- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Example 3: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง
Example 3: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง of encapsulated Lactobacillus casei using a composition ซึ่งประกอบรวมด้วย skim milk, ทรีฮาโลส and กลีเซอรอล as ไครโอโพรเทกแทนต์
[0096] A previously frozen vial of the probiotic bacteria, Lactobacillus casei was thawed
out from -80°C and 20111 was added into 50 ml of MRS media. The bacteria were
subsequently cultured overnight at 37°C with a shaking speed of 50rpm. The next day, the optical density of the bacterial culture was determined at 600nm (0D600) on a Tecan Infinite
M200. Typically an OD600 reading of 1 corresponds to when the bacteria are in the exponential growth phase. The bacteria should be in the exponential growth phase when encapsulated.
[0097] For the encapsulation of the bacteria, 100u1 of a bacterial culture with an OD600 reading of 1 was mixed with 2ml 1.8% sodium cellulose sulphate containing 0.9% sodium chloride. A 5ml syringe and a 23G needle were used for the encapsulation process. The bacteria culture was mixed with the sodium cellulose sulphate and dropped into a gelation bath containing 150ml of 1.3% pDADMAC (24kDa), 0.9% sodium chloride. The capsules were allowed to gelate in the pDADMAC for 4mins. Subsequently, 300ml of lx Phosphate Buffered Saline (PBS) was added and the capsules washed for 8mins 300ml of the washing solution was then removed and a further 400ml of PBS was added and the capsules washed for an additional 4mins. The washing solution was then drained and a further 3x 100ml washes with PBS then 3x 30ml washes with fresh MRS were performed. The capsules were then transferred to a 250ml conical flask with 100ml of fresh MRS media. These capsules were cultured overnight at 37°C with a shaking speed of 50rpm.
[0098] After the overnight culture the bacteria containing capsules were washed with 3x 50ml fresh MRS media in the 250ml flask first and then placed in 15ml falcon tube with 10 ml of fresh MRS media. 5ml of MRS media was taken out and 5ml of cryopreservation medium with (5% skim milk (w/v), 1% กลีเซอรอล (w/v), 10% (w/v) ทรีฮาโลส in water) was added. The capsules were incubated in this สารแขวนลอย for 25 minutes then 5ml of the medium removed and replaced with 5ml of fresh cryopreservation medium. This procedure was repeated an additional 4 times, thus raising the proportion of cryopreservation medium from 50% after the first addition of cryopreservation medium to 98.5% finally.
[0099] Finally, capsules from the cryopreservation medium were placed into 15 ml falcon tubes with 500u1 of aqueous การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง solution containing 5% skim milk, 1% กลีเซอรอล and ทรีฮาโลส 10% . These capsules were then frozen in an ethanol/dry ice bath and then stored at -80°C.
[00100] As can be seen from รูป 11A to 11C which show the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม before
and after encapsulation (รูป 11A shows Lactobacillus casei capsules immediate after
encapsulation, รูป 11B shows Lactobacillus casei capsules one day after encapsulation before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, and รูป 11C shows เติมน้ำกลับ freeze-dried Lactobacillus casei capsules), the Lactobacillus casei capsules appeared be intact after the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, meaning not affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง.
[00101] In addition to visual examination, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of encapsulated Lactobacillus casei
bacteria was checked before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง as explained above in Example 2. As can be seen from รูป 12, the result thereof shows the การอยู่รอดและเติบโตได้ of the Lactobacillus casei bacteria was affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, meaning full การอยู่รอดและเติบโตได้ was picked up after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. Thus, Example 3 confirms the effectiveness and suitability of the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method and respective composition of the การประดิษฐ์นี้.
Example 4: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง of encapsulated Bifidobacterium infantis longum using a composition ซึ่งประกอบรวมด้วย skim milk, ทรีฮาโลส and กลีเซอรอล as ไครโอโพรเทกแทนต์
[00102] Bifidobacterium infantis longum are an example of strict anaerobic bacteria. The cells were therefore cultured under anaerobic conditions in MRS medium, at 37°C and 50rpm for overnight. Gaspak (BD) was used to created strict anaerobic environment during culturing.
