Each isolate was grown in individua

Each isolate was grown in individual 15 ml flasks containing 10 ml Luria–Bertani (LB) (Sigma Aldrich, L3022) medium at 30 ◦C and 80 rpm shaking, until OD600∼l—exponential growth phase. Analyses were performed for phosphorus solubilization, siderophore production, nitrogen fixation, phytohormone identification, ACC deaminase activity and biocontrol characteristic (antifungal and proteolitic activity). For nitrogen fixation, 1 l pure bacterial culture was inoculated on plates containing NFb solid medium with or without an addition of NH4C1 as a unique nitrogen source (Sgroy et al., 2009). Plates were incubated at 28 ◦C for 7 days. Bacterial growth was observed as qualitative evidence of the atmospheric nitrogen fixation. As positive and negative controls was used Azospirillum brasilense. Siderophores production was determined in Fe free Fiss Minimal medium (FM) (5 g KH2PO4 in 924 ml dd water, pH = 6.8. (6 M NaOH), then added 10 ml 0.001% MnSO4, 10 ml 0.4% MgSO4, 10 ml 0.005% ZnCl2 and 10 ml 50% glucose,then was added 5 g of asparagine dissolved in 30 ml dd water), 1 l pure bacterial culture was inoculated in flasks containing FM liquid medium. Flasks were incubated for 24–30 h at 29 ◦C with constant shaking at 120 rpm, at 30 ◦C with triplicates. Following the incubation, broth was centrifuged (10,000 rpm for 15 min) and cell free supernatant was subjected to detection of siderophores. This production was determined by the methods of Schwyn and Neilands. Positive control was made with P. fluorescens (Schwyn and Neilands, 1987). The assay for phosphate solubilization was done by a methods of Katznelson and Bose (1959). 1 l pure bacterial culture was inoculated in plates containing trypticase soya agar (TSA) solid medium (Sigma Aldrich, 22091) supplemented with Ca5(P04)3OH. Plates were incubated at 30 ◦C for 7 days, with daily observation of transparent “halos” around each colony. Positive control was made with P. fluorescens strain in similar culture conditions (Cattelan et al., 1999). Bacterial isolates were tested for in vitro growth inhibition of phytopathogenic fungi Alternaria alternata., Fusarium oxysporum and Fusarium culmorum. 