ ตัวอย่างถูกวางทันทีบนน้ำแข็ง และมีเพิ่มน้ำ deionized เย็น (1.5 mL) Β-อาโป-80 -carotenal (0.05 mL, μg 25 mL) ถูกเพิ่มเป็นการภายใน Carotenoids ที่สกัด ด้วยเฮกเซน (1.5 mL) สอง โดย centrifugation ที่1200 กรัมการแยกชั้น Aliquots ของสารสกัดได้แห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจน และ redissolved ใน dichloromethane คนละครึ่ง (v/v) /เมทานอลก่อนการวิเคราะห์ด้วย HPLC Carotenoids ถูกแยกจากกันในการคอลัมน์ C30 YMC (250 4.6 มม. 3 μm บริษัทน้ำ ลฟอร์ดMA) โดย HPLC ที่อธิบายข้างต้น Chromatograms สร้างขึ้นที่450 nm ตัวทำละลาย A ประกอบด้วยเมทานอล/น้ำ (92:8, v/v) 10 มม.acetate แอมโมเนีย ตัวทำละลาย B ประกอบด้วยอีเทอร์ 100% methyl tert-ด...ทำการ elution ไล่ระดับสีที่ 1 mL/min ภายใต้ต่อไปนี้เงื่อนไข: 0 นาที 83% A/17% B 23 นาที 70% A/30% B 29 นาที 59%A/41% B 35 นาที 30% A/70% B นาที 40, 30% A/70% B 44 นาที 83% A /17% B 55 นาที 83% และบี A/17% ประสงค์ นับเทียบเส้นโค้งถูกวาด โดยพล็อตที่ความเข้มข้นแตกต่างกัน 4มาตรฐาน carotenoid ตามอัตราส่วนพื้นที่ peak กับβ-อาโป -80 carotenal การตอบสนองไม่เชิงเส้นในช่วงต่อไปนี้: 0.03 -Μg 0.25 mL (y = 0.1048 x þ 0.0017 กับ r = 0.9846), 0.03 0.25 μg/mL(y = 0.0656 x þ 0.0010 กับ r = 0.9896), และ 0.03-0.50 μg/mL (y =0.3340 x þ 0.0051 กับ r = 0.9968) β-แคโรทีน ลูทีน และ zeaxanthinตามลำดับการวิเคราะห์ทางสถิติ วิเคราะห์ทั้งหมดที่ดำเนินการน้อยใน triplicateมีวิเคราะห์ข้อมูลทดลอง โดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (การวิเคราะห์ความแปรปรวน),และความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญระหว่างวิธีที่กำหนด โดยของดันแคนหลายช่วงทดสอบ การวิเคราะห์สหสัมพันธ์และวิเคราะห์ส่วนประกอบหลัก(PCA) ผลดำเนินการใช้ 9.1 SAS (SAS สถาบัน แครีแกรนต์NC) สมาคมได้ดำเนินการโดยใช้เมตริกซ์สหสัมพันธ์และจากการคำนวณเวกเตอร์และลักษณะเฉพาะ ส่วนประกอบหลักด้วยเวกเตอร์ > 1.0 ถูกสกัด จากสมาคมประกอบด้วยคะแนนเห็นภาพความแตกต่างระหว่างตัวอย่างแตกต่างและการโหลดผืนผืนอธิบายเหตุผลของการแยกคลัสเตอร์ วิเคราะห์ความสัมพันธ์เพียร์สันได้ดำเนินการระหว่างเนื้อหาของ metabolites แปด
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตัวอย่างและเคมีภัณฑ์ ห้าพันธุ์ข้าวสีดำ (Heugjinjubyeo,
BR-1; Heugseolbyeo, BR-2; Josengheugchalbyeo, BR-3; Heugnambyeo,
BR-4 และ Heughyangbyeo, BR-5) สองสายพันธุ์ของข้าวแดง (Hongjinjubyeo, RR-1; และ Jeogjinjubyeo, RR-2) และพันธุ์หนึ่งของข้าวขาว
(Hwasungbyeo, WR-1) ถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ ทั้งหมดของเมล็ดข้าวที่เก็บเกี่ยวที่สถาบันแห่งชาติของฟาร์มวิทยาศาสตร์พืชในปี 2008 พวกเขาได้รับปลาด้วยตนเองและพื้นดินที่จะได้รับเป็นผงละเอียดใช้พายุหมุนโรงงานผสม(HMF-590, Hanil, กรุงโซลประเทศเกาหลี) และโกร่งบดยา . ผงข้าวสารถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสก่อนที่จะสกัด apigenin, เฟอรอล, quercetin และβ-APO-80-carotenal ที่ซื้อมาจากSigma เคมี จำกัด (เซนต์หลุยส์) ลูทีน, βแคโรทีนและซีแซนทีนที่ได้รับจาก CaroteNature (Lupsingen วิตเซอร์แลนด์) cyanidin 3-O-glucoside และ peonidin-3-O-glucoside ที่ซื้อมาจาก Extrasynthese (Genay ฝรั่งเศส). การสกัดและการวิเคราะห์ Flavonoids การสกัดแยกและการวัด aglycones flavonoid โดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยกลุ่มของเรา (15) flavonoids ได้รับการปล่อยตัวและไฮโดรไลซ์จากข้าวผง (100 มิลลิกรัมประมาณห้าธัญพืช) โดยการเพิ่ม 1.2 มิลลิลิตรเมธานอล 50% ที่มี1.2 M HCl ที่ 80 องศาเซลเซียสในอ่างน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมง สารแขวนลอยน้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สารสกัดน้ำมันดิบถูกส่งผ่าน 0.22 ไมโครเมตร polytetrafluoroethylene เทฟลอน (PTFE) ตัวกรองเข็มฉีดยาและฉีดโดยตรงลงในคอลัมน์HPLC ได้ aglycones Flavonoid ถูกแยกออกจากกันในคอลัมน์C18 (250? 4.6 มม 5 ไมโครเมตร Inertsil ODS-3, GL วิทยาศาสตร์กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) โดยวิธี HPLC (Shimadzu เกียวโตญี่ปุ่น) ติดตั้งกับอาร์เรย์โฟโตไดโอด(PDA) เครื่องตรวจจับ elution ได้รับการดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีฐาน0.1% กรดในน้ำ (เฟสเคลื่อนที่ A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B เฟสเคลื่อนที่) ตามต่อไปนี้โปรแกรม: 0 นาที 95% A / B 5%; 30 นาที, 60% A / B 40%; 45 นาที, 50% A / 50% B; 50 นาที 0% A / B 100%; 60 นาที 0% A / B 100%; 62 นาที, 95% A / 5% B; และ 70 นาที, 95% A / บี 5% เป็นอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์เป็น40 องศาเซลเซียส อัลตราไวโอเลตมองเห็นได้ (UV-Vis) เครื่องตรวจจับคลื่นตั้งอยู่ที่364 นาโนเมตร เพื่อวัตถุประสงค์ในปริมาณที่เป็นส่วนผสมของสามมาตรฐาน flavonoid (apigenin, เฟอรอลและ quercetin) ถูกนำมาใช้ในการสร้างกราฟมาตรฐานของflavonoids บุคคล เพื่อระบุตัวตนของเฟอรอลและ quercetin ใน WR-1 พันธุ์สารสกัดที่ถูกแยกออกจากกันในน้ำ(ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) สมมาตร C18 (150? 