25 lL of 4-methylumbelliferylglucur

25 lL of 4-methylumbelliferyl
glucuronide/4-methylumbelliferyl sulfate/13C4-4-methylumbelliferone
standard mixture (4 lgmL1) was also added to
determine the extent of deconjugation.

After mixing, the sample
was incubated at 37 C for 24 h.

Next, analytes were extracted from
the samples by adding 15 mL of ethyl acetate/formic acid (99:1, v/
v) and shaking for 30 min.

The mixture was centrifuged for 10 min
at 4050g.

Subsequently, the extracts were evaporated to dryness at
room temperature under a nitrogen stream.

The residue was dissolved
with 400 lL of a mixture of Milli-Q water/MeOH (50:50,
v/v) and placed in a 1.5 mL Eppendorf tube.

500 lL of hexane
was added and the mixture was centrifuged for 15 min at
24960g.


Finally, the underlying aqueous phase was separated and
10 lL injected into the ultra high performance liquid chromatograph
(UHPLC) system.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

25 lL 4 Methylumbelliferyl
glucuronide / 4 Methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13C4-4-methylumbelliferone
ส่วนผสมมาตรฐาน (4 lgmL? 1) ถูกเพิ่มเข้ามานอกจากนี้ยัง
กำหนดขอบเขตของ deconjugation. หลังจากผสมตัวอย่างถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง . ถัดไปวิเคราะห์ถูกสกัดจากกลุ่มตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มลเอทิลอะซิเต / กรด (99: 1, v / v.) และเขย่าเป็นเวลา 30 นาทีส่วนผสมที่ถูกปั่นเป็นเวลา 10 นาทีที่ 4050g. ต่อจากนั้นสารสกัดระเหย จนแห้งที่อุณหภูมิห้องภายใต้กระแสไนโตรเจน. ที่เหลือก็เลือนหายไปกับ 400 lL ของส่วนผสมของน้ำพัน-Q / เมธานอล (50:50, v / v) และวางไว้ในหลอด 1.5 มิลลิลิตร Eppendorf. 500 lL ของเฮกเซนเป็น และเพิ่มส่วนผสมที่ถูกปั่น 15 นาทีที่24960g. สุดท้ายเฟสน้ำต้นแบบถูกแยกออกและ10 lL ฉีดเข้าไปใน Chromatograph ของเหลวสมรรถนะสูงเป็นพิเศษ(UHPLC) ระบบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

25 จะ 4-methylumbelliferyl
glucuronide / 4-methylumbelliferyl ซัลเฟต / 13c4-4-methylumbelliferone
ส่วนผสมมาตรฐาน ( 4 lgml  1 ) ยังเพิ่ม

กำหนดขอบเขตของ deconjugation

หลังจากผสมตัวอย่าง
ถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมง 

ต่อไป สารสกัดจาก
ตัวอย่างโดยการเพิ่ม 15 มิลลิลิตร เอทิลอะซิเตท / กรด ( 99:1 , V /
V ) และเขย่าเป็นเวลา 30 นาที

ส่วนผสมที่ 4050g ระดับ 10 นาที


ต่อมาสารระเหยแห้งได้ในอุณหภูมิห้องภายใต้
ไนโตรเจน กระแส

กาก
400 จะละลายผสม milli-q / ปริมาณน้ำ 100%
, v / v ) และวางไว้ใน 1.5 ml เพนดอร์ฟหลอด 500

จะได้เพิ่มและสารผสมที่ระดับ 15 นาทีที่ 24960g



ในที่สุดบริษัทเฟสน้ำถูกแยกออกจากกันและ
10 จะถูกฉีดเข้าไปในการปฏิบัติงานสูงยิ่งยวด ของเหลว โครมาโตกราฟ
( uhplc ) ระบบ