5 mL of various samples, including yeast extract, peptone, tryptone, PEMHP, and MHP (all in 0.1%) was added to 50 mL sodium bicarbonate buffer (0.1 M, pH 9.0) and 100 mL Dabsyl chloride reagent solution. The mixture was heated to 70 8C for 20 min, followed by cooling to 25 8C, and then a volume of 345 µL dilution buffer (25 mM H3PO4, pH 7.0 in HPLC grade water/acetonitrile, 90/ 10, v/v) was added to the sample solution. The mixture was filtered through a 0.22 mm disc to yield the injection sample. The amino acid assay was performed by using an HPLC with C18 column (Grom-sil DABS, 4 mm, 4.6 mm 200 mm, GRACE, USA). The mobile phase consisted of solvent A (24 mM sodium acetate buffer, pH 6.6/acetonitrile, 82/18, v/v) and solvent B (acetonitrile/ 2-propanol, 40/60, v/v). The following gradient procedure was used: 0–4 min, A:B = 95:5 (v/v); 4–8 min, A:B = 80:20 (v/v); 8– 15 min, A:B = 75:25 (v/v); 15–27 min, A:B = 40:60 (v/v); 27– 28 min, A:B = 0:100 (v/v); 28–31 min, A:B = 0:100 (v/v); 31– 32 min, A:B = 95:5 (v/v). The UV detection, pump flow rate, sample inject volume and column temperature were set at 436 nm, 1 mL/min, 20 mL, and 45 8C, respectively.
5 มล.ของตัวอย่างต่าง ๆ รวมทั้งสารสกัดจากยีสต์ peptone, tryptone, PEMHP และ MHP (ทั้งหมดใน 0.1%) ถูกเพิ่มบัฟเฟอร์ไบคาร์บอเนตโซเดียม 50 mL (0.1 M, pH 9.0) และโซลูชั่นรีเอเจนต์คลอไรด์ Dabsyl 100 mL ส่วนผสมมีอุณหภูมิ 70 8C สำหรับ 20 นาที ตาม ด้วยการทำความเย็นการ 25 8C และไดรฟ์ข้อมูลบัฟเฟอร์เจือจาง µL 345 (25 มม. H3PO4 ค่า pH 7.0 ใน HPLC เกรด น้ำ/acetonitrile, 90 / 10, v/v) ถูกเพิ่มไปยังโซลูชันอย่าง ส่วนผสมที่กรองผ่านดิสก์ 0.22 มิลลิเมตรพบตัวอย่างฉีด วิเคราะห์กรดอะมิโนที่ดำเนินการ โดยใช้ HPLC ที่มีคอลัมน์ C18 (Grom ภาษาศาสตร์ป้าย 4 mm, 4.6 มม. 200 มม. เกรซ สหรัฐอเมริกา) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยตัวทำละลาย A (acetate โซเดียม 24 มม.บัฟเฟอร์ pH 6.6/acetonitrile, 82/18, v/v) และตัวทำละลาย B (acetonitrile / 2-อย่างไร propanol, 40/60, v/v) ใช้ขั้นตอนต่อไปนี้ไล่ระดับ: 0 – 4 นาที A:B = 95:5 (v/v); 4 – 8 นาที A:B = 80:20 (v/v); 8 – 15 นาที A:B = 75:25 (v/v); 15 – 27 min, A:B = 40:60 (v/v); 27 – 28 นาที A:B = 0:100 (v/v); 28 – 31 นาที A:B = 0:100 (v/v); 31 – นาทีที่ 32, A:B = 95:5 (v/v) ตรวจ UV อัตราการไหลปั๊ม ตัวอย่างฉีดปริมาตร และอุณหภูมิของคอลัมน์ถูกตั้ง 436 nm, 1 mL/min, 20 mL และ 45 8C ตามลำดับ
การแปล กรุณารอสักครู่..