2.1 มม 5 ไมครอน) คอลัมน์ใช้ระบบHPLC บัฟเฟอร์ชะและอุณหภูมิคอลัมน์เป็นเช่นเดียวกับที่กล่าวไว้ข้างต้น โปรแกรมชะต่อไปนี้ถูกนำมาใช้: 0 นาที, 100% A / B 0%; 25 นาที 0% A / B 100%; 35 นาที 0% A / B 100%; 37 นาที, 100% A / B 0%; และ 47 นาที, 100% A / 0% บีอัตราการไหลเป็น0.2 มิลลิลิตร / นาที eluate ถูกเบี่ยงเบนไปสเปกโตรมิเตอร์มวล quadrupole (LC / MS2010A, Shimadzu) พร้อมกับแหล่ง electrospray ไอออนไนซ์เชิงลบ แรงดันสเปรย์ถูกกำหนดให้ 4.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิฝอยถูกกำหนดถึง 250 องศาเซลเซียส. การสกัด anthocyanin ที่ได้ดำเนินการตามที่เล็กน้อยการปรับเปลี่ยนวิธีการโดยAbdel-Aal et al, (9) จำนวน 50 มิลลิกรัมของตัวอย่างถูกสกัดด้วย0.8 มลเมทานอล 85% กรด 1.0 N HCl ตามด้วย sonication เป็นเวลา 1 นาที สารสกัดถูกบ่มแล้วรูปที่ 1 HPLC chromatograms ของ (A) aglycones flavonoid, (B) anthocyanins และ (ค) นอยด์ในเมล็ดข้าว (BR-1) ยอดเขาสอดคล้องกับต่อไปนี้: 1, quercetin; 2 apigenin; 3 เฟอรอล; 4 cyanidin-3-O-glucoside; 5 peonidin-3-O-glucoside; 6, ลูทีน, 7, ซีแซนทีน; 8 βแคโรทีน; และเป็นภายในมาตรฐาน (β-APO-80-carotenal). 12806 เจ Agric อาหาร Chem. ฉบับ 58, ฉบับที่ 24, 2010 คิม et al. 38 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีมีความถี่ผสม 500 รอบต่อนาทีใช้ Thermomixer ขนาดกะทัดรัด (Eppendorf, ฮัมบูร์ก, เยอรมนี) ระงับน้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและสารสกัดหยาบก็ผ่านไปผ่าน0.22 ไมโครเมตรเทฟลอนกรองเข็ม PTFE ก่อนที่จะวิเคราะห์ HPLC. Anthocyanin ถูกแยกออกในคอลัมน์ C18 (250? 4.6 มม 5 ไมโครเมตร Inertsil ODS-3, วิทยาศาสตร์ GL, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) โดยวิธี HPLC ที่อธิบายข้างต้น elution ได้รับการดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีฐาน 0.1% กรดในน้ำ(เฟสเคลื่อนที่ A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B เฟสเคลื่อนที่) ตามโปรแกรมต่อไปนี้: 0 นาที 95% A / B 5%; 40 นาที, 50% A / 50% B; 42 นาที 0% A / B 100%; 52 นาที 0% A / B 100%; 54 นาที, 95% A / 5% B; และ 64 นาที, 95% A / บี 5% เป็นอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์เป็น40 องศาเซลเซียส ความยาวคลื่นเครื่องตรวจจับรังสียูวีกำลังถูกกำหนดที่ 520 นาโนเมตร เนื้อหา anthocyanin ถูกคำนวณโดยวิธี HPLC พื้นที่จุดสูงสุดเมื่อเทียบกับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานภายนอก สมการเชิงเส้นและค่าสัมประสิทธิ์การถดถอยสำหรับ cyanidin-3-O-glucoside และ peonidin-3-Oglucoside เป็น Y = 12100x - 934.5 กับ r = 0.9967 และ Y = 22981x - 3972 มี r = 0.9999 ตามลำดับ. การสกัดและการวิเคราะห์ Carotenoids วิธีการสกัดใช้ในการวิเคราะห์ carotenoid เป็นแบบเดียวกับที่อธิบายไว้ที่อื่น ๆ (16). Briefely, carotenoids ได้รับการปล่อยตัวจากตัวอย่างข้าว (0.6 กรัม) โดยการเพิ่ม3 มิลลิลิตรของเอทานอลที่มีส่วนผสมของวิตามินซี 0.1% (w / v) ผสมน้ำวนสำหรับ20 s และวางในอ่างน้ำที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สารสกัด carotenoid ได้กราฟที่มีโพแทสเซียมไฮดรอกไซ (120 ไมโครลิตร 80% w / v) ที่ 85 องศาเซลเซียสอ่างน้ำเป็นเวลา10 นาที หลังจากสะพอตัวอย่างถูกวางไว้บนน้ำแข็งและน้ำเย็นปราศจากไอออน (1.5 มิลลิลิตร) ถูกเพิ่มเข้ามา β-Apo-80 carotenal (0.05 มิลลิลิตร 25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ถูกบันทึกเป็นมาตรฐานภายใน Carotenoids ถูกสกัดด้วยเฮกเซนเป็นครั้งที่สอง (1.5 มิลลิลิตร) โดยการหมุนเหวี่ยงที่1200G จะแยกชั้น aliquots ของสารสกัดแห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจนและในredissolved 50:50 (v / v) ไดคลอโรมีเทน / เมทานอลก่อนที่จะวิเคราะห์โดยวิธี HPLC นอยด์ถูกแยกออกจากกันในคอลัมน์ C30 YMC (250? 