Total RNA was extracted using the T

Total RNA was extracted using the Trizol® method according to
the instructions of Invitrogen Life Technologies. Seven hundred and
fifty microliters of a crude extract obtained from infected shrimp
(sample 1) or purified IMNV (sample 2) were placed in micro-tubes
containing 500 L of Trizol and left at room temperature for 10 min.
Two hundred microliters of chloroform were then added to each
tube and shaken vigorously for 15 s. The mixture was again left
at room temperature for 5 min and then centrifuged at 12,000
×g
at 4 ◦C for 15 min. RNA precipitation was performed by transferring
450 L of supernatant to a microtube containing 500 L of
isopropyl alcohol. The mixture was incubated at room temperature
for 15 min and centrifuged at 12,000
×
g at 4 ◦C for 15 min. The
precipitate was suspended in 1 mL of 75% ethanol, shaken gently
in a vortex and centrifuged at 6600 × g at 4 ◦C for 5 min. The supernatant
was discarded and the tubes were gently inverted and placed
on filter paper to dry. The precipitate was then dissolved in 50 L of
DEPC-treated water and stored at
−20 ◦C for later use. The extracted
RNA was quantified by spectrophotometry using wavelengths of
260 nm and 280 nm. The integrity of the RNA was assessed by electrophoresis
in 2% agarose using TAE as the running buffer. The gel
was then stained with ethidium bromide and bands were observed
through translumination of ultraviolet light.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

รวม RNA
ถูกสกัดโดยใช้วิธีTrizol®ตามคำแนะนำของInvitrogen ชีวิตเทคโนโลยี เจ็ดร้อยห้าสิบ microliters ของสารสกัดที่ได้จากการเลี้ยงกุ้งที่ติดเชื้อ (ตัวอย่าง 1) หรือบริสุทธิ์ IMNV (ตัวอย่าง 2) ถูกวางไว้ในหลอดขนาดเล็กที่มี500 ลิตร Trizol และทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที. สองร้อย microliters คลอโรฟอร์ม ถูกเพิ่มแล้วแต่ละหลอดและเขย่าแรงๆ เป็นเวลา 15 วินาที ส่วนผสมที่ถูกซ้ายอีกครั้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีและปั่นแล้วที่ 12,000 ×กรัม4 ◦Cเป็นเวลา 15 นาที เร่งรัดอาร์เอ็นเอที่ได้ดำเนินการโดยการโอน450 ลิตรใสไป Microtube มี 500 ลิตรแอลกอฮอล์isopropyl ส่วนผสมที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาทีและหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 ×กรัม 4 ◦Cเป็นเวลา 15 นาที ตะกอนถูกระงับใน 1 มิลลิลิตรของเอทานอล 75%, เขย่าเบา ๆในน้ำวนและหมุนเหวี่ยงที่ 6600 ×กรัม 4 ◦Cเป็นเวลา 5 นาที สารละลายทิ้งและท่อถูกคว่ำเบา ๆ และวางไว้บนกระดาษกรองแห้ง ตะกอนก็เลือนหายไปแล้วใน 50 ลิตรน้ำDEPC รับการรักษาและเก็บไว้ที่-20 ◦Cเพื่อใช้ในภายหลัง ที่สกัดRNA ถูกวัดโดย spectrophotometry ใช้ความยาวคลื่นของ260 นาโนเมตรและ 280 นาโนเมตร ความสมบูรณ์ของอาร์เอ็นเอที่ได้รับการประเมินโดย electrophoresis ใน agarose 2% โดยใช้ TAE เป็นบัฟเฟอร์ทำงาน เจลถูกย้อมด้วย ethidium bromide และวงดนตรีที่ถูกตั้งข้อสังเกตผ่านtranslumination ของแสงอัลตราไวโอเลต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดโดยใช้ trizol ®วิธีตาม
คําแนะนําของเทคโนโลยีกับชีวิต Invitrogen . เจ็ดร้อย
50 ตัวเลขของสารสกัดหยาบที่ได้จากไวรัสกุ้ง
( ตัวอย่างที่ 1 ) หรือ imnv บริสุทธิ์ ( ตัวอย่าง 2 ) อยู่ในหลอดบรรจุ 500  ไมโคร
l trizol และทิ้งในอุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10 นาที
สองร้อยตัวเลขของคลอโรฟอร์ม แล้วเพิ่มแต่ละ
หลอดและเขย่าอย่างจริงจังเป็นเวลา 15 วินาที เหลือส่วนผสมอีก
ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีและระดับที่ 12

ที่ 4 ◦× G C เป็นเวลา 15 นาที ซึ่งการกระทำโดยการโอน 
450 ลิตรสูงไป microtube ที่มี 500  l
ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์ ส่วนผสมคือ บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที


ที่ 12 ระดับที่ 4 ◦× G
c นาน 15 นาทีที่ถูกระงับใน 1 มิลลิลิตรเอทานอล 75% , เขย่าเบา ๆ
ในน้ำวนไฟฟ้าที่ 6600 × g 4 ◦องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที และน่าน
ถูกทิ้งและท่อ คือค่อย ๆคว่ำและวางไว้
บนกระดาษกรองแห้ง ที่ถูกละลายใน 50  l
depc น้ำและเก็บไว้ที่
− 20 ◦ C เพื่อใช้ในภายหลัง สกัด
มีปริมาณ RNA โดยวิธีการใช้ความยาวคลื่น
260 nm และ 280 nm . ความสมบูรณ์ของ RNA ถูกประเมินโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีส
ใน ( 2% ใช้แทเป็นวิ่งบัฟเฟอร์ เจล
แล้วย้อมด้วยโบรไมด์คู่และวงดนตรีจาก translumination
ผ่านแสงอัลตราไวโอเลต