1 l of each LB pure bacterial culture was inoculated on plates containing PGA (Potato Glucose Agar) solid medium (Sigma Aldrich, 70139), and a 3-cm-diameter cylinder of mycelia was introduced in the plate center and incubated for 10 days at 25 ◦C. The positive control was sterile plate inoculated with mycelium. Mycelia growth inhibition was calculated by the formula s = [(C − T)/C] × 100, where: s = mycelia growth inhibition in percentage, C = mycelia diameter in control, and T = mycelia diameter in bacteria-inoculated plates. Fungal mycelia cultivated for 10 days were used as control. Protease production was determined according to Abo-Aba et al. (2006) with modifications. Plates were inoculated with 1 l pure bacterial culture in halfway points of a Petri dish containing MA 3% (Milk Agar) (Sigma Aldrich, 70147). Plates were incubated at 28 ◦C and observed daily for formation of transparent haloes around each colony for up to 4 days (Abo-Aba et al., 2006). ACC deaminase activity was determined by the method of Glick (2005). For this, 1 l of each pure bacterial culture was inoculated into flasks containing M9 liquid media (Na2HPO4 5.8 g l −1; KH2PO4 3 g l −1; NaCl 0.5 g l −1; NH4Cl 1 g l −1; CaCl2 0.25 mM; MgSO4 1 mM; glucose 0.15%; biotin 0.3 g ml−1) + NH4Cl. Strains were incubated in 5 ml of M9 medium or modified M9 for 3 days at 30 ◦C. The test strains were centrifuged. Centrifugation pellets were washed twice with 0.1 M Tris–HCl (pH 7.5) then, either 2 ml of modified M9 medium containing NH4Cl or ACC, was added to the centrifugation pellet of bacteria. A control was also run, containing neither ACC or NH4Cl. After growth, based on turbidity, the turbid samples were centrifuged for 10 min at 10,000 rpm, washed twice with 0.1 M Tris–HCl (pH 7.5). Finally centrifuged pellet was taken up in 200 l of 0.1 M Tris–HCl(pH 8.5), 5% v/v toluene and left for 1 h. To 200 l cell of extract was added 20 l of 0.5 M ACC and incubated at 30 ◦C for 30 min. Then l ml 0.56 N HCl was added, and the sample was centrifuged (10,000 rpm, 5 min). To 1 ml of the supernatant was added 800 l of 0.56 N HCl, vortexed and added 300 l of 0.2% 2,4-dinitrophenylhydrazine, incubated at 30 ◦C for 30 min. Then 2 ml of 2 N NaOH was added and the absorbance was measured at a wavelength of 540 nm. For IAA growth hormone testing bacteria were grown for 4 days in flasks of 20 ml SMS liquid medium (saccharose 1% 10 g; (NH4)2SO4 0.1% 1 g; K2HPO4 0.2% 2 g; MgSO4•7H2O 0.05% 1.03 g; NaCl 0.01% 0.1 g; yeast extract 0.05% 0,5 g; CaCO3 0.05% 0.5 g; pH 7.2; tryptophan 0.5 g l −1 0.5 g). After the incubation period, 1 ml of bacterial suspension was transferred to Falcon plastic tubes of a capacity 10 ml and with vigorous stirring 2 ml of Salkowsky’s reagent(1.0 ml 0.5 M FeCl3 in 50 ml of 35% HC104) was added. Samples were allowed to stand at room temperature for 20 min. Absorbance was measured after 25 min at 530 nm. The standard curve was prepared with IAA solution.