and B. dendrobatidis.B. salamandriv

and B. dendrobatidis.
B. salamandrivorans Strain Isolation and Culture Conditions. Chytrid isolation
on tryptone-gelatin hydrolysate-lactose (TGhL) agar plates containing penicillin/streptomycin
(200 mg/L) at 20 °C was attempted from the dead S.
salamandra as described previously for the isolation of B. dendrobatidis (7).
Skin samples without contaminating bacterial or fungal growth were
transferred to TGhL broth once zoospores were seen on the agar plates. The
isolate was subsequently subcultured in TGhL broth in cell culture flasks at
15–20 °C. A 10-d-old subculture was frozen in liquid nitrogen (20). To obtain
zoospores, 1 mL of a culture growing in TGhL broth was transferred to a TGhL
agar plate and incubated for 5–10 d at 15 °C. Zoospores were obtained by
washing the agar plate with 2 mL of 0.2-μm filtered pond water. The number
of zoospores in the suspension was determined using a hemocytometer.
To determine thermal growth conditions, 200 μL of a 5-d-old
B. salamandrivorans culture in TGhL broth at 15 °C was transferred to the wells
of a 24-well plate, and 0.8 mL of TGhL broth was added. The plates were incubated
at 5 °C, 10 °C, 15 °C, 20 °C, 22 °C, 23 °C, 24 °C, 25 °C, and/or 30 °C ± 1 °C
for 10 d. Growth was defined as a significant increase of the surface of the
well covered by the fungus compared with wells incubated at 30 °C (which is
above the lethal temperature for B. salamandrivorans) and the presence of
motile zoospores. The surface coverage was determined by image analysis
(GNU Image Manipulation Program) of pictures, taken through an inverted
light microscope (Nikon Eclipse ts100, 20× magnification). Each condition was
tested in triplicate. If no growth was seen after 10 d of incubation, the plates
were further incubated at 15 °C. Cultures were considered dead if no growth
occurred within 10 d

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ dendrobatidis .
b salamandrivorans สายพันธุ์แยกและสภาพวัฒนธรรม
แยกไคทริดในทริพโทนเจลาติน hydrolysate แล็กโตส ( tghl ) วุ้นแผ่นผสมเพนนิซิลลิน / เหมือนเคย
( 200 mg / L ) ที่อุณหภูมิ 20 ° C จึงจากความตาย S .
salamandra ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้สำหรับการแยกของ dendrobatidis ( 7 ) .
ผิวตัวอย่างปนเปื้อนเชื้อแบคทีเรียหรือเชื้อรา โดยเติบโต
ย้ายไป tghl ซุปเมื่อ zoospores ได้เห็นบนวุ้นแผ่น
แยกต่อมาใน tghl subcultured น้ำในขวดเพาะเลี้ยงเซลล์ที่
15 – 20 ° C 10-d-old วัฒนธรรมย่อยที่ถูกแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว ( 20 ) ขอรับ
zoospores 1 มิลลิลิตร การวัฒนธรรมในน้ำซุป tghl ถูกส่งไป tghl
agar plate โดย 5 – 10 D ที่ 15 องศา ได้ด้วย
zoosporesล้างวุ้นแผ่นกับ 2 มล. 0.2 - μ M กรองบ่อบำบัดน้ำเสีย หมายเลข
ของ zoospores ในจังหวะถูกกำหนดโดยใช้ hemocytometer .
เพื่อตรวจสอบเงื่อนไขการขยายตัวความร้อน 200 μ L ของวัฒนธรรม 5-d-old
B salamandrivorans น้ำ tghl 15 ° C ถูกย้ายไปยังบ่อ
ของ 24 ดีจาน และ 0.8 มิลลิลิตรของน้ำซุป tghl ถูกเพิ่มเข้ามา จานถูกบ่ม
5 ° C 10 ° C , 15 ° C 20 ° C22 ° C , 23 ° C 24 ° C 25 ° C , และ / หรือ 30 ° C ± 1 ° C
10 . การกำหนดเป็นระดับของพื้นผิวของ
ก็ปกคลุมด้วยเห็ดรา เปรียบเทียบกับบ่อบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศา C ( ซึ่ง
เหนืออุณหภูมิร้ายแรง สำหรับบี salamandrivorans ) และการปรากฏตัวของ
มือถือ zoospores . พื้นผิวที่ครอบคลุมถูกกำหนดโดย
การวิเคราะห์ภาพ ( โปรแกรมจัดการรูปภาพของ GNU ) รูปภาพถ่ายผ่านกล้องจุลทรรศน์แบบแสง ( Nikon
ts100 คราส 20 ×ขยาย ) แต่ละภาพคือ
ทดสอบทั้งสามใบ ถ้าไม่มีการเห็นหลังจาก 10 D ของการบ่ม จาน
ได้อุณหภูมิ 15 องศา ถือว่าเป็นวัฒนธรรมตายถ้าไม่เจริญเติบโต
เกิดขึ้นภายใน 10 D