2.1. Sampling
Samples (50 g approx.) were collected from 22 different manufactures
of Iberian dry fermented sausages (10 ‘‘chorizos” and 12
‘‘salchichones”) bought in different supermarkets of Extremadura.
In addition, faecal samples of 21 healthy individuals (17 adults,
aged 25–30 years, and 4 infants, aged 6–12 months) and 30 healthy
pigs (from five different batches) obtained with sterile cotton
swabs were also included. All the samples were kept refrigerated,
so that their microbial load did not change during storage, and processed
1–8 h after collection.
2.2. LAB and bifidobacteria isolation
To isolate the LAB and bifidobacteria, 10 g of each sausage sample
were taken aseptically, transferred to sterile plastic pouches,
10-fold diluted with 1% peptone water (Pronadisa, Alcobendas,
Madrid, Spain), and homogenized for 120 s using the Stomacher
400 laboratory blender (Seward, London, UK). For the faecal samples,
they were mixed with a storage solution (pH 7.2) consisting
of (per L): 1 g yeast extract, 1 g KH2PO4, 0.15 g K2HPO4, 0.15 g
NH4Cl, 1 g NaCl, 0.6 g MgCl2x6H2O, 0.1 g KCl, and 0.5 g cysteine–
HCl, and stored under refrigeration until dilution. Serial 10-fold
dilutions of both sausage and faecal samples were prepared with
1% peptone water (Pronadisa) and inoculated on LAMVAB agar prepared
according to Hartemink, Kok, Weenk, and Rombouts (1997)
and M17 agar (Scharlab, Scharlab, Barcelona, Spain) for LAB, Slanezt
and Bartley (SB, Scharlab) for enterococci and Raffinose Bifidobacteria
agar (RB) prepared according to Hartemink, Kok, Weenk,
and Rombouts (1996) for bifidobacteria. All media were incubated
for 48 h at 37 C. About 20% of the typical colonies from each medium
were randomly selected from countable plates, and then
streaked onto their respective isolation media. For the Iberian
dry fermented sausage samples, plates with microbial counts less
than 7 logcfu/g of LAB were discarded. The pure cultures were
characterized by Gram staining, cell morphology, and catalase
reaction (Schillinger & Lücke, 1987). LAB and bifidobacteria isolates
were stored at 80 C in their specific broths plus 50% glycerol
(Scharlab). All strains were subcultured twice prior to use.
2.1 การสุ่ม
ตัวอย่าง (50 กรัมประมาณ) ได้รวบรวมจากผู้ผลิตอื่น 22
Iberian ไส้กรอกหมักแห้ง (10 '' chorizos"และ 12
'' salchichones") ซื้อในซุปเปอร์มาร์เก็ตต่าง ๆ ของ Extremadura
นอกจากนี้ ตัวอย่าง faecal บุคคลสุขภาพ 21 (ผู้ใหญ่ 17,
อายุ 25-30 ปี และ 4 ทารก อายุ 6 – 12 เดือน) และสุขภาพ 30
สุกร (จากห้าชุดแตกต่างกัน) ได้ ด้วยผ้ากอซ
swabs ยังถูกรวม ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่ควบคุมอุณหภูมิ,
ให้โหลดของจุลินทรีย์ได้ไม่เปลี่ยนแปลงระหว่างการเก็บรักษา และประมวลผล
h 1-8 หลังจากคอลเลกชัน
2.2 แยกห้องปฏิบัติการและ bifidobacteria
อ้างว้างแล็บและ bifidobacteria, g 10 ของแต่ละอย่างไส้กรอก
aseptically ถ่ายโอนย้ายไปใส่ถุงพลาสติก,
ทำให้เจือจาง ด้วยน้ำ 1% peptone 10-fold (Pronadisa, Alcobendas,
มาดริด สเปน), และ homogenized เป็นกลุ่มสำหรับ 120 ใช้แผงประดับหน้าอกที่
เบลนเดอร์ 400 ห้องปฏิบัติ (เวิร์ด ลอนดอน สหราชอาณาจักร) สำหรับตัวอย่าง faecal,
จะถูกผสมกับจัดเก็บโซลูชัน (pH 7.2) ประกอบด้วย
ของ (ต่อ L): สารสกัดยีสต์ 1 g, 1 g KH2PO4, 0.15 g K2HPO4, 0.15 g
NH4Cl, 1 g NaCl, 0.6 g MgCl2x6H2O, 0.1 กรัม KCl และ 0.5 g cysteine –
HCl และแช่แข็งเก็บไว้ภายใต้จนเจือจาง ประจำ 10-พับ
