In order to clone PCR products and

In order to clone PCR products and express them effectively in Escherichia coli, a directional
cloning system was constructed by generating a T vector based on pQE-30Xa. The vector
was prepared by inserting an XcmI cassette containing an endonuclease XcmI site, a kanamycin
selective marker, a multiple-cloning-site (MCS) region and an opposite endonuclease
XcmI site into the vector pQE-30Xa. The T vector pQE-T with single overhanging dT residues
at both 3′ ends was obtained by digesting with the restriction enzyme XcmI. For
directional cloning, a BamHI site was introduced to the ends of the PCR products. A BamHI
site was also located on the multiple cloning site of pQE-T. The PCR products were ligated
with pQE-T. The directionally inserted recombinants were distinguished by using BamHI
to digest the recombinants because there are two BamHI sites located on the both sides
of PCR fragment. In order to identify the T-vector functions, the 14-3-3-ZsGreen and hRBP
genes were amplified and a BamHI site was added to the ends of the genes to confirm this
vector by ligation with pQE-T. Results showed that the 14-3-3-ZsGreen and hRBP were cloned
to the vector pQE-T directly and corresponding proteins were successfully produced. It was
here demonstrated that this directional vector is capable of gene cloning and is used to
manipulate gene expression very easily. The methodology proposed here involves easy incorporation
of the construct into other vectors in various hosts

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อที่จะโคลนผลิตภัณฑ์พีซีอาร์และแสดงให้พวกเขาได้อย่างมีประสิทธิภาพในเชื้อ Escherichia coli, ทิศทาง
ระบบโคลนถูกสร้างขึ้นโดยการสร้างเวกเตอร์ T ขึ้นอยู่กับ PQE-30Xa เวกเตอร์
ได้รับการจัดทำขึ้นโดยการใส่เทปคาสเซ็ทที่มี XcmI เว็บไซต์ endonuclease XcmI, KANAMYCIN
เครื่องหมายเลือกหลายโคลนเว็บไซต์ (MCS) ภูมิภาคและ endonuclease ตรงข้าม
เว็บไซต์ XcmI เป็นเวกเตอร์ PQE-30Xa เวกเตอร์ T PQE-T ที่มีสารตกค้าง dT ยื่นเดียว
ทั้ง 3 'ปลายที่ได้รับจากการย่อยด้วยเอนไซม์ จำกัด XcmI สำหรับ
การโคลนทิศทาง, เว็บไซต์ BamHI ได้รับการแนะนำให้รู้จักกับปลายของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ BamHI
เว็บไซต์ก็ยังตั้งอยู่บนเว็บไซต์โคลนหลาย PQE-T ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ถูก ligated
กับ PQE-T โคแทรกทิศทางโดดเด่นด้วยการใช้ BamHI
ย่อยโคเพราะมีสองเว็บไซต์ BamHI ตั้งอยู่บนทั้งสองด้าน
ของส่วน PCR เพื่อที่จะระบุการทำงานของ T-เวกเตอร์, 14-3-3-ZsGreen และ HRBP
ยีนถูกขยายและเว็บไซต์ BamHI ถูกบันทึกอยู่ในปลายของยีนนี้เพื่อยืนยันความ
เวกเตอร์โดยผูกกับ PQE-T ผลการศึกษาพบว่า 14-3-3-ZsGreen และ HRBP ถูกโคลน
เพื่อเวกเตอร์ PQE-T โดยตรงและโปรตีนที่เกี่ยวข้องเป็นจำนวนมากที่ประสบความสำเร็จ มันเป็น
ที่นี่แสดงให้เห็นว่าเวกเตอร์ทิศทางนี้มีความสามารถในการโคลนยีนและใช้ในการ
จัดการกับการแสดงออกของยีนได้อย่างง่ายดายมาก วิธีการที่นำเสนอเกี่ยวกับการรวมตัวกันที่นี่ง่าย
ของการสร้างเป็นพาหะอื่น ๆ ในโฮสต์ต่างๆ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อให้ผลิตภัณฑ์ PCR โคลนและแสดงพวกเขาได้อย่างมีประสิทธิภาพใน Escherichia coli , ทิศทาง
โคลนระบบถูกสร้างขึ้นโดยการสร้าง T เวกเตอร์ตาม pqe-30xa . เวกเตอร์ฟรีเกี่ยวกับ
เตรียมโดยการใส่ xcmi เทปที่มีเอนโดนิวคลีเอส xcmi เว็บไซต์ , kanamycin
เลือกเครื่องหมาย , โคลนหลายเว็บไซต์ ( MCS ) ภูมิภาค และตรงข้าม xcmi เอนโดนิวคลีเอส
เว็บไซต์ในเวกเตอร์ pqe-30xa .T เวกเตอร์ pqe-t ด้วยเดียวยื่น DT ตกค้าง
ทั้ง 3 นั้นจบลงได้โดยการย่อยด้วยเอนไซม์ xcmi . สำหรับทิศทาง
โคลน , BamHI เว็บไซต์แนะนำปลายของผลิตภัณฑ์ PCR เป็นเว็บไซต์คือ BamHI
ตั้งอยู่บนหลายเว็บไซต์ในการ pqe-t. ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกผูกกับ pqe-t.
การ directionally แทรก recombinants มีความโดดเด่นด้วย BamHI
เพื่อย่อย recombinants เพราะมีสอง BamHI สถานที่ตั้งอยู่บนทั้งสองด้านของเชื้อ ~
. เพื่อระบุ t-vector ฟังก์ชัน 14-3-3-zsgreen hrbp
และขยายยีนและเว็บไซต์คือ BamHI เพิ่มปลายของยีนเพื่อยืนยันกับ pqe-t. Ligation เวกเตอร์นี้
โดยผลการศึกษาพบว่า 14-3-3-zsgreen และ hrbp ถูกโคลน
กับเวกเตอร์ pqe-t โดยตรง และที่เป็นสามารถผลิตโปรตีน . มันคือ
ที่นี่แสดงให้เห็นว่าทิศทางเวกเตอร์นี้มีความสามารถในการโคลนยีนและการแสดงออกของยีนที่ใช้

จัดการได้อย่างง่ายดายมาก วิธีการที่เสนอนี้เกี่ยวข้องกับการสร้างที่ง่ายของ
ในเวกเตอร์อื่น ๆ ในครอบครัว ต่าง ๆ