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกแต่ละถูกปลูกในน้ำ 15 ml แต่ละที่ประกอบด้วย 10 ml Luria-Bertani (ปอนด์) (Aldrich ซิก L3022) กลางที่ 30 ◦C และ 80 rpm สั่น จนถึง OD600∼l — ระยะเรขา มีดำเนินการวิเคราะห์ฟอสฟอรัส solubilization ผลิต siderophore ปฏิกิริยาการตรึงไนโตรเจน phytohormone รหัส บัญชี deaminase กิจกรรม และลักษณะ biocontrol (กิจกรรมต้านเชื้อราและ proteolitic) สำหรับปฏิกิริยาการตรึงไนโตรเจน 1 l วัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ถูก inoculated ในแผ่นประกอบด้วย NFb ที่แข็งปานกลางมี หรือไม่ มีการเพิ่ม NH4C1 เป็นแหล่งไนโตรเจนที่ไม่ซ้ำกัน (Sgroy et al., 2009) แผ่นก็ incubated ที่ 28 ◦C 7 วัน เจริญเติบโตของเชื้อแบคทีเรียที่พบเป็นหลักฐานเชิงคุณภาพของปฏิกิริยาการตรึงไนโตรเจนบรรยากาศ เป็นบวก และลบตัวควบคุมถูกใช้ Azospirillum brasilense กำหนดผลิต Siderophores ใน Fe ฟรี Fiss น้อย (FM) (KH2PO4 g 5 924 ml dd น้ำ pH = 6.8 (6 M NaOH), แล้วเพิ่ม 10 ml 0.001% MnSO4, 10 ml 0.4% MgSO4, 10 ml 0.005% ZnCl2 และกลูโคส 50% 10 ml แล้วเป็น asparagine เพิ่ม 5 กรัมละลายในน้ำ 30 ml dd), 1 l วัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ถูก inoculated ในน้ำประกอบด้วยปานกลางสภาพคล่อง FM น้ำมี incubated สำหรับ h 24 – 30 29 ◦C ที่มีการสั่นคงที่ที่ 120 rpm ที่ 30 ◦C กับ triplicates ต่อคณะทันตแพทยศาสตร์ ซุป centrifuged (10000 rpm สำหรับ 15 นาที) และเซลล์ supernatant ฟรีถูกต้องตรวจ siderophores ผลิตนี้ถูกกำหนด โดยวิธีการของ Schwyn และ Neilands ทำการควบคุมบวกกับ P. fluorescens (Schwyn และ Neilands, 1987) ทดสอบการ solubilization ฟอสเฟตถูกทำตามวิธีของ Katznelson และโบส (1959) 1 l วัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ถูก inoculated ในแผ่นประกอบด้วย trypticase เหลือง agar (TSA) แข็งปานกลาง (Aldrich ซิก 22091) เสริม ด้วย Ca5 3OH (P04) แผ่นก็ incubated ที่ 30 ◦C 7 วัน มีการเก็บข้อมูลรายวันของโปร่งใส "halos" รอบโคโลนีแต่ละ ทำการควบคุมบวกกับสายพันธุ์ P. fluorescens ในสภาพวัฒนธรรมคล้ายกัน (Cattelan et al., 1999) มีทดสอบแบคทีเรียที่แยกได้ในการยับยั้งการเจริญเติบโตใน phytopathogenic เชื้อรา Alternaria alternata, Fusarium oxysporum และ Fusarium culmorum l 1 ของแต่ละวัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ปอนด์ถูก inoculated ในแผ่นประกอบด้วย PGA (มันฝรั่งน้ำตาลใน Agar) แข็งปานกลาง (Aldrich ซิก 70139), และรูปทรงกระบอกขนาด 3 ซม.