Genomic DNA for use in PCR was extr

Genomic DNA for use in PCR was extracted from freeze-dried
and ground fungal material using Fastprep FP120 with 350 ll of
TEN buffer (500 mM NaCl, 400 mM Tris–HCl, 50 mM EDTA, pH
8.0), 1% beta-mercaptoethanol, 5 mM 1,10 phenanthroline and
2% (w/v) polyvinylpyrrolidone K30. The resulting suspension
was then mixed thoroughly with 350 ll of 2% (w/v) SDS and
incubated for 30 min at 65 C. Following the addition of 300 ll
of ice-cold ammonium acetate (7.5 M) the sample was kept on
ice for 20 min and then centrifuged at 13,000 rpm for 10 min.
An equal volume of cold isopropanol (20 C) was added to
the supernatant and centrifuged for 5 min. The DNA pellet was
washed in ice-cold 70% v/v ethanol and dissolved in sterile
distilled water. All DNA samples were quantified using a Thermo
Scientific NanoDropTM 1000 Spectrophotometer and diluted to
10 ng/ll for use in PCR. All PCR products were sequenced
(MWG Eurofins Operon, Germany) using the corresponding Forward and/or Reverse primers (Table 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ออกดีเอ็นเอสำหรับใช้ใน PCR ถูกแยกจากชนิดแห้งและพื้นวัสดุเชื้อราด้วย Fastprep FP120 350 ll ของสิบบัฟเฟอร์ (500 มม. NaCl, pH ทริสเรทติ้ง – HCl, EDTA 50 มม. 400 มม.8.0), เบต้า 1%-mercaptoethanol, phenanthroline 5 มม. 1, 10 และ2% (w/v) polyvinylpyrrolidone K30 ระบบกันสะเทือนได้ถูกผสมอย่างกับ 350 แล้ว ll 2% (w/v) SDS และนาทีที่ 65 c ได้รับการกก ต่อการเพิ่ม 300 llของแอมโมเนียฉ่ำ acetate (7.5 เมตร) ตัวอย่างถูกเก็บไว้บนน้ำแข็ง 20 นาทีแล้ว จากที่ 13,000 rpm 10 นาทีถูกเย็น isopropanol (20 C) ปริมาณเท่ากับการ supernatant และเหวี่ยง 5 นาที เป็นเม็ดดีเอ็นเอล้างในฉ่ำ 70% v/v เอทานอล และละลายในการฆ่าเชื้อน้ำกลั่น ตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดถูกวัดโดยใช้ความร้อนวิทยาศาสตร์ NanoDropTM 1000 สเปค และเจือจางไป10 ฉบับ/ll สำหรับใช้ใน PCR ผลิตภัณฑ์ PCR ทั้งหมดถูกเรียงลำดับ(MWG Eurofins Operon เยอรมัน) ใช้สอดคล้องกันไปข้างหน้า หรือย้อนกลับไพรเมอร์ (ตาราง 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอเพื่อใช้ใน PCR ถูกสกัดจากแห้ง
และพื้นดินวัสดุเชื้อราใช้ Fastprep FP120 350 LL ของ
TEN บัฟเฟอร์ (500 มิลลิ NaCl 400 mM Tris-HCl 50 มิลลิ EDTA, ค่า pH
8.0), 1% เบต้า mercaptoethanol, 5 มิลลิ 1,10 Phenanthroline และ
2% (w / v) K30 polyvinylpyrrolidone ระงับการส่งผลให้
ได้รับการผสมแล้วให้สะอาดด้วย 350 LL 2% (w / v) SDS และ
บ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 65 องศาเซลเซียส ต่อไปนี้การเพิ่มขึ้นของ 300 ของ LL
ของเย็นแอมโมเนียมอะซิเตท (7.5 M) ตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้ใน
น้ำแข็งเป็นเวลา 20 นาทีแล้วหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาที.
ปริมาตรที่เท่ากันของ isopropanol เย็น (? 20? C) ได้ถูกเพิ่มเข้าไป
ใสและปั่นเป็นเวลา 5 นาที เม็ด DNA ถูก
ล้างในเย็น 70% v / V เอทานอลและละลายในการฆ่าเชื้อ
น้ำกลั่น ทั้งหมดตัวอย่างดีเอ็นเอถูกวัดโดยใช้เทอร์โม
วิทยาศาสตร์ NanoDropTM 1000 Spectrophotometer และลดลงเหลือ
10 ng / LL สำหรับใช้ใน PCR ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดที่มีลำดับขั้นตอนวิธี PCR
(MWG Eurofins Operon เยอรมนี) โดยใช้ที่สอดคล้องกันไปข้างหน้าและ / หรือย้อนกลับไพรเมอร์ (ตารางที่ 2)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอเพื่อใช้ในปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสที่สกัดจาก อบแห้งและพื้นดินของวัสดุที่ใช้ fastprep fp120 กับ 350 จะของสิบบัฟเฟอร์ ( 500 mM NaCl , 400 มม. นอกจากนี้ – HCL 50 mM EDTA pH8.0 ) 1 % เบต้า mercaptoethanol , 5 มม. เป็นฟีแนนโทรลีน และ2 % ( w / v ) พอลิวินิลไพร์โรลิโดน K30 . เป็นผลสะเทือนก็ละเอียดผสมกับ 350 จะ 2 % ( w / v ) SDS และบ่ม 30 นาทีที่ 65 C . ต่อไปนี้จะเพิ่ม 300เย็น แอมโมเนียมอะซิเตท ( 7.5 m ) ตัวอย่างที่ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งสำหรับ 20 นาทีแล้วที่ 13 , 000 รอบต่อนาที ระดับ 10 นาทีปริมาณเท่ากันของไอโซโพรพานอลเย็น ( 20 C ) คือเพิ่มโดยนำไฟฟ้า 5 นาที เม็ด ดีเอ็นเอคือล้างในเย็น 70 % v / v และละลายในเอทานอล เป็นหมันน้ำกลั่น ตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดถูกวัดโดยใช้เทอร์โมวิทยาศาสตร์ nanodroptm 1000 Spectrophotometer และเจือจางไป10 ng / จะใช้ PCR สินค้าทั้งหมดของยีนดีเอ็นเอ( mwg eurofins โอเปอรอน เยอรมนี ) โดยใช้ไพรเมอร์ที่ไปข้างหน้าและ / หรือย้อนกลับ ( ตารางที่ 2 )