4.6 มม 3 ไมโครเมตรน้ำคอร์ปอเรชั่นฟอร์ด, แมสซาชูเซต) โดยวิธี HPLC ที่อธิบายข้างต้น chromatograms ถูกสร้างขึ้นที่450 นาโนเมตร ตัวทำละลายประกอบด้วยเมทานอล / น้ำ (92: 8, v / v) มี 10 มิลลิอะซิเตตแอมโมเนียม ตัวทำละลาย B ประกอบด้วยอีเธอร์เทอร์บิวทิลเมธิล 100%. ชะไล่โทนสีที่ได้ดำเนินการวันที่ 1 มิลลิลิตร / นาทีภายใต้การดังต่อไปนี้เงื่อนไข: 0 นาที 83% A / B 17%; 23 นาที, 70% A / B 30%; 29 นาที, 59% A / B 41%; 35 นาที, 30% A / B 70%; 40 นาที, 30% A / B 70%; 44 นาที, 83% A / 17% B; และ 55 นาที, 83% A / 17% บีเพื่อวัตถุประสงค์ในปริมาณ, เส้นโค้งการสอบเทียบถูกวาดโดยพล็อตที่สี่ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของมาตรฐาน carotenoid ตามอัตราส่วนพื้นที่ยอดเขาที่มีβ-apo- 80 carotenal ตอบเป็นเชิงเส้นในช่วงต่อไปนี้: 0.03- 0.25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (y = 0.1048x þ 0.0017 กับ r = 0.9846) 0.03-0.25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร(y = 0.0656x þ 0.0010 กับ r = 0.9896) และ 0.03-0.50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (y = 0.3340x þ 0.0051 กับ r = 0.9968) สำหรับβแคโรทีนลูทีนและซีแซนทีน, ตามลำดับ. การวิเคราะห์ทางสถิติ การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการอย่างน้อยในเพิ่มขึ้นสามเท่า. ข้อมูลการทดลองโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) และความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญหมายถึงการได้รับการพิจารณาโดยดันแคนทดสอบช่วงหลาย การวิเคราะห์ความสัมพันธ์และการวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก(PCA) ของผลที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ SAS 9.1 (SAS Institute, แครี, NC) PCA ได้ดำเนินการบนพื้นฐานของความสัมพันธ์เมทริกซ์และที่ค่าลักษณะเฉพาะการคำนวณและeigenvectors ส่วนประกอบหลักกับค่าลักษณะเฉพาะ> 1.0 สกัด เอาท์พุทจาก PCA ประกอบด้วยคะแนนแปลงเพื่อให้มองเห็นความแตกต่างระหว่างกลุ่มตัวอย่างที่แตกต่างกันและแปลงโหลดที่จะอธิบายเหตุผลในการแยกกลุ่ม เพียร์สันการวิเคราะห์ความสัมพันธ์ได้ดำเนินการในหมู่เนื้อหาของแปดสาร
BR-1; Heugseolbyeo, BR-2; Josengheugchalbyeo, BR-3; Heugnambyeo,
BR-4 และ Heughyangbyeo, BR-5) สองสายพันธุ์ของข้าวแดง (Hongjinjubyeo, RR-1; และ Jeogjinjubyeo, RR-2) และพันธุ์หนึ่งของข้าวขาว
(Hwasungbyeo, WR-1) ถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้ ทั้งหมดของเมล็ดข้าวที่เก็บเกี่ยวที่สถาบันแห่งชาติของฟาร์มวิทยาศาสตร์พืชในปี 2008 พวกเขาได้รับปลาด้วยตนเองและพื้นดินที่จะได้รับเป็นผงละเอียดใช้พายุหมุนโรงงานผสม(HMF-590, Hanil, กรุงโซลประเทศเกาหลี) และโกร่งบดยา . ผงข้าวสารถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสก่อนที่จะสกัด apigenin, เฟอรอล, quercetin และβ-APO-80-carotenal ที่ซื้อมาจากSigma เคมี จำกัด (เซนต์หลุยส์) ลูทีน, βแคโรทีนและซีแซนทีนที่ได้รับจาก CaroteNature (Lupsingen วิตเซอร์แลนด์) cyanidin 3-O-glucoside และ peonidin-3-O-glucoside ที่ซื้อมาจาก Extrasynthese (Genay ฝรั่งเศส). การสกัดและการวิเคราะห์ Flavonoids การสกัดแยกและการวัด aglycones flavonoid โดยมีประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (HPLC) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยกลุ่มของเรา (15) flavonoids ได้รับการปล่อยตัวและไฮโดรไลซ์จากข้าวผง (100 มิลลิกรัมประมาณห้าธัญพืช) โดยการเพิ่ม 1.2 มิลลิลิตรเมธานอล 50% ที่มี1.2 M HCl ที่ 80 องศาเซลเซียสในอ่างน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมง สารแขวนลอยน้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สารสกัดน้ำมันดิบถูกส่งผ่าน 0.22 ไมโครเมตร polytetrafluoroethylene เทฟลอน (PTFE) ตัวกรองเข็มฉีดยาและฉีดโดยตรงลงในคอลัมน์HPLC ได้ aglycones Flavonoid ถูกแยกออกจากกันในคอลัมน์C18 (250? 4.6 มม 5 ไมโครเมตร Inertsil ODS-3, GL วิทยาศาสตร์กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) โดยวิธี HPLC (Shimadzu เกียวโตญี่ปุ่น) ติดตั้งกับอาร์เรย์โฟโตไดโอด(PDA) เครื่องตรวจจับ elution ได้รับการดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีฐาน0.1% กรดในน้ำ (เฟสเคลื่อนที่ A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B เฟสเคลื่อนที่) ตามต่อไปนี้โปรแกรม: 0 นาที 95% A / B 5%; 30 นาที, 60% A / B 40%; 45 นาที, 50% A / 50% B; 50 นาที 0% A / B 100%; 60 นาที 0% A / B 100%; 62 นาที, 95% A / 5% B; และ 70 นาที, 95% A / บี 5% เป็นอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์เป็น40 องศาเซลเซียส อัลตราไวโอเลตมองเห็นได้ (UV-Vis) เครื่องตรวจจับคลื่นตั้งอยู่ที่364 นาโนเมตร เพื่อวัตถุประสงค์ในปริมาณที่เป็นส่วนผสมของสามมาตรฐาน flavonoid (apigenin, เฟอรอลและ quercetin) ถูกนำมาใช้ในการสร้างกราฟมาตรฐานของflavonoids บุคคล เพื่อระบุตัวตนของเฟอรอลและ quercetin ใน WR-1 พันธุ์สารสกัดที่ถูกแยกออกจากกันในน้ำ(ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) สมมาตร C18 (150? 2.1 มม 5 ไมครอน) คอลัมน์ใช้ระบบHPLC บัฟเฟอร์ชะและอุณหภูมิคอลัมน์เป็นเช่นเดียวกับที่กล่าวไว้ข้างต้น โปรแกรมชะต่อไปนี้ถูกนำมาใช้: 0 นาที, 100% A / B 0%; 25 นาที 0% A / B 100%; 35 นาที 0% A / B 100%; 37 นาที, 100% A / B 0%; และ 47 นาที, 100% A / 0% บีอัตราการไหลเป็น0.2 มิลลิลิตร / นาที eluate ถูกเบี่ยงเบนไปสเปกโตรมิเตอร์มวล quadrupole (LC / MS2010A, Shimadzu) พร้อมกับแหล่ง electrospray ไอออนไนซ์เชิงลบ แรงดันสเปรย์ถูกกำหนดให้ 4.