ของ mycelia ในตัวแผ่น และ incubated สำหรับ 10 วันที่ 25 ◦C ควบคุมค่าบวกเป็นแผ่นใส่ inoculated กับ mycelium Mycelia ยับยั้งการเจริญเติบโตถูกคำนวณ โดย s สูตร = [(C − T) /C] × 100 ที่: s = mycelia ยับยั้งการเจริญเติบโตเปอร์เซ็นต์ C = mycelia เส้นผ่าศูนย์กลางในการควบคุม และ T =เส้นผ่าศูนย์กลาง mycelia ในแผ่น inoculated แบคทีเรีย เชื้อรา mycelia cultivated 10 วันถูกใช้เป็นตัวควบคุม ผลิตรติเอสถูกกำหนดตาม Abo Aba et al. (2006) ด้วยการปรับเปลี่ยน แผ่นก็ inoculated กับวัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ 1 l ในจุดที่อยู่ตรงกลางของตัวจานเพาะเชื้อประกอบด้วย MA 3% (นม Agar) (Aldrich ซิก 70147) แผ่นก็ incubated ที่ 28 ◦C และสังเกตการก่อตัวของ haloes โปร่งใสรอบโคโลนีแต่ละถึง 4 วัน (Abo Aba และ al., 2006) ทุกวัน กิจกรรม deaminase บัญชีถูกกำหนด โดยวิธีการ Glick (2005) สำหรับนี้ l 1 ของแต่ละวัฒนธรรมเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์ถูก inoculated ในน้ำประกอบด้วย M9 เหลวสื่อ (Na2HPO4 5.8 g l −1 KH2PO4 3 g l −1 NaCl 0.5 g l −1 NH4Cl 1 g l −1 CaCl2 0.25 mM MgSO4 1 mM น้ำตาลกลูโคส 0.15% ไบโอติน 0.3 g ml−1) + NH4Cl สายพันธุ์ที่ถูก incubated ใน 5 ml ของ M9 กลาง หรือดัด M9 3 วันที่ 30 ◦C สายพันธุ์ทดสอบถูก centrifuged ขี้ centrifugation ถูกล้างสองครั้ง ด้วย 0.1 M ตรี – HCl (pH 7.5) 2 ml ของ M9 แก้ไข NH4Cl ที่มีขนาดกลางหรือบัญชี อาจถูกเพิ่มเข้าไปเม็ด centrifugation ของแบคทีเรีย ตัวควบคุมถูกเรียกใช้ ประกอบด้วยไม่มีบัญชีหรือ NH4Cl หลังจากเติบโต ขึ้นอยู่กับความขุ่นของน้ำ ตัวอย่าง turbid ถูก centrifuged สำหรับ 10 นาทีที่ 10000 rpm ล้างสองครั้ง ด้วย 0.1 M ตรี – HCl (pH 7.5) เม็ดสุดท้าย centrifuged ถูกถ่ายขึ้นใน 200 l 0.1 M ตรี – HCl(pH 8.5), 5% v/v ในโทลูอีน และซ้ายสำหรับ 1 h ใน 200 l เซลล์ของสารสกัดถูกเพิ่ม 0.5 M บัญชี 20 l และ incubated ที่ 30 ◦C สำหรับ 30 นาที แล้ว มล l 0.56 เพิ่ม N HCl และตัวอย่างถูก centrifuged (10000 รอบต่อนาที 5 นาที) การ 1 ml ของ supernatant ถูกเพิ่ม 800 l-0.56 N HCl, vortexed และ l 300 เพิ่ม 0.2% 2, 4-dinitrophenylhydrazine, incubated ที่ 30 ◦C ใน 30 นาที แล้วเข้ามา 2 ml ของ 2 N NaOH และถูกวัด absorbance ที่ความยาวคลื่นของ 540 nm สำหรับฮอร์โมน IAA เจริญเติบโต แบคทีเรียทดสอบถูกปลูก 4 วันในน้ำ 20 ml SMS เหลวปานกลาง (saccharose 1% 10 g (NH4) 2SO4 0.1% 1 g K2HPO4 0.2% 2 g MgSO4•7H2O 0.05% 1.03 g NaCl 0.01% 0.1 g ยีสต์สกัด 0.05% 0, 5 g CaCO3 0.05% 0.5 g pH 7.2 ทริปโตเฟน 0.5 g l −1 0.5 g) หลังจากระยะฟักตัว 1 ml ของระงับแบคทีเรียถูกถ่ายโอนไปท่อพลาสติกเหยี่ยวของความจุ 10 ml และคึกคักกวน 2 ml ของรีเอเจนต์ของ Salkowsky (1.0 ml 0.5 M FeCl3 ใน 50 ml 35% HC104) เพิ่มขึ้น ตัวอย่างที่อนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้องประมาณ 20 นาทีสำหรับ Absorbance ที่วัดหลังจากนาทีที่ 25 ที่ 530 nm เส้นโค้งมาตรฐานที่พร้อมโซลูชัน IAA

