Western blottingProtein samples wer

Western blotting
Protein samples were extracted from the cells or tumor tissues
with lysis buffer (50 mmol/L Tris–HCl, pH 7.5, 15 mmol/L
EGTA, 100 mmol/L NaCl, 0.1 % [vol/vol] Triton X-100 and
complete protease inhibitor cocktail). Equal amounts of protein
were run on 10 % SDS-PAGE and blotted onto
polyvinylidene difluoride membranes. The blots were reacted
with primary antibodies against HIF-1a (BD Pharmingen),
PTEN (Epitomics), eNOS (BD Pharmingen), phosphorylated
(p)-eNOS (S1177), p-Akt (S473) and Akt (Cell Signaling
Technology), respectively, followed by the reaction with the
appropriate secondary antibodies and the detection with the
enhanced chemiluminescence kit as described previously [15].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Blotting วิธีตะวันตกตัวอย่างโปรตีนที่สกัดจากเซลล์หรือเนื้อเยื่อของเนื้องอกมีบัฟเฟอร์ lysis (50 mmol/L ตรี – HCl, pH 7.5, 15 mmol/LEGTA, 100 mmol/L NaCl, 0.1% [vol/vol] ไตรตั้น X-100 และเสร็จสมบูรณ์รติเอสเตอร์ค็อกเทล) จำนวนเท่าของโปรตีนถูกเรียกใช้บน 10% SDS หน้า และ blotted ไปpolyvinylidene difluoride เข้า กันบล็อทได้ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นด้วยหลักการแอนตี้กับ HIF-1a (BD Pharmingen),PTEN (Epitomics), eNOS (BD Pharmingen), phosphorylated(p) -eNOS (S1177), p-Akt (S473) และ Akt (เซลล์ตามปกติเทคโนโลยีสารสนเทศ ตามลำดับ ตาม ด้วยปฏิกิริยาด้วยการเหมาะสมรองแอนตี้และตรวจพบมีการเพิ่มชุด chemiluminescence อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [15]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เวสเทิร์ซับตัวอย่างโปรตีนสกัดจากเซลล์หรือเนื้อเยื่อของเนื้องอกที่มีบัฟเฟอร์สลาย(50 มิลลิโมล / ลิตร Tris-HCl, pH 7.5, 15 มิลลิโมล / ลิตรEGTA 100 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์, 0.1% [ปริมาตร / ปริมาตร] Triton X-100 และโปรติเอสที่สมบูรณ์แบบค๊อกเทลยับยั้ง) ปริมาณที่เท่ากันของโปรตีนที่ถูกเรียกใช้เมื่อวันที่ 10% SDS-PAGE และเปื้อนบน Polyvinylidene difluoride เยื่อ blots ถูกปฏิกิริยากับแอนติบอดีหลักกับHIF-1a (BD PharMingen) PTEN (Epitomics) eNOS (BD PharMingen) phosphorylated (P) -eNOS (S1177), p-สิ้นคิด (S473) และสิ้นคิด(สัญญาณมือถือเทคโนโลยี) ตามลำดับตามด้วยการทำปฏิกิริยากับที่แอนติบอดีรองที่เหมาะสมและการตรวจสอบที่มีชุดchemiluminescence ที่เพิ่มขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [15]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Western blotting
โปรตีนตัวอย่างสกัดจากเซลล์เนื้องอกหรือเนื้อเยื่อ
กับการสลายบัฟเฟอร์ ( 50 มิลลิโมล / ลิตรโดย– HCl , pH 7.5 และ 15 mmol / L
หน่วย 100 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ 0.1 % [ Vol / Vol ] Triton X-100 และ
สมบูรณ์โปรตีเ นฮิบิเตอร์ค็อกเทล ) จํานวนเงินที่เท่ากันของโปรตีน
เป็น 10% และวิ่งบน SDS-PAGE เปื้อนบน
ีนไดฟลูออไรด์เยื่อ เป็นปฏิกิริยา
blotsกับแอนติบอดีประถมกับ hif-1a ( BD pharmingen )
pten ( epitomics ) นะ ( BD pharmingen ) , ฟอสฟอรีเลเตต
( P ) - นอส ( s1177 ) p-akt ( s473 ) และ akt ( สัญญาณมือถือ
เทคโนโลยี ) ตามลำดับ ตามด้วยปฏิกิริยาที่เหมาะสมกับระดับแอนติบอดีตรวจหา

ด้วย ปรับปรุงนโยบายแรงงานชุดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 15 ]