5 มิลลิลิตรของกลุ่มตัวอย่างต่าง ๆ รวมทั้งสารสกัดจากยีสต์, เปปโตน, ทริปโตน, PEMHP และ MHP (ทั้งหมดใน 0.1%) ถูกบันทึกอยู่ใน 50 มลบัฟเฟอร์โซเดียมไบคาร์บอเนต (0.1 M, ค่า pH 9.0) และ 100 มิลลิลิตร Dabsyl การแก้ปัญหาสารคลอไรด์ ส่วนผสมที่ถูกความร้อนถึง 70 8C 20 นาทีตามด้วยการระบายความร้อนถึง 25 8C แล้วปริมาณของ 345 บัฟเฟอร์เจือจางไมโครลิตร (25 มม H3PO4 ค่า pH 7.0 ในน้ำเกรด HPLC / acetonitrile, 90/10, v / v) เป็น เพิ่มลงในสารละลายตัวอย่าง ส่วนผสมที่ถูกกรองผ่านแผ่นดิสก์ 0.22 มิลลิเมตรเพื่อให้ตัวอย่างการฉีด ทดสอบกรดอะมิโนได้รับการดำเนินการโดยใช้วิธี HPLC ด้วยคอลัมน์ C18 (Grom-SIL Dabs, 4 มม, 4.6 มิลลิเมตร 200 มิลลิเมตร GRACE, USA) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยตัวทำละลาย (24 มิลลิโซเดียมอะซิเตทบัฟเฟอร์ค่า pH 6.6 / acetonitrile, 82/18, v / v) และตัวทำละลาย B (acetonitrile / 2 โพร, 40/60, v / v) ขั้นตอนต่อไปนี้การไล่ระดับสีที่ใช้: 0-4 นาที, B = 95: 5 (v / v); 4-8 นาที, B = 80:20 (v / v); 8- 15 นาที, B = 75:25 (v / v); 15-27 นาที, B = 40:60 (v / v); 27- 28 นาที, B = 0: 100 (v / v); 28-31 นาที, B = 0: 100 (v / v); 31- 32 นาที, B = 95: 5 (v / v) การตรวจจับรังสียูวี, อัตราการไหลของปั๊มตัวอย่างปริมาณการฉีดและอุณหภูมิคอลัมน์ถูกตั้งไว้ที่ 436 นาโนเมตร 1 มิลลิลิตร / นาที, 20 มิลลิลิตรและ 45 8C ตามลำดับ
การแปล กรุณารอสักครู่..
5 ml ของตัวอย่างต่าง ๆ ได้แก่ ยีสต์สกัดเปปโตนทริพโทน pemhp , , , และตลอด ( ใน 0.1% ) คือเพิ่ม 50 ml โซเดียมไบคาร์บอเนตบัฟเฟอร์ ( 0.1 โมลาร์ pH 9.0 ) และ 100 ml dabsyl คลอไรด์ที่ใช้โซลูชั่น ส่วนผสมจะถูกความร้อน 70 8C นาน 20 นาที ตามด้วย เย็น 25 8C , แล้วปริมาณ 345 µ L ในบัฟเฟอร์ ( 25 มม. H3PO4 , pH 7.0 ใน HPLC เกรดน้ำ / ไน 90 / 10v / v ) คือการเพิ่มจำนวนโซลูชั่น ส่วนผสมจะถูกกรองผ่านแผ่นเป็น 0.22 มม. เพื่อผลตัวอย่างที่ฉีด ( กรดอะมิโนถูกดำเนินการโดยใช้ HPLC คอลัมน์ c18 ( กรอมซิลป้าย 4 มม. 4.6 มม. 200 มม. , เกรซ , USA ) เฟสเคลื่อนที่ประกอบด้วยตัวทำละลาย ( 24 มม. โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ พีเอช 6.6/acetonitrile 82 / 18 v / v ) และตัวทำละลาย B ( ไน / โพรพานอล , 40 / 60 v / v )ต่อไปนี้ขั้นตอนการใช้ : 0 – 4 นาที A : B = 95:5 ( v / v ) 4 – 8 นาที A : B = 80 : 20 ( v / v ) ; 8 – 15 นาที A : B = 5 ( v / v ) ; 15 – 30 นาที A : B = 40 : 60 ( v / v ) ; 27 – 28 นาที A : B = 0 ( v / v ) ; 28 – 31 นาที A : B = 0 ( v / v ) ; 31 32 นาที A : B = 95:5 ( v / v ) UV ตรวจจับอัตราการไหลของปั๊มฉีดและปริมาณตัวอย่างคอลัมน์อุณหภูมิตั้งที่ 436 nm 1 มิลลิลิตรต่อนาที 20 มิลลิลิตร และ 45 8C ตามลำดับ
การแปล กรุณารอสักครู่..