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แต่ละแยกถูกปลูกในแต่ละ 15 มลขวดบรรจุ 10 มล. Luria-Bertani (LB) (ซิกม่าดิช, L3022) กลางวันที่ 30 ◦Cและ 80 รอบต่อนาทีเขย่าจนระยะการเจริญเติบโต OD600~l-ชี้แจง วิเคราะห์ได้ดำเนินการสำหรับการละลายฟอสฟอรัส siderophore ผลิต, การตรึงไนโตรเจนระบุ phytohormone กิจกรรม deaminase แม็กและลักษณะควบคุมทางชีวภาพ (กิจกรรมต้านเชื้อราและ proteolit​​ic) สำหรับการตรึงไนโตรเจน 1 ลิตรวัฒนธรรมแบคทีเรียบริสุทธิ์เชื้อบนจานที่มีขนาดกลาง NFB ของแข็งมีหรือไม่มีการเพิ่มของ NH4C1 เป็นแหล่งไนโตรเจนที่ไม่ซ้ำกัน (Sgroy et al., 2009) แผ่นถูกบ่มที่ 28 ◦Cเป็นเวลา 7 วัน เจริญเติบโตของแบคทีเรียพบว่าเป็นหลักฐานเชิงคุณภาพของการตรึงไนโตรเจนในชั้นบรรยากาศ เป็นตัวควบคุมบวกและลบที่ใช้ Azospirillum brasilense siderophores ผลิตที่กำหนดไว้ในเฟฟรี Fiss กลางน้อยที่สุด (FM) (5 กรัม KH2PO4 ใน 924 มล. น้ำพิ่ค่า pH = 6.8. (6 M NaOH) แล้วเพิ่ม 10 มล. 0.001% MnSO4 10 มล. 0.4% MgSO4 10 มล 0.005 ZnCl2% และ 10 มล. น้ำตาลกลูโคส 50% แล้วถูกเพิ่มเข้ามา 5 กรัม asparagine ละลายในน้ำ 30 มลวว) 1 ลิตรวัฒนธรรมแบคทีเรียเชื้อบริสุทธิ์ในขวดที่มีอาหารเหลว FM ขวดถูกบ่มเป็นเวลา 24-30 ชั่วโมงที่ 29 ◦Cกับคงเขย่าที่ 120 รอบต่อนาทีวันที่ 30 ◦Cกับ triplicates ต่อไปนี้การบ่มน้ำซุปได้รับการหมุนเหวี่ยง (10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที) และเซลล์ใสฟรีได้ภายใต้การตรวจสอบของ siderophores การผลิตนี้ถูกกำหนดโดยวิธีการของ Schwyn และ Neilands ควบคุมบวกได้ถูกทำให้มีพี fluorescens (Schwyn และ Neilands, 1987) สำหรับการทดสอบการละลายฟอสเฟตที่ถูกทำโดยวิธีการของ Katznelson และโบส (ที่ 1959) 1 ลิตรวัฒนธรรมแบคทีเรียบริสุทธิ์ได้รับเชื้อในจานอาหารเลี้ยงเชื้อที่มี trypticase ถั่วเหลือง (TSA) สื่อที่เป็นของแข็ง (ซิกม่าดิช, 22091) เสริมด้วย CA5 (P04) 3OH แผ่นถูกบ่ม ณ วันที่ 30 ◦Cเป็นเวลา 7 วันมีการสังเกตชีวิตประจำวันของโปร่งใส "รัศมี" รอบแต่ละกลุ่ม ควบคุมบวกได้ถูกทำให้มีพี fluorescens สายพันธุ์ในสภาพวัฒนธรรมที่คล้ายกัน (Cattelan et al., 1999) แบคทีเรียได้รับการทดสอบในหลอดทดลองสำหรับการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราสาเหตุโรคพืช Alternaria alternata. Fusarium oxysporum และ Fusarium culmorum 1 ลิตรของแต่ละ LB วัฒนธรรมแบคทีเรียบริสุทธิ์เชื้อบนจานที่มีส่วนผสมของพีจีเอ (มันฝรั่งกลูโคสวุ้น) สื่อที่เป็นของแข็ง (ซิกม่าดิช, 70,139) และที่สูบ 3 เซนติเมตรเส้นผ่านศูนย์กลางของเส้นใยเป็นที่รู้จักในศูนย์จานและบ่มเป็นเวลา 10 วัน 25 ◦C การควบคุมบวกแผ่นผ่านการฆ่าเชื้อด้วยเส้นใยเชื้อ เส้นใยยับยั้งการเจริญที่คำนวณได้จากสูตรนั้น = [(C - T) / C] × 100 ที่: s = การยับยั้งการเจริญเส้นใยในอัตราร้อยละ, C = เส้นผ่าศูนย์กลางเส้นใยในการควบคุมและ T = เส้นผ่าศูนย์กลางเส้นใยในจานเชื้อแบคทีเรีย เส้นใยเชื้อราที่ปลูกเป็นเวลา 10 วันถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุม การผลิตโปรติเอสได้รับการพิจารณาตาม Abo-Aba et al, (2006) มีการปรับเปลี่ยน แผ่นถูกเชื้อ 1 ลิตรกับวัฒนธรรมแบคทีเรียบริสุทธิ์ในจุดที่ครึ่งหนึ่งของจานเลี้ยงเชื้อที่มีแมสซาชูเซต 3% (วุ้นนม) (ซิกม่าดิช, 70147) แผ่นถูกบ่มที่ 28 ◦Cและสังเกตรายวันสำหรับการก่อตัวของชมพูโปร่งใสรอบแต่ละกลุ่มได้ถึง 4 วัน (Abo-Aba et al., 2006) กิจกรรม deaminase แม็กถูกกำหนดโดยวิธีการของกลิก (2005) สำหรับเรื่องนี้ 1 ลิตรของแต่ละวัฒนธรรมแบคทีเรียบริสุทธิ์ได้รับเชื้อเข้าไปในขวดที่มีสื่อของเหลว M9 (Na2HPO4 5.8 GL -1; KH2PO4 3 GL -1; โซเดียมคลอไรด์ 0.5 GL -1; NH4Cl 1 GL -1; CaCl2 0.25 มิลลิ; MgSO4 1 มิลลิ ; กลูโคส 0.15% ไบโอติน 0.3 กรัม ml-1) + NH4Cl สายพันธุ์ที่ถูกบ่มใน 5 มล. ของกลาง M9 หรือการปรับเปลี่ยน M9 เป็นเวลา 3 วันวันที่ 30 ◦C สายพันธุ์ที่ได้รับการทดสอบการหมุนเหวี่ยง เม็ดหมุนเหวี่ยงถูกล้างครั้งที่สอง 0.1 M Tris-HCl (pH 7.5) จากนั้นทั้ง 2 มิลลิลิตรของกลางที่มีการปรับเปลี่ยน M9 NH4Cl หรือแม็กถูกบันทึกอยู่ในเม็ดหมุนเหวี่ยงของเชื้อแบคทีเรีย การควบคุมก็ยังทำงานที่มีทั้งแม็กหรือ NH4Cl หลังจากที่การเจริญเติบโตอยู่บนพื้นฐานของความขุ่นตัวอย่างขุ่นถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 10,000 รอบต่อนาทีล้างครั้งที่สอง 0.1 M Tris-HCl (pH 7.5) เม็ดหมุนเหวี่ยงสุดท้ายถูกนำตัวขึ้นมาใน 200 ลิตร 0.1 M Tris-HCl (pH 8.5), 5% w / v โทลูอีนและด้านซ้ายเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ไปยังเซลล์ 200 ลิตรของสารสกัดถูกเพิ่มเข้ามา 20 ลิตร 0.5 M แม็กและบ่มที่อุณหภูมิ 30 ◦Cเป็นเวลา 30 นาที จากนั้นมล. 0.56 ลิตรไม่มี HCl ถูกเพิ่มเข้ามาและตัวอย่างที่ถูกหมุนเหวี่ยง (10,000 รอบต่อนาที 5 นาที) 1 มิลลิลิตรใสถูกเพิ่ม 800 ลิตร 0.56 ไม่มี HCl, การ vortex และเพิ่ม 300 ลิตร 0.2% 2,4-dinitrophenylhydrazine, บ่มที่ 30 ◦Cเป็นเวลา 30 นาที จากนั้น 2 มล. 2 ไม่มี NaOH ถูกบันทึกและการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ความยาวคลื่น 540 นาโนเมตร สำหรับฮอร์โมนการเจริญเติบโต IAA ทดสอบแบคทีเรียเติบโตขึ้นเป็นเวลา 4 วันในขวด 20 มล. อาหารเหลว SMS (saccharose 1% 10 กรัม (NH4) 2SO4 0.1% 1 กรัม; K2HPO4 0.2% 2 กรัม; MgSO4 • 7H2O 0.05% 1.03 กรัมโซเดียมคลอไรด์ 0.01% 0.1 กรัมยีสต์สกัด 0.05% 0.5 กรัม CaCO3 0.05% 0.5 กรัม; pH 7.2; โพรไบโอ 0.5 GL -1 0.5 กรัม) หลังจากระยะฟักตัว 1 มิลลิลิตรของการระงับแบคทีเรียถูกย้ายไปอยู่หลอดพลาสติกเหยี่ยวของความจุ 10 มล. และมีการกวนแข็งแรง 2 มลสารของ Salkowsky (1.0 มล. 0.5 M FeCl3 50 มล. 35% HC104) ถูกเพิ่มเข้ามา ตัวอย่างได้รับอนุญาตให้อยู่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที วัดการดูดกลืนแสงหลังจาก 25 นาทีที่ 530 นาโนเมตร โค้งมาตรฐานถูกจัดทำขึ้นด้วยโซลูชั่น IAA