dilutions ไส้กรอกและ faecal ตัวอย่างได้พร้อม
peptone 1% น้ำ (Pronadisa) และ inoculated บน LAMVAB agar เตรียม
ตาม Hartemink กก Weenk และ Rombouts (1997)
และ agar M17 (Scharlab, Scharlab บาร์เซโลนา สเปน) สำหรับห้องแล็บ Slanezt
Bartley (SB, Scharlab สำหรับ enterococci) และ Raffinose Bifidobacteria
agar (RB) เตรียมตาม Hartemink กก Weenk,
Rombouts (1996) สำหรับ bifidobacteria และ สื่อทั้งหมดถูก incubated
สำหรับ h 48 ที่ 37 เซลเซียส ประมาณ 20% ของอาณานิคมทั่วไปจากสื่อแต่ละ
ถูกสุ่มเลือกจากแผ่นนับได้ แล้ว
ลายบนสื่อแยกแต่ละของพวกเขา สำหรับที่ Iberian
ตัวอย่างไส้กรอกหมักแห้ง แผ่นกับจุลินทรีย์จำนวนน้อย
กว่า logcfu 7 g ของห้องปฏิบัติถูกละทิ้ง วัฒนธรรมบริสุทธิ์ได้
โดยกรัมย้อมสี สัณฐานวิทยาของเซลล์ และ catalase
ปฏิกิริยา (Schillinger & Lücke, 1987) ห้องปฏิบัติการและ bifidobacteria แยก
ถูกเก็บไว้ที่ 80 C ในการ broths เฉพาะบวก 50% glycerol
(Scharlab) สายพันธุ์ทั้งหมด subcultured ครั้งก่อนนำไปใช้ได้
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)
2.1 ตัวอย่าง
ตัวอย่าง (50 กรัมประมาณ.) ได้รับการเก็บรวบรวมจาก 22 ที่แตกต่างกันผู้ผลิต
ของไอบีเรียไส้กรอกหมักแห้ง (10 '' Chorizos "และ 12
'salchichones ") ซื้อในซูเปอร์มาร์เก็ตที่แตกต่างกันของ Extremadura
นอกจากนี้ตัวอย่างอุจจาระจาก 21 บุคคลที่มีสุขภาพดี (17 ผู้ใหญ่
อายุ 25-30 ปีและ 4 ทารกอายุ 6-12 เดือน) และ 30 มีสุขภาพดี
หมู (จากห้าสำหรับกระบวนการที่แตกต่างกัน) ได้ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยผ้าฝ้าย
swabs ถูกรวมอยู่ด้วย ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บไว้ในตู้เย็น,
เพื่อให้ปริมาณจุลินทรีย์ของพวกเขาไม่เปลี่ยนแปลงในระหว่างการจัดเก็บและประมวลผล
1-8 ชั่วโมงหลังการเก็บ
2.2 LAB และการแยก bifidobacteria
ในการแยก LAB และ bifidobacteria, 10 กรัมของตัวอย่างไส้กรอกแต่ละ
ถูกนำขวดทดลองถ่ายโอนไปยังถุงพลาสติกปลอดเชื้อ,
10 เท่าเจือจางด้วยน้ำเปปโตน 1% (Pronadisa, Alcobendas,
มาดริด, สเปน) และหดหาย 120 s ใช้ Stomacher
ปั่นห้องปฏิบัติการ 400 (ซีเวิร์ดลอนดอนสหราชอาณาจักร) สำหรับตัวอย่างอุจจาระ,
พวกเขาผสมกับการแก้ปัญหาการจัดเก็บข้อมูล (pH 7.2) ประกอบด้วย
ของ (ต่อลิตร): 1 กรัมสารสกัดจากยีสต์ 1 กรัม KH2PO4 0.15 กรัม K2HPO4 0.15 กรัม
NH4Cl 1 กรัมโซเดียมคลอไรด์, 0.6 กรัม MgCl2x6H2O 0.1 กรัม โพแทสเซียมคลอไรด์และ 0.5 กรัม cysteine-
HCl และเก็บไว้ในตู้เย็นจนเจือจาง อนุกรม 10 เท่า
เจือจางของตัวอย่างทั้งไส้กรอกและอุจจาระที่เตรียม
น้ำเปปโตน 1% (Pronadisa) และเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เตรียม LAMVAB
ตาม Hartemink โคก, Weenk และ Rombouts (1997)
และ M17 วุ้น (Scharlab, Scharlab บาร์เซโลนา สเปน) สำหรับ LAB, Slanezt
และ Bartley (SB, Scharlab) สำหรับ enterococci และ raffinose ไบฟิโดแบคทีเรีย
วุ้น (RB) จัดทำขึ้นตาม Hartemink โคก, Weenk,
และ Rombouts (1996) สำหรับ bifidobacteria สื่อทั้งหมดถูกบ่ม
เป็นเวลา 48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ประมาณ 20% ของอาณานิคมทั่วไปจากแต่ละสื่อ
ได้รับการสุ่มเลือกจากแผ่นนับแล้ว
ลายลงบนสื่อการแยกของแต่ละ สำหรับไอบีเรีย
แห้งหมักตัวอย่างไส้กรอกแผ่นที่มีปริมาณจุลินทรีย์น้อย
กว่า 7 logCFU / กรัมของ LAB ถูกโยนทิ้ง วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ได้รับการ
ที่โดดเด่นด้วยการย้อมสีแกรม, การเปลี่ยนรูปร่างของเซลล์และ catalase
ปฏิกิริยา (Schillinger และLücke, 1987) LAB และ bifidobacteria เชื้อ
ถูกเก็บไว้ที่ 80 องศาเซลเซียสในซุปมิโสะที่เฉพาะเจาะจงของพวกเขาและกลีเซอรอล 50%
(Scharlab) ทุกสายพันธุ์ได้รับเชื้อเป็นครั้งที่สองก่อนที่จะใช้
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)
2.1 .