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิฝอยถูกกำหนดถึง 250 องศาเซลเซียส. การสกัด anthocyanin ที่ได้ดำเนินการตามที่เล็กน้อยการปรับเปลี่ยนวิธีการโดยAbdel-Aal et al, (9) จำนวน 50 มิลลิกรัมของตัวอย่างถูกสกัดด้วย0.8 มลเมทานอล 85% กรด 1.0 N HCl ตามด้วย sonication เป็นเวลา 1 นาที สารสกัดถูกบ่มแล้วรูปที่ 1 HPLC chromatograms ของ (A) aglycones flavonoid, (B) anthocyanins และ (ค) นอยด์ในเมล็ดข้าว (BR-1) ยอดเขาสอดคล้องกับต่อไปนี้: 1, quercetin; 2 apigenin; 3 เฟอรอล; 4 cyanidin-3-O-glucoside; 5 peonidin-3-O-glucoside; 6, ลูทีน, 7, ซีแซนทีน; 8 βแคโรทีน; และเป็นภายในมาตรฐาน (β-APO-80-carotenal). 12806 เจ Agric อาหาร Chem. ฉบับ 58, ฉบับที่ 24, 2010 คิม et al. 38 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีมีความถี่ผสม 500 รอบต่อนาทีใช้ Thermomixer ขนาดกะทัดรัด (Eppendorf, ฮัมบูร์ก, เยอรมนี) ระงับน้ำมันดิบถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและสารสกัดหยาบก็ผ่านไปผ่าน0.22 ไมโครเมตรเทฟลอนกรองเข็ม PTFE ก่อนที่จะวิเคราะห์ HPLC. Anthocyanin ถูกแยกออกในคอลัมน์ C18 (250? 4.6 มม 5 ไมโครเมตร Inertsil ODS-3, วิทยาศาสตร์ GL, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น) โดยวิธี HPLC ที่อธิบายข้างต้น elution ได้รับการดำเนินการโดยใช้การไล่ระดับสีฐาน 0.1% กรดในน้ำ(เฟสเคลื่อนที่ A) และ 0.1% กรดใน acetonitrile (B เฟสเคลื่อนที่) ตามโปรแกรมต่อไปนี้: 0 นาที 95% A / B 5%; 40 นาที, 50% A / 50% B; 42 นาที 0% A / B 100%; 52 นาที 0% A / B 100%; 54 นาที, 95% A / 5% B; และ 64 นาที, 95% A / บี 5% เป็นอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร / นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์เป็น40 องศาเซลเซียส ความยาวคลื่นเครื่องตรวจจับรังสียูวีกำลังถูกกำหนดที่ 520 นาโนเมตร เนื้อหา anthocyanin ถูกคำนวณโดยวิธี HPLC พื้นที่จุดสูงสุดเมื่อเทียบกับเส้นโค้งการสอบเทียบมาตรฐานภายนอก สมการเชิงเส้นและค่าสัมประสิทธิ์การถดถอยสำหรับ cyanidin-3-O-glucoside และ peonidin-3-Oglucoside เป็น Y = 12100x - 934.5 กับ r = 0.9967 และ Y = 22981x - 3972 มี r = 0.9999 ตามลำดับ. การสกัดและการวิเคราะห์ Carotenoids วิธีการสกัดใช้ในการวิเคราะห์ carotenoid เป็นแบบเดียวกับที่อธิบายไว้ที่อื่น ๆ (16). Briefely, carotenoids ได้รับการปล่อยตัวจากตัวอย่างข้าว (0.6 กรัม) โดยการเพิ่ม3 มิลลิลิตรของเอทานอลที่มีส่วนผสมของวิตามินซี 0.1% (w / v) ผสมน้ำวนสำหรับ20 s และวางในอ่างน้ำที่ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สารสกัด carotenoid ได้กราฟที่มีโพแทสเซียมไฮดรอกไซ (120 ไมโครลิตร 80% w / v) ที่ 85 องศาเซลเซียสอ่างน้ำเป็นเวลา10 นาที หลังจากสะพอตัวอย่างถูกวางไว้บนน้ำแข็งและน้ำเย็นปราศจากไอออน (1.5 มิลลิลิตร) ถูกเพิ่มเข้ามา β-Apo-80 carotenal (0.05 มิลลิลิตร 25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ถูกบันทึกเป็นมาตรฐานภายใน Carotenoids ถูกสกัดด้วยเฮกเซนเป็นครั้งที่สอง (1.5 มิลลิลิตร) โดยการหมุนเหวี่ยงที่1200G จะแยกชั้น aliquots ของสารสกัดแห้งภายใต้กระแสของไนโตรเจนและในredissolved 50:50 (v / v) ไดคลอโรมีเทน / เมทานอลก่อนที่จะวิเคราะห์โดยวิธี HPLC นอยด์ถูกแยกออกจากกันในคอลัมน์ C30 YMC (250? 4.6 มม 3 ไมโครเมตรน้ำคอร์ปอเรชั่นฟอร์ด, แมสซาชูเซต) โดยวิธี HPLC ที่อธิบายข้างต้น chromatograms ถูกสร้างขึ้นที่450 นาโนเมตร ตัวทำละลายประกอบด้วยเมทานอล / น้ำ (92: 8, v / v) มี 10 มิลลิอะซิเตตแอมโมเนียม ตัวทำละลาย B ประกอบด้วยอีเธอร์เทอร์บิวทิลเมธิล 100%. ชะไล่โทนสีที่ได้ดำเนินการวันที่ 1 มิลลิลิตร / นาทีภายใต้การดังต่อไปนี้เงื่อนไข: 0 นาที 83% A / B 17%; 23 นาที, 70% A / B 30%; 29 นาที, 59% A / B 41%; 35 นาที, 30% A / B 70%; 40 นาที, 30% A / B 70%; 44 นาที, 83% A / 17% B; และ 55 นาที, 83% A / 17% บีเพื่อวัตถุประสงค์ในปริมาณ, เส้นโค้งการสอบเทียบถูกวาดโดยพล็อตที่สี่ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของมาตรฐาน carotenoid ตามอัตราส่วนพื้นที่ยอดเขาที่มีβ-apo- 80 carotenal ตอบเป็นเชิงเส้นในช่วงต่อไปนี้: 0.03- 0.25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (y = 0.1048x þ 0.0017 กับ r = 0.9846) 0.03-0.25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร(y = 0.0656x þ 0.0010 กับ r = 0.9896) และ 0.03-0.50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร (y = 0.3340x þ 0.0051 กับ r = 0.9968) สำหรับβแคโรทีนลูทีนและซีแซนทีน, ตามลำดับ. การวิเคราะห์ทางสถิติ การวิเคราะห์ทั้งหมดถูกดำเนินการอย่างน้อยในเพิ่มขึ้นสามเท่า. ข้อมูลการทดลองโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) และความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญหมายถึงการได้รับการพิจารณาโดยดันแคนทดสอบช่วงหลาย การวิเคราะห์ความสัมพันธ์และการวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก(PCA) ของผลที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้ SAS 9.1 (SAS Institute, แครี, NC) PCA ได้ดำเนินการบนพื้นฐานของความสัมพันธ์เมทริกซ์และที่ค่าลักษณะเฉพาะการคำนวณและeigenvectors ส่วนประกอบหลักกับค่าลักษณะเฉพาะ> 1.0 สกัด เอาท์พุทจาก PCA ประกอบด้วยคะแนนแปลงเพื่อให้มองเห็นความแตกต่างระหว่างกลุ่มตัวอย่างที่แตกต่างกันและแปลงโหลดที่จะอธิบายเหตุผลในการแยกกลุ่ม เพียร์สันการวิเคราะห์ความสัมพันธ์ได้ดำเนินการในหมู่เนื้อหาของแปดสาร