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แต่ละแยกปลูกในแต่ละ 15 ml ขวดที่มีมลลุเรีย–แบร์ตานิ 10 ( ปอนด์ ) ( ซิกม่า Aldrich l3022 ) ( 30 ◦ C และความเร็ว 80 รอบสั่น จน od600 ∼ l-exponential การเจริญเติบโตระยะ วิเคราะห์ข้อมูลการใช้ฟอสฟอรัส การสกัด การผลิต การตรึงไนโตรเจน การกำหนดชุด phytohormone ,กิจกรรมและทำแผนที่ของไบโอคอนโทรล ( กิจกรรมในลักษณะ และ proteolitic ) สำหรับการตรึงไนโตรเจน 1 บริสุทธิ์วัฒนธรรมเป็นเชื้อแบคทีเรียในจานที่มี nfb แข็ง ขนาดกลาง มี หรือ ไม่มี นอกจากนี้ nh4c1 เป็นแหล่งไนโตรเจนที่เป็นเอกลักษณ์ ( sgroy et al . , 2009 ) แผ่น◦อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 7 วันการเติบโตของแบคทีเรียพบว่าเป็นหลักฐานเชิงคุณภาพของการตรึงไนโตรเจนในบรรยากาศ . เป็นตัวควบคุมบวกและลบก็ใช้โซ ปริลลัม brasilense . การผลิตไซตั้งใจ Fe ฟรี fiss กลางน้อยที่สุด ( FM ) ( 5 กรัม kh2po4 ใน 820 มิลลิลิตร dd น้ำ pH = 6.8 . ( 6 M NaOH ) แล้วเพิ่ม 10 mnso4 0.001% ml 0.4% MgSO4 ใ 10 ml zncl2 10 ml 0.005% และกลูโคส 50% 10 มิลลิลิตรแล้วก็เพิ่ม 5 กรัม ละลายในน้ำ asparagine DD 30 มล. ) 1 ลิตรแบคทีเรียวัฒนธรรมเป็นเชื้อบริสุทธิ์ในขวดบรรจุอาหารเหลว fm ขวดถูกบ่ม 24 – 30 H ที่ 29 ◦ C คงที่ สั่นที่ 120 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส ◦ล้อม . ต่อไปนี้ระยะเวลา broth คือระดับ ( 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที ) และเซลล์อิสระภายใต้การนำของไซเดอโรฟอร์ .การผลิตนี้ถูกกำหนดโดยวิธีการ schwyn และ neilands . บวกกับหน้าการควบคุมโรค ( schwyn และ neilands , 1987 ) ( สำหรับการสกัดและทำโดยวิธีการของ katznelson และ Bose ( 1959 ) 1 ลิตรแบคทีเรียวัฒนธรรมเป็นเชื้อบริสุทธิ์ในจานที่มี trypticase ถั่วเหลือง ( TSA ) แข็งปานกลาง ( ซิกม่า Aldrich 22091 ) เสริมด้วย ca5 ( P04 ) 3oh .แผ่น◦อุณหภูมิ 30 C เป็นเวลา 7 วัน กับสังเกตทุกวัน รัศมีแห่งโปร่งใส " ในแต่ละรอบนิคม ควบคุมบวกให้กับ P . fluorescens สายพันธุ์ในสภาพวัฒนธรรมที่คล้ายคลึงกัน ( cattelan et al . , 1999 ) แบคทีเรียไอโซเลท มาทดสอบในหลอดทดลองมีฤทธิ์ในการยับยั้งการเจริญเติบโตของเชื้อราโรค phytopathogenic alternata . , Fusarium oxysporum และ Fusarium culmorum .1 ลิตรของแต่ละปอนด์บริสุทธิ์วัฒนธรรมเป็นเชื้อแบคทีเรียในจานที่มีพีจีเอ ( วุ้นกลูโคสมันฝรั่ง ) แข็งปานกลาง ( ซิกม่า Aldrich 70139 ) และ 3-cm-diameter กระบอกของเส้นใยใช้ในศูนย์จานและบ่มเป็นเวลา 10 วัน ที่ 25 ◦ C บวกควบคุมปลอดเชื้อ จานที่ใส่เส้นใย . การยับยั้งการเจริญเติบโตเส้นใยถูกคำนวณโดยสูตร s = [ ( C − t ) C / ] × 100สถานที่ : S = การยับยั้งการเจริญเติบโตเส้นใยร้อยละ , C = เส้นใยขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางเส้นใยในการควบคุม และ t = แบคทีเรียเชื้อในจาน รา าร เพาะปลูก 10 วัน ที่ใช้ควบคุม การผลิตเอนไซม์โปรตีเอส ตัดสินใจตาม ABO ABA et al . ( 2006 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนแผ่น 1 ผมปลูกเชื้อแบคทีเรียบริสุทธิ์วัฒนธรรมในจุดที่ครึ่งหนึ่งของจานเพาะเชื้อที่มีมา 3 % ( วุ้นนม ) ( ซิกม่า Aldrich 70147 ) แผ่นอุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส และ◦สังเกตทุกวัน สำหรับการ haloes ใสรอบโคโลนีแต่ละได้ถึง 4 วัน ( ABO ABA et al . , 2006 ) กิจกรรมทำแผนที่บัญชีถูกกำหนดโดยวิธีของ Glick ( 2005 ) สำหรับเรื่องนี้1 ลิตรแบคทีเรียที่เป็นเชื้อบริสุทธิ์แต่ละวัฒนธรรมอาหารเหลวที่มี M9 ( na2hpo4 5.8 g L − 1 ; kh2po4 3 G L − 1 ; โซเดียมคลอไรด์ 0.5 g L − 1 ; 4 . 1 G L − 1 ; CaCl2 0.25 มม. ; MgSO4 ใ 1 มิลลิเมตร กลูโคสไบโอติน 0.15 เปอร์เซ็นต์ 0.3 กรัมมิลลิลิตร− 1 ) 4 . . สายพันธุ์ ) 5 ml ของ M9 ขนาดกลางหรือ M9 แก้ไข 3 วันที่ 30 ◦ C . สายพันธุ์ทดสอบระดับ .ปั่นได้ซักสองเม็ด 0.1 M HCl ( pH 7.5 ( ต่อ ) แล้วทั้ง 2 มิลลิลิตรของอาหารที่มีการแก้ไข 4 . M9 หรือบัญชี , เพิ่มไป 3 เม็ดของแบคทีเรีย การควบคุมยังวิ่ง ที่มีทั้งบัญชีหรือ 4 . หลังจากที่การเจริญเติบโตขึ้นอยู่กับความขุ่น อย่างขุ่นเป็นระดับ 10 นาทีที่ 10 , 000 รอบต่อนาที ล้างหน้าสองครั้งด้วย 0.1 M HCl ( pH 7.5 ( ต่อ )ในที่สุดเม็ดนั้นถูกยกขึ้นในระดับ 200 ลิตรความเข้มข้น 0.1 M HCl ( ทริส ) pH 8.5 ) , 5% v / v โทลูอีนและทิ้งไว้เป็นเวลา 1 ชั่วโมง 200 และสารสกัดเพิ่ม 20 ลิตร 0.5 m บัญชีและบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที แล้วผม◦มิลลิลิตร ( N HCl ถูกเพิ่มและ ตัวอย่างระดับ ( 10 , 000 รอบต่อนาที 5 นาที ) 1 มิลลิลิตร และน่าน ได้เพิ่ม 800 ลิตร ( N HCl , vortexed และเพิ่ม 300 ล. 0.2 % 24-dinitrophenylhydrazine บ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที จากนั้น◦ 2 มิลลิลิตร เติม 2 N NaOH และค่าวัดที่ความยาวคลื่น 540 นาโนเมตร สำหรับ IAA ฮอร์โมนการเจริญเติบโตการทดสอบแบคทีเรียเติบโตขึ้นเป็นเวลา 4 วัน ในขวด 20 ml SMS เหลว ( แซคคาโรส 1 10 กรัม ( NH4 ) 2so4 0.1 % 1 G ; k2hpo4 0.2% 2 g ; MgSO4 ใ - 7h2o 0.05% 1.03 กรัม ; โซเดียมคลอไรด์ความเข้มข้น 0.01 0.1 g ; สารสกัดจาก 0.05 % 0 , 5 กรัมยีสต์ ; CaCO3 0.05 % 0.5 g ;pH 7.2 ; ทริปโตเฟน 0.5 กรัม L − 1 0.5 กรัม ) หลังจากระยะเวลา 1 มิลลิลิตร bacterial suspension ไปเป็นเหยี่ยว พลาสติก ท่อ ขนาด 10 ml และคึกคักเร้าใจ 2 มิลลิลิตร salkowsky เป็นรีเอเจนต์ ( 1.0 มล. 0.5 m FeCl3 50 มิลลิลิตร 35% hc104 ) ถูกเพิ่มเข้ามา ตัวอย่างที่ได้รับอนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 20 นาที ค่าวัดหลังจาก 25 นาทีที่ 530 nm .เส้นโค้งมาตรฐาน IAA ถูกเตรียมด้วยวิธี