[00103] After cultivation Bifidobacteria were encapsulated using sodium cellulose sulphate as described in Example 2 and 3, however under anaerobic conditions. After the overnight culture the bacteria containing capsules were washed with 3x 50ml fresh MRS media in the 250ml flask first and then placed in 15ml falcon tube with 10 ml of fresh MRS media. 5ml of MRS media was taken out and 5ml of cryopreservation medium with (5% skim milk (w/v), 1% กลีเซอรอล (w/v), 10% (w/v) ทรีฮาโลส in water) was added. The capsules were incubated in this สารแขวนลอย for 25 minutes then 5ml of the medium removed and replaced with 5ml of fresh cryopreservation medium. This procedure was repeated an additional 4 times, thus raising the proportion of cryopreservation medium from 50% after the first addition of cryopreservation medium to 98.5% finally.
[00104] Finally, capsules from the cryopreservation medium were placed into 15 ml falcon tubes with 500u1 of aqueous การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง solution containing 5% skim milk, 1% กลีเซอรอล and ทรีฮาโลส 10% . These capsules were then frozen in an ethanol/dry ice bath and then stored at -80°C.
[00105] As can be seen from รูป 13 which shows the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม before and after encapsulation (รูป 13A shows capsules one day after encapsulation before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, and รูป 13B shows เติมน้ำกลับ freeze-dried Bifidobacterium infantis longum capsules), the Bifidobacterium infantis longum capsules appeared be slightly less intact after the freeze-
drying.
[00106] In addition to visual examination, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of the encapsulated Bifidobacterium infantis bacteria was checked before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง as
explained above in Example 2. As can be seen from รูป 14, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of Bifidobacterium infantis longum was somehow affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, as รูป 14 shows that about 50% of bacteria were viable after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. However, it is believed that the การอยู่รอดและเติบโตได้ of free (not encapsulated) Bifidobacterium infantis bacteria will be much lower. In addition, higher การอยู่รอดและเติบโตได้ can be expected by the capsules are perfectly dried during การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง process. Thus, also Example 4 confirms the effectiveness and suitability of the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method and a respective composition of the การประดิษฐ์นี้.
[00107] The การประดิษฐ์ illustratively described herein may suitably be practiced in the absence of any element or elements, limitation or limitations, not specifically disclosed herein. Thus, for example, the terms "ซึ่งประกอบรวมด้วย", "ที่รวมถึง," containing", etc. shall be read expansively and without limitation. Additionally, the terms and expressions employed herein have been used as terms of description and not of limitation, and there is no intention in the use of such terms and expressions of excluding any equivalents of the features shown and described or portions thereof, but it is recognized that various modifications are possible within the scope of the การประดิษฐ์ ข้อถือสิทธิed. Thus, it should be understood that although the การประดิษฐ์นี้ has been specifically disclosed by exemplary รุรุ and optional features, modification and variation of the การประดิษฐ์s embodied therein herein disclosed may be resorted to by those skilled in the art, and that such modifications and variations are considered to be within the scope of this การประดิษฐ์.
[00108] The การประดิษฐ์ has been described broadly and generically herein. Each of the narrower species and subgeneric groupings falling within the generic disclosure also form part of the การประดิษฐ์. This includes the generic description of the การประดิษฐ์ with a proviso or negative limitation removing any subject matter from the genus, regardless of whether or not the excised material is specifically recited herein.
[00109] Other รุรุ are within the following ข้อถือสิทธิ. In addition, where features or aspects of the การประดิษฐ์ are described in terms of Markush groups, those skilled in the art will recognize that the การประดิษฐ์ is also thereby described in terms of any individual member or subgroup of members of the Markush group.
[0096] A previously frozen vial of the probiotic bacteria, Lactobacillus casei was thawed
out from -80°C and 20111 was added into 50 ml of MRS media. The bacteria were
subsequently cultured overnight at 37°C with a shaking speed of 50rpm. The next day, the optical density of the bacterial culture was determined at 600nm (0D600) on a Tecan Infinite
M200. Typically an OD600 reading of 1 corresponds to when the bacteria are in the exponential growth phase. The bacteria should be in the exponential growth phase when encapsulated.