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตัวอย่าง และสารเคมี ห้าพันธุ์ของข้าวสีดำ ( heugjinjubyeo
br-1 heugseolbyeo br-2 , ; , ; josengheugchalbyeo br-3 ; heugnambyeo
, , br-4 และ heughyangbyeo br-5 , ) , สองสายพันธุ์ของข้าวสีแดง ( hongjinjubyeo rr-1 ; jeogjinjubyeo , และ , หนึ่ง , rr-2 ) และพันธุ์ของข้าวขาว ( hwasungbyeo wr-1
, ) สถิติที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ทั้งหมดเมล็ดข้าวถูก
การเก็บเกี่ยวที่สถาบันวิทยาศาสตร์พืชฟาร์มในปี 2008 พวกเขาได้ด้วยตนเอง
hulled และพื้นดินเพื่อให้ได้ผงละเอียดโดยใช้ไซโคลน
mixer mill ( hmf-590 Hanil , โซล , เกาหลี ) และครกและสาก
จากผงข้าว เก็บที่อุณหภูมิ - 80 C ก่อนการสกัด พิจินิน
แคมเฟอรอล , quercetin และบีตา - apo-80-carotenal ซื้อมาจาก
Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO ) lutein ,บีตา - แคโรทีน และซีแซนทีน
ได้จาก carotenature ( lupsingen , สวิตเซอร์แลนด์ ) cyanidin-3 -
o-glucoside และ peonidin-3-o-glucoside ซื้อมาจาก extrasynthese ( genay , ฝรั่งเศส ) .
การสกัดและการวิเคราะห์สารฟลาโวนอยด์ . การสกัด การแยก และฟลาโวนอยด์ aglycones
การวัดโดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยกลุ่มของเรา ( 15 )ฟลาโวนอยด์ที่ถูกปล่อยออกมาและย่อยแป้งจากข้าว ( 100 มิลลิกรัม ,
ประมาณห้าเม็ด ) โดยการเพิ่ม 1.2 ml 50 % ปริมาณ 1.2 M HCl ที่ประกอบด้วย
80 C ในอ่างน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมง สารแขวนลอยดิบเป็นระดับที่ 10000g
4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีสกัดผ่าน
ผ่าน เมื่อμ M เทฟลอนเคลือบ ( PTFE ) และเข็มตัวกรอง
ฉีดโดยตรงเข้าไปใน HPLC คอลัมน์ฟลาโวนอย aglycones ถูก
แยกในคอลัมน์ C18 250 4.6 มม. , 5 μ M , inertsil ods-3 GL
วิทยาศาสตร์ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) โดย HPLC ( Shimadzu , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) ติดตั้ง
ด้วยโฟโตไดโอดเรย์ ( PDA ) เครื่องตรวจจับ ( การใช้
ไล่ระดับไบนารี 0.1% กรดในน้ำ ( เฟสเคลื่อนที่ ) และ 0.1 %
กรดใน Acetonitrile ( มือถือเฟส B ) ตามรายการ ดังต่อไปนี้
: 0 นาที 95 / 5 % B ;30 นาที , 60 / 40 % B ; 45 นาที , 50 / 50 %
% B ; 50 นาที 0 % / 100 % B ; 60 นาที , 0 % / 100 % B ; 62 นาที 95 /
5 % B ; และ 70 นาที 95 % เป็น / 5 % B . อัตราการไหลเท่ากับ 1.0 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์ รังสีอัลตราไวโอเลต ( UV VIS ) มองเห็นเครื่องตรวจจับ
ความยาวคลื่นเท่ากับ 364 nm . มีปริมาณส่วนผสมของ
3 มาตรฐาน , ฟลาโวนอยด์ ( พิจินินเคมเฟอรอล และ quercetin ,
) ถูกใช้จะสร้างเป็นรูปโค้งของฟลาโวนอยด์ของแต่ละบุคคล สำหรับการระบุและเคมเฟอรอลใน wr-1
ของเคอร์พันธุ์สารสกัดแยก
บนน้ำ ( Milford , MA ) c18 สมมาตร ( 150 2.1 มม. , 5 μ M ) คอลัมน์
โดยใช้ระบบ HPLC . การใช้บัฟเฟอร์และคอลัมน์
อุณหภูมิเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้ใช้โปรแกรมประยุกต์ :
0 นาที , 100% / 0 % B ; 25 นาที0 % / 100 % B ; 35 นาที , 0 % / 100 % B ;
37 นาที , 100% / 0 % B ; 47 นาที 100 % / 0 % B . อัตราการไหลเท่ากับ
0.2 มิลลิลิตร / นาที ในสารละลาย ( eluate ) ถูกเบี่ยงเบนไปยังคำ
( LC / แมสสเปกโทรมิเตอร์ ms2010a Shimadzu ) , พร้อมกับลบวิธีพ่นละอองไฟฟ้าอิออนแหล่งที่มา เครื่องพ่นแรงดันตั้งไว้ที่ 4.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิเป็นฝอยตั้ง 250 C .
การสกัดแอนโธไซยานินได้ปฏิบัติตาม
เล็กน้อยการปรับเปลี่ยนวิธีการ โดยเดล aal et al . ( 9 ) ทั้งหมด 50 มิลลิกรัม
ตัวอย่างสาร 0.8 ml 85 % เมทานอลปรับ 1.0 n
HCl ตาม sonication 1 นาที สารสกัดและบ่มที่
1 รูป โดยกลิ่นของฟลาโวนอย aglycones ( a ) , ( b ) แอนโทไซยานิน และ ( c ) แคโรทีนอยด์ในเมล็ดข้าว ( br-1 ) ยอดตรงกับ
1 quercetin ; 2 พิจีนิน ;3 cyanidin-3-o-glucoside แคมเฟอรอล ; 4 ; 5 , peonidin-3-o-glucoside ; 6 , ลูทีน , 7 , ซีแซนทีน ; 8 , บีตา - แคโรทีน และเป็นมาตรฐานภายใน
( บีตา - apo-80-carotenal )
12806 เจ. Agric . เคมีอาหาร ฉบับที่ 58 , หมายเลข 24 , 2010 คิม et al .
