Recombinant protein production in Y

Recombinant protein production in Y. lipolytica
Upon transformation of the expression cassettes into Y. lipolytica
JMY1212 or JMY1165, ura-positive colonies were randomly selected
and grown at 28 C in 20 ml-flask YTD medium for 24 h.
These cultures were then used to inoculate fresh YTD medium
(20 ml) supplemented with 1.2 mM CuSO4 at an initial cell density
of OD600 = 0.2. After incubation at 28 C for 30 h under agitation
(135 rpm), culture media were centrifuged; the supernatants containing
the secreted proteins were recovered and subsequently
used for enzymatic assays or further purification steps. The effect
of copper ions (Cu2+) on the production of the laccase was also assayed
in JMY1212 strain by varying the concentration of CuSO4 in
the range 0–2 mM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การผลิต recombinant โปรตีนใน Y. lipolyticaเมื่อมีการเปลี่ยนแปลงของฝ้านิพจน์เป็น Y. lipolyticaJMY1212 หรือ JMY1165 บวก ura อาณานิคมถูกสุ่มเลือกและเติบโตที่ 28 C ใน 20 ml-หนาว YTD ปานกลาง 24 ชมวัฒนธรรมเหล่านี้ถูกใช้ฉีด YTD สดกลาง(20 ml) เสริม ด้วย 1.2 มม. CuSO4 ที่มีความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้นของ OD600 = 0.2 หลังจากบ่มที่ 28 C สำหรับ h 30 ภายใต้อาการกังวลต่อ(135 rpm), สื่อวัฒนธรรมถูก centrifuged supernatants ที่ประกอบด้วยโปรตีน secreted ถูกกู้คืน และในเวลาต่อมาใช้สำหรับ assays เอนไซม์ในระบบหรือขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป ผลของประจุทองแดง (Cu2 +) ในการผลิตของ laccase ถูกยัง assayedใน JMY1212 ต้องใช้โดยความเข้มข้นของ CuSO4 ในแตกต่างกันช่วง 0-2 mM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การผลิตโปรตีนในวาย lipolytica
เมื่อการเปลี่ยนแปลงของเทปการแสดงออกเข้าวาย lipolytica
JMY1212 หรือ JMY1165
อาณานิคมยูบวกสุ่มเลือกและการเติบโตที่28 องศาเซลเซียสใน 20 มล. ขวด-กลาง YTD เป็นเวลา 24 ชั่วโมง.
วัฒนธรรมเหล่านี้ถูกนำมาใช้แล้ว การฉีดวัคซีนกลาง YTD สด
(20 มล.) เสริมด้วย 1.2 มิลลิ CuSO 4
ความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้นของOD600 = 0.2 หลังจากการบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 ชั่วโมงภายใต้ความปั่นป่วน?
(135 รอบต่อนาที) สื่อวัฒนธรรมถูกหมุนเหวี่ยง; supernatants ที่มีโปรตีนที่หลั่งถูกกู้คืนและต่อมาใช้สำหรับการตรวจเอนไซม์หรือขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ต่อไป ผลของไอออนทองแดง (Cu2 +) ในการผลิตของแลคเคสได้รับการวิเคราะห์ยังอยู่ในสายพันธุ์ที่แตกต่างกันโดยJMY1212 ความเข้มข้นของ CuSO 4 ในช่วง0-2 มิลลิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การผลิตโปรตีนรีคอมบิแนนท์ใน lipolytica
เมื่อการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกซึ่งเป็นวาย lipolytica
jmy1212 หรือ jmy1165 ปานเจริญ , บวกอาณานิคมสุ่ม
และโตที่ 28  C 20 ml ขวดขนาดกลางในประเทศเป็นเวลา 24 ชั่วโมง
วัฒนธรรมเหล่านี้แล้วใช้เพื่อปลูกฝี
ขนาดกลางทั้งสด ( 20 มล. ) เสริมด้วย CuSO4 1.2 มม. ที่เริ่มต้นของความหนาแน่นเซลล์
od600 = 0.2หลังจากการบ่มที่ 28  เป็นเวลา 30 ชั่วโมง ในการกวน
( 135 รอบต่อนาที ) วัฒนธรรมเป็นสื่อระดับ ; supernatants ที่มีการหลั่งโปรตีนหาย

) และต่อมาใช้เอนไซม์บำบัดน้ำเสียหรือขั้นตอนต่อไป ผลของไอออนทองแดง
( CU2 ) ในการผลิตของเอนไซม์แลคเคส ยัง jmy1212
ในสายพันธุ์ที่ความเข้มข้นของ CuSO4 ใน
ช่วง 0 – 2 มิลลิเมตร