2. Materials and methods2.1. DNA sa

2. Materials and methods
2.1. DNA samples
GenomicDNAsamples were obtained from 801 individuals
belonging to nine native goat breeds: Inner Mongolia White
Cashmere (IMWC, 452), Xinong saneng dairy (Sa, 74) and
Guanzhong dairy (GZ, 62), Laoshan dairy (LS, 80), Leizhou
(LZ, 34), Guizhou Black (GB, 21) and Guizhou White (GW,
31), Banjiao (BJ, 25), Matou (MT, 22), reared in the province
of Inner Mongolia, Shaanxi, Shandong, Guangdong, Guizhou,
Sichuan, and Hubei (China), respectively. The 11,026 records
of production traits (milk yield, litter size, weight traits, hair
length, hair thickness and hair yields) in 216 dairy goats (Sa,GZ
and LS) and 452 Inner Mongolia White Cashmere goats were
collected for statistical analysis. DNA samples were extracted
from leucocytes according to Mullenbach et al. (1989).
2.2. PCR conditions
Based upon the sheep and bovine POU1F1 gene sequences,
the following primers (P1, P2 and P3) were designed to
amplify the goat POU1F1 gene. P1 (F: 5-AGGATACACC-
9CAGACAAATG-3 and R: 5-TACTGATTGTTGTTCTCCGT-
3) was used to amplify 1000 bp PCR product for exon 4,
intron 4 and exon 5; P2 (F: 5-CCTCTGTCCATGGGATTTTC-
3 and R: 5-CCATCATCTCCCTTCTT-3)was used to amplify
355 bp PCR product for intron 5; P3 (F: 5-CCATCATCTCCCTTCTT-
3 and 5-AATGTACAATGTCCTTCTGAG-3) was
used to amplify 450 bp PCR product for exon 6 and its flanking
region. The 25 L volume contained: 50 ng genomic DNA,
0.5Mof each primer, 1×Buffer [including 1.5mMMgCl2],
200M dNTPs and 0.625 units of Taq DNA polymerase
(MBI). The cycling protocol was 4 min at 95 ◦C, 35 cycles
of 94 ◦C for 45 s, X ◦C annealing for 45 s, 72 ◦C for 1 min, with
a final extension at 72 ◦C for 10 min (X ◦C were 63, 63 and
54.5 ◦C for P1, P2 and P3 primers, respectively).
2.3. Single stranded conformation polymorphism (SSCP)
and DNA sequencing
Aliquots of 5 L PCR products were mixed with 5 L
denaturing solution (95% formamide, 25mM EDTA, 0.025%
xylene–cyanole and 0.025% bromophenol blue), heated for
10 min at 98 ◦C and chilled on ice (Sun et al., 2002). Denatured
DNA was subjected to PAGE (80mm×73mm×0.75 mm) in
1×TBE buffer and constant voltage (200 V) for 2.5–3.0 h. The

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. ตัวอย่างดีเอ็นเอGenomicDNAsamples ได้รับมาจากบุคคลที่ 801ของสายพันธุ์แพะพื้นเมือง 9: ขาวมองโกเลียแคสเมียร์ (IMWC, 452), Xinong saneng นม (Sa, 74) และนม Guanzhong (หน้า 62), นมเหล่าซาน (LS, 80), Leizhou(LZ, 34), ดำกุ้ยโจว (GB, 21) และกุ้ยโจวขาว (GW31), บาน (BJ, 25), Matou (MT, 22), ผลิตภัณฑ์ในจังหวัดของมองโกเลีย มณฑลส่านซี มณฑลซานตง กวางตุ้ง กุ้ยโจวเสฉวน และหูเป่ย (จีน), ตามลำดับ ข้อมูล 11,026ของลักษณะการผลิต (นม ขนาดแคร่ ลักษณะน้ำหนัก ผมความยาว ความหนาของผม และผมอัตราผลตอบแทน) ใน 216 นมแพะ (Sa หน้าและ LS) และแพะมองโกเลียขาวแคสเมียร์ 452รวบรวมการวิเคราะห์ทางสถิติ มีสกัดดีเอ็นเอตัวอย่างจากการศึกษาลักษณะชนิดตาม Mullenbach et al. (1989)2.2. PCR เงื่อนไขขึ้นอยู่กับแกะและวัว POU1F1 ยีนลำดับไพรเมอร์ดังต่อไปนี้ (P1, p 2 และ P3) ถูกออกแบบมาเพื่อขยายยีนแพะ POU1F1 P1 (F: 5 - AGGATACACC-9CAGACAAATG-3 และ R: 5 - TACTGATTGTTGTTCTCCGT-3) ใช้ในการขยายผลิตภัณฑ์ PCR bp 1000 ใน exon 4intron 4 และ exon 5 P 2 (F: 5 - CCTCTGTCCATGGGATTTTC-3 และ R: 5 - CCATCATCTCCCTTCTT-3) ใช้ขยายผลิตภัณฑ์ PCR bp 355 ใน intron 5 P3 (F: 5 - CCATCATCTCCCTTCTT-มี 3 และ 5 - AATGTACAATGTCCTTCTGAG-3)ใช้ขยายผลิตภัณฑ์ PCR bp 450 ใน exon 6 และของ flankingภูมิภาค ปริมาตร 25 L ที่อยู่: 50 ng genomic DNA0.5 กระทรวงการคลังแต่ละสีรองพื้น 1 การบัฟเฟอร์ [รวม 1.5mMMgCl2],DNTPs 200 M และหน่วย 0.625 ของ Taq DNA พอลิเมอเรส(MBI) โพรโทคอลขี่ได้ 4 นาทีที่ 95 ◦C รอบ 35ของ ◦C 94 สำหรับ 45 s, X ◦C การอบเหนียวสำหรับ 45 s, ◦C 72 ใน 1 นาที มีต่อสุดท้ายที่ ◦C 72 สำหรับ 10 นาที (X ◦C ได้ 63, 63 และ54.5 ◦C สำหรับไพรเมอร์ P1, p 2 และ P3 ตามลำดับ)2.3. เดียวควั่น conformation โพลีมอร์ฟิซึม (SSCP)และจัดลำดับของดีเอ็นเอรวมกับ 5 L aliquots ผลิตภัณฑ์ PCR 5 Ldenaturing โซลูชัน (95% formamide, 25 มม. EDTA, 0.025%ไซ – cyanole และ 0.025% bromophenol blue), ความร้อนสำหรับ10 นาทีที่ 98 ◦C และเย็นในน้ำแข็ง (ซันและ al., 2002) Denaturedดีเอ็นเอถูกยัดเยียดให้หน้า (80 มม. × 73 มม.× 0.75 มิลลิเมตร) ใน1 × TBE บัฟเฟอร์และค่าคงแรงดันไฟฟ้า (200 V) สำหรับ h. 2.5 – 3.0