38 C นาน 30 นาที ด้วยการผสมความถี่ 500 รอบต่อนาทีใช้ thermomixer
ขนาดกะทัดรัด ( เพนดอร์ฟ , ฮัมบูร์ก , เยอรมนี ) การระงับดิบ
ระดับที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและสารสกัดที่ผ่าน
ผ่าน 0.22 μ Teflon PTFE มเข็มกรองก่อนการวิเคราะห์ HPLC .
แอนโธไซยานินก็แยกในคอลัมน์ C18 250 4.6 มม. , 5 μ M , inertsil
ods-3 GL , วิทยาศาสตร์ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) โดย HPLC ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น (
ได้ดําเนินการโดยใช้ไล่สีแบบไบนารีของ 0.1% กรดในน้ำ
( เฟสเคลื่อนที่ ) และ 0.1% กรดใน Acetonitrile ( มือถือเฟส B )
ตามโปรแกรมดังต่อไปนี้ : 0 นาที 95 / 5 % B ; 40 นาที , 50 / 50 %
% B ; 42 นาที 0 % / 100 % B ; 52 นาที 0 % / 100 % B ; 54 นาที 95 /
5 % B ; และ 64 นาที 95 / 5 % B . อัตราการไหลเท่ากับ 1.0 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์ UV Vis เครื่องตรวจจับความยาวคลื่นคือชุด
ที่ 520 nm . ปริมาณแอนโธไซยานิน ) คำนวณโดยวิธี HPLC สูงสุดเมื่อเทียบกับพื้นที่
สอบเทียบมาตรฐานภายนอกโค้งและสมการการถดถอยเชิงเส้นและสำหรับ cyanidin-3-o-glucoside
peonidin-3-oglucoside เป็น Y = 12100x - 934.5 , r = 0.9967 และ y = 22981x 3972 -
, r = ทำการตามลำดับ
การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoids . การสกัดคาโรทีนอยด์เป็นวิธีที่ใช้วิเคราะห์
คล้ายกับที่อธิบายไว้ในที่อื่น ( 16 ) .
briefely , คาร์โรทีนอยด์ถูกปล่อยตัวจากข้าวตัวอย่าง ( 06 กรัม ) โดยการเพิ่ม
3 มิลลิลิตรเอทานอลที่มีวิตามินซี 0.1% ( w / v ) , Vortex ผสมสำหรับ
20 , และการวางในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สกัดแคโรทีนอยด์เป็น
การดูดซึมด้วยโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ ( 120 μลิตร 80 % W / V ) ที่ 85 C
น้ำอาบน้ำ 10 นาทีหลังจากสปอนนิฟิเคชั่น ตัวอย่างถูกวางไว้ทันทีบนน้ำแข็งและน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานเย็น ( 1.5 ml ) ถูกเพิ่มเข้ามา apo-80 บีตา - -
carotenal ( 0.05 มิลลิลิตร25 μ g / ml ) เพิ่มเป็นมาตรฐานภายใน แคโรทีนอยด์เป็นสารสกัดด้วยเฮกเซน ( 1.5 ml 2 ครั้ง ) โดยการเหวี่ยงแยกที่
1200g แยกชั้น ส่วนที่หารลงตัวของสารสกัดแห้งภายใต้
กระแสของไนโตรเจนและ redissolved ใน 50 : 50 ( v / v ) ไดคลอโรมีเทน /
เมทานอลก่อนการวิเคราะห์ด้วย HPLC . carotenoids ถูกแยกจากกันบน
C30 ymc คอลัมน์ ( 250 4.6 มม. 3 μ M , Waters Corporation , Milford ,
มา ) โดย HPLC ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น กลิ่นถูกสร้างขึ้นที่
450 nm . ตัวทำละลายเป็นประกอบด้วยเมทานอล / น้ำ ( 92:8 , V / V ) แอมโมเนียมอะซิเตท 10 มม
ตัวทำละลาย B จำนวน 100 เปอร์เซ็นต์เมทิล tert บิวทิลอีเทอร์
ลาดได้มาแสดงที่ 1 มิลลิลิตรต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้
: 0 Min 83 % / 17 % B ; 23 นาที ร้อยละ 70 / 30 % B ; 29 นาที 59 %
/ 41 % B ; 35 นาที ร้อยละ 30 / 70 % B ; 40 นาทีร้อยละ 30 / 70 % B ; 44 นาที 83 /
%17 % B ; และ 55 นาที 83 % / 17 % B . มีปริมาณ
เส้นโค้งสอบเทียบ , วาดโดยวางแผนที่ความเข้มข้นของเชื้อที่แตกต่างกันสี่
มาตรฐานตามพื้นที่ที่มียอดอัตราส่วนบีตา - อาโป -
80 carotenal . การตอบสนองที่เป็นเส้นตรงในช่วงต่อไปนี้ : 0.03 -
0.25 μ g / ml ( Y = 0.1048x และþ , r = 0.9846 ) 0.03-0.25 μ g / ml
( Y = 0.0656x þการส่งออก , r = 0.9896 ) และ 003-0.50 μ g / ml ( Y =
0.3340x þ 0.0051 , r = 0.9968 ) บีตา - แคโรทีน ลูทีน และซีแซนทีน
, ตามลำดับ สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล ทั้งหมดวิเคราะห์ทดลอง อย่างน้อยทั้งสามใบ
การทดลองวิเคราะห์ข้อมูลด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) และเปรียบเทียบความแตกต่างของค่าเฉลี่ย
วิเคราะห์โดย Multiple Range test ดันแคน
การวิเคราะห์องค์ประกอบหลักและการวิเคราะห์สหสัมพันธ์
( PCA ) ของผลของการใช้ SAS ( SAS Institute , แครี่ , 9.1
NC ) จะถูกแสดงบนพื้นฐานของเมตริกซ์สหสัมพันธ์ที่คำนวณและ
แบกเซอร์ ฮัมบี้ . ส่วนประกอบหลักกับ
ค่า > 1.0 ถูกสกัด ผลผลิตจาก PCA ประกอบด้วยคะแนน
แปลงที่จะเห็นความแตกต่างระหว่างตัวอย่างที่แตกต่างกันและการแปลง
ที่จะอธิบายถึงเหตุผลในการแยกกลุ่ม สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ระหว่างการวิเคราะห์
ถูกหามออกจากเนื้อหาของแปดสาร .