[0097] For the encapsulation of the bacteria, 100u1 of a bacterial culture with an OD600 reading of 1 was mixed with 2ml 1.8% sodium cellulose sulphate containing 0.9% sodium chloride. A 5ml syringe and a 23G needle were used for the encapsulation process. The bacteria culture was mixed with the sodium cellulose sulphate and dropped into a gelation bath containing 150ml of 1.3% pDADMAC (24kDa), 0.9% sodium chloride. The capsules were allowed to gelate in the pDADMAC for 4mins. Subsequently, 300ml of lx Phosphate Buffered Saline (PBS) was added and the capsules washed for 8mins 300ml of the washing solution was then removed and a further 400ml of PBS was added and the capsules washed for an additional 4mins. The washing solution was then drained and a further 3x 100ml washes with PBS then 3x 30ml washes with fresh MRS were performed. The capsules were then transferred to a 250ml conical flask with 100ml of fresh MRS media. These capsules were cultured overnight at 37°C with a shaking speed of 50rpm.
[0098] After the overnight culture the bacteria containing capsules were washed with 3x 50ml fresh MRS media in the 250ml flask first and then placed in 15ml falcon tube with 10 ml of fresh MRS media. 5ml of MRS media was taken out and 5ml of cryopreservation medium with (5% skim milk (w/v), 1% กลีเซอรอล (w/v), 10% (w/v) ทรีฮาโลส in water) was added. The capsules were incubated in this สารแขวนลอย for 25 minutes then 5ml of the medium removed and replaced with 5ml of fresh cryopreservation medium. This procedure was repeated an additional 4 times, thus raising the proportion of cryopreservation medium from 50% after the first addition of cryopreservation medium to 98.5% finally.
[0099] Finally, capsules from the cryopreservation medium were placed into 15 ml falcon tubes with 500u1 of aqueous การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง solution containing 5% skim milk, 1% กลีเซอรอล and ทรีฮาโลส 10% . These capsules were then frozen in an ethanol/dry ice bath and then stored at -80°C.
[00100] As can be seen from รูป 11A to 11C which show the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม before
and after encapsulation (รูป 11A shows Lactobacillus casei capsules immediate after
encapsulation, รูป 11B shows Lactobacillus casei capsules one day after encapsulation before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, and รูป 11C shows เติมน้ำกลับ freeze-dried Lactobacillus casei capsules), the Lactobacillus casei capsules appeared be intact after the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, meaning not affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง.
[00101] In addition to visual examination, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of encapsulated Lactobacillus casei
bacteria was checked before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง as explained above in Example 2. As can be seen from รูป 12, the result thereof shows the การอยู่รอดและเติบโตได้ of the Lactobacillus casei bacteria was affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, meaning full การอยู่รอดและเติบโตได้ was picked up after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. Thus, Example 3 confirms the effectiveness and suitability of the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method and respective composition of the การประดิษฐ์นี้.
Example 4: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง of encapsulated Bifidobacterium infantis longum using a composition ซึ่งประกอบรวมด้วย skim milk, ทรีฮาโลส and กลีเซอรอล as ไครโอโพรเทกแทนต์
[00102] Bifidobacterium infantis longum are an example of strict anaerobic bacteria. The cells were therefore cultured under anaerobic conditions in MRS medium, at 37°C and 50rpm for overnight. Gaspak (BD) was used to created strict anaerobic environment during culturing.
[00103] After cultivation Bifidobacteria were encapsulated using sodium cellulose sulphate as described in Example 2 and 3, however under anaerobic conditions. After the overnight culture the bacteria containing capsules were washed with 3x 50ml fresh MRS media in the 250ml flask first and then placed in 15ml falcon tube with 10 ml of fresh MRS media. 5ml of MRS media was taken out and 5ml of cryopreservation medium with (5% skim milk (w/v), 1% กลีเซอรอล (w/v), 10% (w/v) ทรีฮาโลส in water) was added. The capsules were incubated in this สารแขวนลอย for 25 minutes then 5ml of the medium removed and replaced with 5ml of fresh cryopreservation medium. This procedure was repeated an additional 4 times, thus raising the proportion of cryopreservation medium from 50% after the first addition of cryopreservation medium to 98.5% finally.
[00104] Finally, capsules from the cryopreservation medium were placed into 15 ml falcon tubes with 500u1 of aqueous การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง solution containing 5% skim milk, 1% กลีเซอรอล and ทรีฮาโลส 10% . These capsules were then frozen in an ethanol/dry ice bath and then stored at -80°C.