ตัวอย่างการสุ่มตัวอย่าง ( ประมาณ 50 กรัม ) ถูกเก็บจาก 22 แตกต่างกันผลิต
ของไอบีเรียไส้กรอกหมัก ( 10 " และ 12 'chorizos
''salchichones " ) ซื้อในซุปเปอร์มาร์เก็ตที่แตกต่างกันของแคว้นเอกซ์เตรมาดูรา .
นอกจากนี้ กลุ่มตัวอย่างจำนวน 21 คนสุขภาพดี ( 17 ผู้ใหญ่
อายุ 25 – 30 ปี 4 ทารก อายุ 6 – 12 เดือน ) และ 30 สุขภาพ
หมู ( จากห้าชุดต่าง ๆที่ได้รับกับผ้าฝ้าย swabs หมัน )
) รวมอยู่ด้วย ตัวอย่างทั้งหมดถูกเก็บในตู้เย็น ,
เพื่อให้โหลดของจุลินทรีย์ไม่ได้เปลี่ยนระหว่างการเก็บรักษาและแปรรูป
1 – 8 ชั่วโมงหลังจากคอลเลกชัน .
2.2 . ห้องปฏิบัติการและไบฟิโดแบคทีเรียแยก
แยกห้องทดลองและไบฟิโดแบคทีเรีย , 10 กรัมในแต่ละตัวอย่าง aseptically ไส้กรอก
ถูกโอนไปยังกระเป๋าพลาสติก
ปลอดเชื้อ10 พับเจือจางกับน้ำ 1 % ตามลำดับ ( pronadisa Alcobendas
, , มาดริด , สเปน ) , และบด 120 S ใช้แผงประดับหน้าอก
400 ปฏิบัติการปั่น ( ซีเวิร์ด , อังกฤษลอนดอน ) สำหรับตัวอย่างที่พวกเขาผสมกับพันธุ์
, โซลูชั่นการจัดเก็บ ( pH 7.2 ) 2
( ต่อลิตร ) 1 กรัมยีสต์สกัด kh2po4 1 กรัม k2hpo4 0.15 กรัม 4 .
0.15 กรัม , เกลือ 1 กรัม mgcl2x6h2o 0.6 กรัม ปริมาณ 0.1 กรัมและ 0.5 กรัม ซิสเทอีน (
HCl ,และเก็บไว้ภายใต้ความเย็นจนเจือจาง หมายเลข 10 เท่า
วิธีการทั้งไส้กรอก และตัวอย่างกลุ่มเตรียมกับ
1 % เปปโตนน้ำ ( pronadisa ) และเชื้อในวุ้นที่เตรียมไว้ lamvab
ตาม hartemink , กก weenk และ rombouts ( 1997 )
( scharlab m17 agar , และ scharlab , บาร์เซโลนา , สเปน ) สำหรับห้องปฏิบัติการและ slanezt
Bartley ( SB scharlab , ) และไบฟิโดแบคทีเรีย
ทางแรฟฟิโนสวุ้น ( RB ) ปรุงตาม hartemink weenk , กก , และ rombouts
( 1996 ) สำหรับ Bifidobacteria . สื่อทั้งหมดถูกบ่ม
48 H ที่ 37 C ประมาณ 20% ของอาณานิคมโดยทั่วไปจากแต่ละสื่อ
สุ่มจากแผ่นได้แล้ว
ลายบนสื่อแยกของตน สำหรับไอบีเรีย
บริการตัวอย่างไส้กรอกหมักด้วยจุลินทรีย์นับน้อย
, จานกว่า 7 logcfu / g ของ Lab ถูกละทิ้ง . วัฒนธรรมบริสุทธิ์เป็น
ลักษณะกรัม staining รูปร่างของเซลล์ และปฏิกิริยาคะตะเลส
( ชิลลีเงอร์& L ü cke , 1987 ) ห้องปฏิบัติการและไบฟิโดแบคทีเรียไอโซเลท
ที่อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียส ใน เฉพาะ broths บวก 50% กลีเซอรอล
( scharlab ) ทุกสายพันธุ์ subcultured สองครั้งก่อนที่จะใช้
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)