br-1 heugseolbyeo br-2 , ; , ; josengheugchalbyeo br-3 ; heugnambyeo
, , br-4 และ heughyangbyeo br-5 , ) , สองสายพันธุ์ของข้าวสีแดง ( hongjinjubyeo rr-1 ; jeogjinjubyeo , และ , หนึ่ง , rr-2 ) และพันธุ์ของข้าวขาว ( hwasungbyeo wr-1
, ) สถิติที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ ทั้งหมดเมล็ดข้าวถูก
การเก็บเกี่ยวที่สถาบันวิทยาศาสตร์พืชฟาร์มในปี 2008 พวกเขาได้ด้วยตนเอง
hulled และพื้นดินเพื่อให้ได้ผงละเอียดโดยใช้ไซโคลน
mixer mill ( hmf-590 Hanil , โซล , เกาหลี ) และครกและสาก
จากผงข้าว เก็บที่อุณหภูมิ - 80 C ก่อนการสกัด พิจินิน
แคมเฟอรอล , quercetin และบีตา - apo-80-carotenal ซื้อมาจาก
Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO ) lutein ,บีตา - แคโรทีน และซีแซนทีน
ได้จาก carotenature ( lupsingen , สวิตเซอร์แลนด์ ) cyanidin-3 -
o-glucoside และ peonidin-3-o-glucoside ซื้อมาจาก extrasynthese ( genay , ฝรั่งเศส ) .
การสกัดและการวิเคราะห์สารฟลาโวนอยด์ . การสกัด การแยก และฟลาโวนอยด์ aglycones
การวัดโดยวิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูง ( HPLC ) ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยกลุ่มของเรา ( 15 )ฟลาโวนอยด์ที่ถูกปล่อยออกมาและย่อยแป้งจากข้าว ( 100 มิลลิกรัม ,
ประมาณห้าเม็ด ) โดยการเพิ่ม 1.2 ml 50 % ปริมาณ 1.2 M HCl ที่ประกอบด้วย
80 C ในอ่างน้ำเป็นเวลา 2 ชั่วโมง สารแขวนลอยดิบเป็นระดับที่ 10000g
4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีสกัดผ่าน
ผ่าน เมื่อμ M เทฟลอนเคลือบ ( PTFE ) และเข็มตัวกรอง
ฉีดโดยตรงเข้าไปใน HPLC คอลัมน์ฟลาโวนอย aglycones ถูก
แยกในคอลัมน์ C18 250 4.6 มม. , 5 μ M , inertsil ods-3 GL
วิทยาศาสตร์ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) โดย HPLC ( Shimadzu , เกียวโต , ญี่ปุ่น ) ติดตั้ง
ด้วยโฟโตไดโอดเรย์ ( PDA ) เครื่องตรวจจับ ( การใช้
ไล่ระดับไบนารี 0.1% กรดในน้ำ ( เฟสเคลื่อนที่ ) และ 0.1 %
กรดใน Acetonitrile ( มือถือเฟส B ) ตามรายการ ดังต่อไปนี้
: 0 นาที 95 / 5 % B ;30 นาที , 60 / 40 % B ; 45 นาที , 50 / 50 %
% B ; 50 นาที 0 % / 100 % B ; 60 นาที , 0 % / 100 % B ; 62 นาที 95 /
5 % B ; และ 70 นาที 95 % เป็น / 5 % B . อัตราการไหลเท่ากับ 1.0 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์ รังสีอัลตราไวโอเลต ( UV VIS ) มองเห็นเครื่องตรวจจับ
ความยาวคลื่นเท่ากับ 364 nm . มีปริมาณส่วนผสมของ
3 มาตรฐาน , ฟลาโวนอยด์ ( พิจินินเคมเฟอรอล และ quercetin ,
) ถูกใช้จะสร้างเป็นรูปโค้งของฟลาโวนอยด์ของแต่ละบุคคล สำหรับการระบุและเคมเฟอรอลใน wr-1
ของเคอร์พันธุ์สารสกัดแยก
บนน้ำ ( Milford , MA ) c18 สมมาตร ( 150 2.1 มม. , 5 μ M ) คอลัมน์
โดยใช้ระบบ HPLC . การใช้บัฟเฟอร์และคอลัมน์
อุณหภูมิเดียวกันตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ต่อไปนี้ใช้โปรแกรมประยุกต์ :
0 นาที , 100% / 0 % B ; 25 นาที0 % / 100 % B ; 35 นาที , 0 % / 100 % B ;
37 นาที , 100% / 0 % B ; 47 นาที 100 % / 0 % B . อัตราการไหลเท่ากับ
0.2 มิลลิลิตร / นาที ในสารละลาย ( eluate ) ถูกเบี่ยงเบนไปยังคำ
( LC / แมสสเปกโทรมิเตอร์ ms2010a Shimadzu ) , พร้อมกับลบวิธีพ่นละอองไฟฟ้าอิออนแหล่งที่มา เครื่องพ่นแรงดันตั้งไว้ที่ 4.5 กิโลโวลต์และอุณหภูมิเป็นฝอยตั้ง 250 C .
การสกัดแอนโธไซยานินได้ปฏิบัติตาม
เล็กน้อยการปรับเปลี่ยนวิธีการ โดยเดล aal et al . ( 9 ) ทั้งหมด 50 มิลลิกรัม
ตัวอย่างสาร 0.8 ml 85 % เมทานอลปรับ 1.0 n
HCl ตาม sonication 1 นาที สารสกัดและบ่มที่
1 รูป โดยกลิ่นของฟลาโวนอย aglycones ( a ) , ( b ) แอนโทไซยานิน และ ( c ) แคโรทีนอยด์ในเมล็ดข้าว ( br-1 ) ยอดตรงกับ
1 quercetin ; 2 พิจีนิน ;3 cyanidin-3-o-glucoside แคมเฟอรอล ; 4 ; 5 , peonidin-3-o-glucoside ; 6 , ลูทีน , 7 , ซีแซนทีน ; 8 , บีตา - แคโรทีน และเป็นมาตรฐานภายใน
( บีตา - apo-80-carotenal )
12806 เจ. Agric . เคมีอาหาร ฉบับที่ 58 , หมายเลข 24 , 2010 คิม et al .
38 C นาน 30 นาที ด้วยการผสมความถี่ 500 รอบต่อนาทีใช้ thermomixer
ขนาดกะทัดรัด ( เพนดอร์ฟ , ฮัมบูร์ก , เยอรมนี ) การระงับดิบ
ระดับที่ 10000g ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและสารสกัดที่ผ่าน
ผ่าน 0.22 μ Teflon PTFE มเข็มกรองก่อนการวิเคราะห์ HPLC .
