Digestive proteinases
There are two peaks (1 and 2) in activity with casein (general
substrate for proteinase) assayed at pH 5.5 that are resolved by ionexchange
chromatography (Fig. 2). These peaks are unaffected by
SBTI (Fig. 2, left column) and benzamidine (not shown), increase
with the addition of EDTA plus DTT and are almost abolished in the
presence of E-64 (not shown). This suggests the presence of two
active midgut cysteine proteinases. Z-FR-MCA (substrate used for
trypsin, but is also a substrate for cysteine proteinases) ishydrolyzed
by activities corresponding to four peaks (peaks 3, 4, 5, and, 6, Fig. 2,
middle column). Activities in peaks 3 and 4 are inhibited by SBTI and
those in peaks 5 and 6 are inhibited by E-64 (Fig. 2, middle column).
The occurrence of cysteineproteinase activitywas further confirmed
with the use of 1 mM e-amino-caproyl-leucyl-(S-benzyl) cysteinyl-
MCA, a substrate specific for cysteine proteinases (Alves et al., 1996),
for which hydrolysis was increased by EDTA + DTT (peaks 7 and 8)
and completely abolished by E-64.
Digestive proteinasesThere are two peaks (1 and 2) in activity with casein (generalsubstrate for proteinase) assayed at pH 5.5 that are resolved by ionexchangechromatography (Fig. 2). These peaks are unaffected bySBTI (Fig. 2, left column) and benzamidine (not shown), increasewith the addition of EDTA plus DTT and are almost abolished in thepresence of E-64 (not shown). This suggests the presence of twoactive midgut cysteine proteinases. Z-FR-MCA (substrate used fortrypsin, but is also a substrate for cysteine proteinases) ishydrolyzedby activities corresponding to four peaks (peaks 3, 4, 5, and, 6, Fig. 2,middle column). Activities in peaks 3 and 4 are inhibited by SBTI andthose in peaks 5 and 6 are inhibited by E-64 (Fig. 2, middle column).The occurrence of cysteineproteinase activitywas further confirmedwith the use of 1 mM e-amino-caproyl-leucyl-(S-benzyl) cysteinyl-MCA, a substrate specific for cysteine proteinases (Alves et al., 1996),for which hydrolysis was increased by EDTA + DTT (peaks 7 and 8)and completely abolished by E-64.
การแปล กรุณารอสักครู่..
proteinases ทางเดินอาหาร
มี 2 ยอด ( 1 และ 2 ) ในกิจกรรมกับเคซีน ( พื้นผิวทั่วไป
สำหรับโปรตีนเอนไซม์ที่ pH 5.5 ) ที่แก้ไขได้โดยการแลกเปลี่ยนไอออน chromatography
( รูปที่ 2 ) ยอดเหล่านี้จะได้รับผลกระทบโดย sbti
( รูปที่ 2 , คอลัมน์ด้านซ้าย ) และ benzamidine ( ไม่แสดง ) , เพิ่ม
ด้วยนอกจาก EDTA บวก DTT และเกือบจะยกเลิกในการแสดงตนของ e-64
( ไม่แสดง )นี้แสดงให้เห็นการปรากฏตัวของ 2
งานประสิทธิภาพและเหมาะสม proteinases กรดอะมิโน . z-fr-mca ( พื้นผิวที่ใช้สำหรับ
ทริปแต่ยังพื้นผิวสำหรับ 8-12 proteinases ) ishydrolyzed
โดยกิจกรรมที่เกี่ยวข้องกับสี่ยอด ( ยอด 3 , 4 , 5 , และ 6 รูปที่ 2 คอลัมน์
กลาง ) กิจกรรมยอดที่ 3 และ 4 จะถูกยับยั้งโดย sbti
เหล่านั้นและยอดที่ 5 และ 6 จะถูกยับยั้งโดย e-64 ( ภาพที่ 2 กลาง
คอลัมน์ )การเกิด cysteineproteinase
activitywas ยืนยันเพิ่มเติมด้วยการใช้ e-amino-caproyl-leucyl 1 มม. ( s-benzyl ) cysteinyl -
MCA , พื้นผิวที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ 8-12 proteinases ( Alves et al . , 1996 )
ที่ย่อยได้เพิ่มขึ้น EDTA DTT ( ยอด 7 และ 8 )
และสมบูรณ์ยกเลิกโดย e-64 .
การแปล กรุณารอสักครู่..