for 1 h at RTfollowed by an incubat

for 1 h at RT
followed by an incubation with anti-NKA (α5, 1/100) or anti-NKCC (T4,
1/4000) overnight at RT. Membranes were then washed three times
(15 min each) with TTBS (0.1% Tween-20 in TBS; pH 7.4) and incubated
in alkaline-phosphatase-conjugated goat anti-mouse IgG (1/3000
diluted in Blotto) at RT for 1h and washed in TTBS. To visualize antibody
binding, membranes were incubated in a chemiluminescent signal
(Immun-star chemiluminescent kit, Bio-Rad) following the manufacturer's
protocol. Total protein present on the membranes was visualized
by incubating membranes in 0.02% Coomassie blue stain (diluted in 50%methanol, 10% acetic acid, and 40% water) for 1min. Exposed films and
Coomassie blue stained membranes were digitally imaged using a
flatbed scanner and brightened using Adobe Photoshop CS3 (San Jose,
CA USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับ h 1 ที่ RTตาม ด้วยการบ่มกับ anti-NKA (α5, 1/100) หรือต่อต้าน-NKCC (T41/4000) เข้า RT. แล้วถูกล้าง 3 ครั้ง(15 นาทีละ) กับ TTBS (0.1% Tween-20 ใน TBS; pH 7.4) และ incubatedในแพะด่างฟอสฟาเตสกลวงป้องกันเมาส์ IgG (1/3000ยกเว้นใน Blotto) ที่ RT 1 h และหินใน TTBS เห็นภาพแอนติบอดีผูก เยื่อหุ้มถูก incubated ในสัญญาณ chemiluminescent(Immun-ดาว chemiluminescent ชุด Bio Rad) ของผู้ผลิตต่อไปนี้โพรโทคอลการ รวมโปรตีนที่อยู่ในเยื่อหุ้มมี visualizedโดย incubating สารในคราบสี Coomassie 0.02% (ยกเว้นใน 50% เมทานอล กรดอะซิติก 10% และน้ำ 40%) สำหรับฟิล์ม Exposed 1 นาที และCoomassie เยื่อหุ้มทิ้งคราบสีฟ้าถูก imaged ใช้ดิจิทัลสแกนเนอร์แฟลตเบด และสบาย ๆ โดยใช้ Adobe Photoshop CS3 (San JoseCA สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1 ชั่วโมงที่ RT
ตามด้วยการบ่มที่มีการต่อต้าน NKA (α5, 1/100) หรือต่อต้านเอ็นเคซีซี (T4,
1/4000) ค้างคืนที่ RT เยื่อเป็นล้างแล้วสามครั้ง
(15 นาทีในแต่ละ) กับ TTBS (0.1% Tween-20 ใน TBS; pH 7.4)
และบ่มในด่างphosphatase-ผันแพะ IgG ต่อต้านเมาส์ (1/3000
เจือจางในเมา) ที่ RT สำหรับ 1 ชั่วโมง และล้างใน TTBS จะเห็นภาพแอนติบอดีผูกพันเยื่อถูกบ่มในสัญญาณ chemiluminescent (ชุด chemiluminescent immun ดาว Bio-Rad) ดังต่อไปนี้ผู้ผลิตโปรโตคอล ปัจจุบันโปรตีนรวมเยื่อที่ถูกมองเห็นโดยการบ่มในเยื่อ 0.02% Coomassie คราบสีฟ้า (เจือจางในเมทานอล 50%, 10% กรดอะซิติกและน้ำ 40%) สำหรับ 1min ภาพยนตร์สัมผัสและเยื่อสี Coomassie สีฟ้าได้รับการถ่ายภาพแบบดิจิทัลโดยใช้เครื่องสแกนและสว่างโดยใช้โปรแกรมAdobe Photoshop CS3 (San Jose, CA USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 H ที่ RT
ตามด้วยการบ่มด้วย anti nka ( α 5 , 1 / 100 ) หรือต่อต้าน nkcc ( T4 ,
1 / 4000 ) ค้างคืนที่ RT . เยื่อหุ้มแล้วล้างสามครั้ง
( 15 นาทีแต่ละ ) กับ ttbs ( tween-20 0.1% ใน TBS คือ pH 7.4 ) และบ่ม
ในด่าง ฟอสฟาเตสและ IgG anti เมาส์แพะ ( 1 / 3000
เจือจางในเมามาก ) ที่ RT สำหรับ 1H และล้างใน ttbs . เห็นภาพแอนติบอดี
ผูกเยื่อแผ่นแบบบ่มใน
สัญญาณ chemiluminescent ( ภูมิต้านทานดาว chemiluminescent Kit ไบโอ ราด ) ทำตามขั้นตอนของ
ผู้ผลิต โปรตีนทั้งหมดที่มีอยู่ในเยื่อหุ้มเป็นปรากฏการณ์
โดยการแช่เยื่อใน 0.02% เหล่านี้น่าจะเป็นคราบสีฟ้า ( ละลายในเมทานอล 50% , 10% กรดและน้ำ 40% ) 1 นาที ตากและภาพยนตร์เหล่านี้น่าจะเป็นคราบเยื่อแผ่นแบบดิจิตอลสีฟ้า

อื่นๆใช้สแกนเนอร์ที่ 1 และใช้โปรแกรม Adobe Photoshop CS3 ( San Jose , CA USA
)