แอนโธไซยานินก็แยกในคอลัมน์ C18 250 4.6 มม. , 5 μ M , inertsil
ods-3 GL , วิทยาศาสตร์ , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) โดย HPLC ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น (
ได้ดําเนินการโดยใช้ไล่สีแบบไบนารีของ 0.1% กรดในน้ำ
( เฟสเคลื่อนที่ ) และ 0.1% กรดใน Acetonitrile ( มือถือเฟส B )
ตามโปรแกรมดังต่อไปนี้ : 0 นาที 95 / 5 % B ; 40 นาที , 50 / 50 %
% B ; 42 นาที 0 % / 100 % B ; 52 นาที 0 % / 100 % B ; 54 นาที 95 /
5 % B ; และ 64 นาที 95 / 5 % B . อัตราการไหลเท่ากับ 1.0 มิลลิลิตรต่อนาทีและอุณหภูมิ 40 C
คอลัมน์ UV Vis เครื่องตรวจจับความยาวคลื่นคือชุด
ที่ 520 nm . ปริมาณแอนโธไซยานิน ) คำนวณโดยวิธี HPLC สูงสุดเมื่อเทียบกับพื้นที่
สอบเทียบมาตรฐานภายนอกโค้งและสมการการถดถอยเชิงเส้นและสำหรับ cyanidin-3-o-glucoside
peonidin-3-oglucoside เป็น Y = 12100x - 934.5 , r = 0.9967 และ y = 22981x 3972 -
, r = ทำการตามลำดับ
การสกัดและการวิเคราะห์ของ carotenoids . การสกัดคาโรทีนอยด์เป็นวิธีที่ใช้วิเคราะห์
คล้ายกับที่อธิบายไว้ในที่อื่น ( 16 ) .
briefely , คาร์โรทีนอยด์ถูกปล่อยตัวจากข้าวตัวอย่าง ( 06 กรัม ) โดยการเพิ่ม
3 มิลลิลิตรเอทานอลที่มีวิตามินซี 0.1% ( w / v ) , Vortex ผสมสำหรับ
20 , และการวางในอ่างน้ำที่อุณหภูมิ 85 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที สกัดแคโรทีนอยด์เป็น
การดูดซึมด้วยโพแทสเซียมไฮดรอกไซด์ ( 120 μลิตร 80 % W / V ) ที่ 85 C
น้ำอาบน้ำ 10 นาทีหลังจากสปอนนิฟิเคชั่น ตัวอย่างถูกวางไว้ทันทีบนน้ำแข็งและน้ำคล้ายเนื้อเยื่อประสานเย็น ( 1.5 ml ) ถูกเพิ่มเข้ามา apo-80 บีตา - -
carotenal ( 0.05 มิลลิลิตร25 μ g / ml ) เพิ่มเป็นมาตรฐานภายใน แคโรทีนอยด์เป็นสารสกัดด้วยเฮกเซน ( 1.5 ml 2 ครั้ง ) โดยการเหวี่ยงแยกที่
1200g แยกชั้น ส่วนที่หารลงตัวของสารสกัดแห้งภายใต้
กระแสของไนโตรเจนและ redissolved ใน 50 : 50 ( v / v ) ไดคลอโรมีเทน /
เมทานอลก่อนการวิเคราะห์ด้วย HPLC . carotenoids ถูกแยกจากกันบน
C30 ymc คอลัมน์ ( 250 4.6 มม. 3 μ M , Waters Corporation , Milford ,
มา ) โดย HPLC ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น กลิ่นถูกสร้างขึ้นที่
450 nm . ตัวทำละลายเป็นประกอบด้วยเมทานอล / น้ำ ( 92:8 , V / V ) แอมโมเนียมอะซิเตท 10 มม
ตัวทำละลาย B จำนวน 100 เปอร์เซ็นต์เมทิล tert บิวทิลอีเทอร์
ลาดได้มาแสดงที่ 1 มิลลิลิตรต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้
: 0 Min 83 % / 17 % B ; 23 นาที ร้อยละ 70 / 30 % B ; 29 นาที 59 %
/ 41 % B ; 35 นาที ร้อยละ 30 / 70 % B ; 40 นาทีร้อยละ 30 / 70 % B ; 44 นาที 83 /
%17 % B ; และ 55 นาที 83 % / 17 % B . มีปริมาณ
เส้นโค้งสอบเทียบ , วาดโดยวางแผนที่ความเข้มข้นของเชื้อที่แตกต่างกันสี่
มาตรฐานตามพื้นที่ที่มียอดอัตราส่วนบีตา - อาโป -
80 carotenal . การตอบสนองที่เป็นเส้นตรงในช่วงต่อไปนี้ : 0.03 -
0.25 μ g / ml ( Y = 0.1048x และþ , r = 0.9846 ) 0.03-0.25 μ g / ml
( Y = 0.0656x þการส่งออก , r = 0.9896 ) และ 003-0.50 μ g / ml ( Y =
0.3340x þ 0.0051 , r = 0.9968 ) บีตา - แคโรทีน ลูทีน และซีแซนทีน
, ตามลำดับ สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล ทั้งหมดวิเคราะห์ทดลอง อย่างน้อยทั้งสามใบ
การทดลองวิเคราะห์ข้อมูลด้วยการวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) และเปรียบเทียบความแตกต่างของค่าเฉลี่ย
วิเคราะห์โดย Multiple Range test ดันแคน
การวิเคราะห์องค์ประกอบหลักและการวิเคราะห์สหสัมพันธ์
( PCA ) ของผลของการใช้ SAS ( SAS Institute , แครี่ , 9.1
NC ) จะถูกแสดงบนพื้นฐานของเมตริกซ์สหสัมพันธ์ที่คำนวณและ
แบกเซอร์ ฮัมบี้ . ส่วนประกอบหลักกับ
ค่า > 1.0 ถูกสกัด ผลผลิตจาก PCA ประกอบด้วยคะแนน
แปลงที่จะเห็นความแตกต่างระหว่างตัวอย่างที่แตกต่างกันและการแปลง
ที่จะอธิบายถึงเหตุผลในการแยกกลุ่ม สัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ระหว่างการวิเคราะห์
ถูกหามออกจากเนื้อหาของแปดสาร .
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ในตอนนั้น
- lying down
- Say you'll see me again Even if it's jus
- เดินทางปลอดภัยนะครับ
- ฉันอยากไปเกาหลี
- คุณเล่นเฟสบูคไหม
- ต้มยำปลาม้า
- Petite and built to take a man to his kn
- เพราะมารยาท ทำให้ทุกอย่างง่ายดาย.
- underway
- How do personal and social media affect
- LIMITATIONS OF THE STUDYFirst, a nonrand
- ต้มยำปลาม้า
- เรียนสัปดาห์เว้นสัปดาห์
- ปัญหา
- 饺子在锅中要用勺子不停的沿动（就是用勺子将饺子压到水面下）
- It was a small bungalow in the city
- where are you
- flew airplanes at area 51.
- พักผ่อน
- glad
- ตอนนี้
- There are also commercial district of Ho
- I wanna hold you tight
