ResultsA reporter assay using const

Results
A reporter assay using constructs of various lengths of the 5′-flanking region (-890-Luc, -513-Luc, -306-Luc, -273-Luc, and -70-Luc) revealed that a region corresponding to the activator protein 1 (Ap-1) located between -281 and -274 bp was essential for the transcriptional activity. Absence of the Ap-1 site in -273-Luc dramatically decreased the transcription levels to the control levels. When the reporter constructs were co-transfected with Ap-1 (Jun) and specificity protein (Sp-1) genes, the transcription activities of the constructs increased with the exception of -273 and -70, while that of the double construct was reduced compared to that of Ap-1 alone. Furthermore, mutational analysis demonstrated that a putative Ap-1 site played an important role in the expression of the reporter gene. These findings were confirmed by EMSA examining the interactions of the protein Ap-1 in a nuclear extract from CHO-K1 cells and the expression levels of the Ap-1 transcription factor in pre-parturition placenta and CHO-K1 cells. Although mut-1 and mut-2 of Ap-1 bound with nuclear extracts from CHO-K1 cells, the transcriptional activity of mut-3 was almost completely suppressed.

Conclusions
Our results indicate that the Ap-1 site (-281 → -274) (5′-TGTCTCAT-3′) plays a crucial role in the activation of the monkey 20α-HSD gene. Thus, we demonstrated that monkey 20α-HSD promoter activity is regulated by the transcription factor Ap-1 in CHO-K1 cells.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลลัพธ์ทดสอบโปรแกรมรายงานการใช้โครงสร้างของความหลากหลายของภูมิภาค 5′ flanking (-890-ลุค -513-ลุค -306-ลุค -273-ลุค -70 และ -ลุค) เปิดเผยว่า บริเวณที่ตรงกับโปรตีน activator 1 (Ap-1) อยู่ระหว่าง-281 และ-274 bp เป็นสิ่งสำคัญสำหรับกิจกรรม transcriptional การขาดงานของ Ap-1 เว็บไซต์ใน-273-ลุคอย่างมากลดลงระดับ transcription ระดับควบคุม เมื่อโครงสร้างโปรแกรมรายงานได้ transfected ร่วมกับ Ap 1 (Jun) และ specificity ยีนโปรตีน (Sp-1) กิจกรรม transcription ของโครงสร้างที่เพิ่มขึ้นยกเว้น-273 และ -70 ในขณะที่ของโครงสร้างคู่ถูกลดลงเมื่อเทียบกับของ Ap 1 เพียงอย่างเดียว นอกจากนี้ วิเคราะห์ mutational แสดงว่า Ap 1 ไซต์ putative เล่นมีบทบาทสำคัญในการยีนโปรแกรมรายงาน ผลการวิจัยเหล่านี้ถูกยืนยัน โดย EMSA ตรวจสอบการโต้ตอบของโปรตีน Ap 1 ในอาวุธนิวเคลียร์แยกจากเซลล์ช่อ K1 และนิพจน์ระดับของตัวคูณการ transcription Ap 1 parturition ก่อนรกและเซลล์ช่อ K1 แม้ว่า mut-1 และ mut-2 Ap 1 ผูกกับนิวเคลียร์สารสกัดจากเซลล์ช่อ K1 กิจกรรม transcriptional mut-3 ถูกเกือบหมดระงับบทสรุปผลของเราบ่งชี้ว่า ไซต์ Ap 1 (-281 →-274) (5′-TGTCTCAT-3′) มีบทบาทสำคัญในการเรียกใช้ยีน 20α HSD ลิง ดังนั้น เราแสดงว่า ลิง 20α HSD โปรโมเตอร์กิจกรรมจะถูกกำหนด โดยปัจจัย transcription Ap 1 ในเซลล์ช่อ K1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลการ
ทดสอบนักข่าวใช้โครงสร้างของความยาวต่างๆของภูมิภาค 5'-ขนาบ (-890-Luc, -513-Luc, -306-Luc, -273-Luc และ -70-Luc) เปิดเผยว่าพื้นที่ที่สอดคล้องกับ โปรตีนกระตุ้นที่ 1 (Ap-1) ที่ตั้งอยู่ระหว่าง -281 -274 bp และเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับกิจกรรมการถอดรหัส กรณีที่ไม่มี Ap-1 เว็บไซต์ใน -273-Luc อย่างมากลดระดับการถอดความให้อยู่ในระดับการควบคุม เมื่อผู้สื่อข่าวได้รับการสร้างร่วมกับ transfected Ap-1 (มิถุนายน) และโปรตีนจำเพาะ (SP-1) ยีนกิจกรรมถอดความจากโครงสร้างที่เพิ่มขึ้นด้วยข้อยกเว้นของ -273 -70 และในขณะที่สร้างคู่ก็ลดลง เมื่อเทียบกับที่ของ Ap-1 เพียงอย่างเดียว นอกจากนี้การวิเคราะห์แสดงให้เห็นว่า mutational สมมุติเว็บไซต์ Ap-1 มีบทบาทสำคัญในการแสดงออกของยีนนักข่าว การค้นพบนี้ได้รับการยืนยันจากการตรวจสอบ EMSA ปฏิสัมพันธ์ของโปรตีน Ap-1 ในสารสกัดจากนิวเคลียร์จากเซลล์ CHO-K1 และระดับการแสดงออกของถอดความปัจจัย Ap-1 ในรกก่อนคลอดและเซลล์ CHO-K1 แม้ว่า mut-1 และ mut-2 ของ Ap-1 ที่ถูกผูกไว้ด้วยสารสกัดจากนิวเคลียร์จากเซลล์ CHO-K1 กิจกรรมการถอดรหัสของ mut-3 ถูกระงับเกือบสมบูรณ์. สรุปผลของเราแสดงให้เห็นว่าเว็บไซต์ Ap-1 (-281 -274 → ) (5'-TGTCTCAT-3) มีบทบาทสำคัญในการกระตุ้นการทำงานของยีนลิง20α-HSD ดังนั้นเราจึงแสดงให้เห็นว่าลิงกิจกรรมก่อการ20α-HSD ถูกควบคุมโดยถอดความปัจจัย Ap-1 ในเซลล์ CHO-K1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการทดสอบ โดยใช้โครงสร้างของ
นักข่าวต่าง ๆความยาวของ 5 ’ - flanking region ( - 890 ลุค - 513 , ลุค , - 306 ลุค , - 273 ลุคและลุค - 70 ) พบว่า เขตที่กระตุ้นโปรตีน 1 ( ap-1 ) อยู่ระหว่าง - และ - 274 ความดันโลหิตเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับกิจกรรมลอง .ไม่มีของ ap-1 เว็บไซต์ - 273 ลุคอย่างมากลดลงระดับ transcription ในระดับที่ควบคุมได้ เมื่อผู้สื่อข่าวได้ร่วมสร้าง transfected กับ ap-1 ( จุน ) และโปรตีนที่เฉพาะเจาะจง ( sp-1 ) ยีน บัณฑิตยสถาน กิจกรรมต่างๆ ของโครงสร้างที่เพิ่มขึ้นยกเว้น - และ - 70 ในขณะที่ที่ของคู่สร้างลดลงเมื่อเทียบกับที่ของ ap-1 คนเดียว นอกจากนี้การวิเคราะห์เกี่ยวกับการเปลี่ยนแปลง พบว่า เว็บไซต์ ap-1 ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการแสดงออกของนักข่าวจีน การค้นพบนี้ได้รับการยืนยันโดย emsa ศึกษาปฏิสัมพันธ์ของโปรตีนสกัดจาก cho-k1 นิวเคลียร์ ap-1 ในเซลล์และระดับการแสดงออกของ ap-1 ถอดความปัจจัยก่อนคลอด และ รกแกะ cho-k1 เซลล์แม้ว่า mut-1 mut-2 ของ ap-1 ผูกพันกับนิวเคลียร์ และสารสกัดจาก cho-k1 เซลล์ , กิจกรรมลอง mut-3 เกือบสมบูรณ์ปราบปราม


สรุปผลของเราระบุว่าเว็บไซต์ ap-1 ( 281  →  - 274 ( 5 ’ - ’ tgtctcat-3 ) มีบทบาทสำคัญในการกระตุ้นของลิง 20 แอลฟายีน HSD . ดังนั้นเราพบว่า ลิง 20 แอลฟากิจกรรมส่งเสริม HSD ถูกควบคุมโดยปัจจัยการถอดความ ap-1 ใน cho-k1 เซลล์