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่างดีเอ็นเอที่ได้จาก genomicdnasamples

801 บุคคลของเก้าสายพันธุ์แพะพื้นเมือง : มองโกเลียผ้าขนสัตว์ชนิดหนึ่งสีขาว
( imwc 452 ) xinong เสนงนม ( SA , 74 ) และ
guanzhong นม ( GZ , 62 ) ; นม ( LS , 80 ) , ไลโจว
( Lz 34 ) , กุ้ยโจวสีดำ ( GB , 21 ) และกุ้ยโจว ขาว ( GW ,
31 ) banjiao ( BJ , 25 ) , มาโต้ ( MT , 22 ) ที่เลี้ยงในจังหวัด
ของภายในมองโกเลีย มณฑลส่านซี , Shandong , กวางตุ้ง , เสฉวนและกุ้ยโจว
, มณฑลหูเป่ย์ ( จีน ) , ตามลำดับ การ 11026 ประวัติ
ลักษณะการผลิต ( ผลผลิตน้ำนม แคร่ ขนาด น้ำหนัก ลักษณะผมยาวผมหนาและผม
, ผลผลิต ) ในนมแพะ ( SA , 216 และ GZ
LS ) และก็สีขาวด้านในเป็นผ้าขนสัตว์ชนิดหนึ่งมองโกเลียแพะ
รวบรวมเพื่อการวิเคราะห์ทางสถิติ ตัวอย่างดีเอ็นเอที่สกัด
จาก leucocytes ตาม mullenbach et al . ( 1989 ) .
2.2 . เงื่อนไข PCR
ตามแกะและวัว pou1f1 ยีนดับ
ไพรเมอร์ต่อไปนี้ ( P1 , P2 และ P3
) ถูกออกแบบมาเพื่อขยายแพะ pou1f1 ยีน P1 f : 5  - aggatacacc -
9cagacaaatg-3  และ R : 5  - tactgattgttgttctccgt -
3  ) ถูกใช้เพื่อขยาย 1 , 000 BP PCR สำหรับผลิตภัณฑ์ exon 4
4 exon 5 iNtRON และ ; P2 f : 5  - -
cctctgtccatgggattttc3  และ R : 5  - ccatcatctcccttctt-3  ) ถูกใช้เพื่อขยาย
355 BP ผลิตภัณฑ์ PCR iNtRON 5 ; P3 f : 5  - ccatcatctcccttctt -
3  และ 5  - aatgtacaatgtccttctgag-3  ) คือ
ใช้ขยาย 450 คู่เบสดีเอ็นเอผลิตภัณฑ์สำหรับ exon 6 และ flanking
) 25  L ปริมาณบรรจุ : 50 ของ genomic DNA 0.5 , 1
 แต่ละ ไพรเมอร์ 1 ×บัฟเฟอร์ [ รวมทั้ง 1.5mmmgcl2 ] ,
200 เมตรและ  dntps 0.625 หน่วยแท็ค DNA polymerase
( 2 )จักรยานโพรโทคอลคือ 4 นาทีที่ 95 ◦ C 35 รอบ
94 ◦ C 45 S , X ◦ C อบประมาณ 45 , 72 ◦องศาเซลเซียสนาน 1 นาที กับ
นามสกุลสุดท้ายที่ 72 ◦ C เป็นเวลา 10 นาที ( X ◦ C จำนวน 63 , 63 และ 54.5 ◦ C P1
, P2 และ P3 ชนิดตามลำดับ )
2.3 เดี่ยวติด conformation polymorphism ( ยีนและดีเอ็นเอเฉยๆ )
5 l )
 ผลิตภัณฑ์การผสม 5  L
ี่โซลูชั่น ( 95% Formamide ,25mm EDTA , 0.025 %
ไซลีน– cyanole โบรโมฟีน 0.025% และสีฟ้า ) , ให้ความร้อน
10 นาทีที่ 98 ◦ C และเย็นบนน้ำแข็ง ( Sun et al . , 2002 ) ใช้
ดีเอ็นเอภายใต้หน้า ( 80mm × 73mm × 0.75 มิลลิเมตร )
1 ×ทีบีบัฟเฟอร์ และแรงดันคงที่ ( 200 V ) 2.5 และ 3.0 ชั่วโมง