[00105] As can be seen from รูป 13 which shows the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม before and after encapsulation (รูป 13A shows capsules one day after encapsulation before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, and รูป 13B shows เติมน้ำกลับ freeze-dried Bifidobacterium infantis longum capsules), the Bifidobacterium infantis longum capsules appeared be slightly less intact after the freeze-
drying.
[00106] In addition to visual examination, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of the encapsulated Bifidobacterium infantis bacteria was checked before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง as
explained above in Example 2. As can be seen from รูป 14, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of Bifidobacterium infantis longum was somehow affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, as รูป 14 shows that about 50% of bacteria were viable after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. However, it is believed that the การอยู่รอดและเติบโตได้ of free (not encapsulated) Bifidobacterium infantis bacteria will be much lower. In addition, higher การอยู่รอดและเติบโตได้ can be expected by the capsules are perfectly dried during การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง process. Thus, also Example 4 confirms the effectiveness and suitability of the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method and a respective composition of the การประดิษฐ์นี้.
[00107] The การประดิษฐ์ illustratively described herein may suitably be practiced in the absence of any element or elements, limitation or limitations, not specifically disclosed herein. Thus, for example, the terms "ซึ่งประกอบรวมด้วย", "ที่รวมถึง," containing", etc. shall be read expansively and without limitation. Additionally, the terms and expressions employed herein have been used as terms of description and not of limitation, and there is no intention in the use of such terms and expressions of excluding any equivalents of the features shown and described or portions thereof, but it is recognized that various modifications are possible within the scope of the การประดิษฐ์ ข้อถือสิทธิed. Thus, it should be understood that although the การประดิษฐ์นี้ has been specifically disclosed by exemplary รุรุ and optional features, modification and variation of the การประดิษฐ์s embodied therein herein disclosed may be resorted to by those skilled in the art, and that such modifications and variations are considered to be within the scope of this การประดิษฐ์.
[00108] The การประดิษฐ์ has been described broadly and generically herein. Each of the narrower species and subgeneric groupings falling within the generic disclosure also form part of the การประดิษฐ์. This includes the generic description of the การประดิษฐ์ with a proviso or negative limitation removing any subject matter from the genus, regardless of whether or not the excised material is specifically recited herein.
[00109] Other รุรุ are within the following ข้อถือสิทธิ. In addition, where features or aspects of the การประดิษฐ์ are described in terms of Markush groups, those skilled in the art will recognize that the การประดิษฐ์ is also thereby described in terms of any individual member or subgroup of members of the Markush group.
0/5000
ตัวอย่างที่ 3: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งของแลคโตบาซิลลัส casei สรุปที่ใช้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วย skim นม ทรีฮาโลส และกลีเซอรอลเป็นไครโอโพรเทกแทนต์คอนแทค [0096] A ที่แช่แข็งไว้ก่อนหน้านี้ ของแบคทีเรียโปรไบโอติกส์ แลคโตบาซิลลัส casei ที่ thawedออกจาก-80 ° C และ 20111 ถูกเพิ่มเป็น 50 ml นางสื่อ แบคทีเรียมีแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์ต่ออ่างที่ 37° C ด้วยความเร็ว 50 rpm งก ๆ ในวันถัดไป กำหนดที่ 600nm แสงความหนาแน่นของวัฒนธรรมจากแบคทีเรีย (0D 600) บนอนันต์ TecanM200 โดยทั่วไปการอ่าน OD600 1 ตรงกับเมื่อแบคทีเรียอยู่ในระยะเรขา แบคทีเรียต้องการเรขาเมื่อนึ้[0097] สำหรับ encapsulation ของแบคทีเรีย 100u1 ของวัฒนธรรมจากแบคทีเรีย ด้วยการอ่าน OD600 1 ถูกผสมกับ 2ml โซเดียม 1.8% เซลลูโลสซัลเฟตประกอบด้วย 0.9% โซเดียมคลอไรด์ เข็ม 5 มล.และเข็ม 23 กรัมถูกใช้สำหรับการ encapsulation วัฒนธรรมแบคทีเรียผสมกับซัลเฟตเซลลูโลสโซเดียม และทิ้งลงในน้ำ gelation ประกอบด้วย 150ml ของ 1.3% pDADMAC (24kDa), 0.9% โซเดียมคลอไรด์ แคปซูลได้รับอนุญาตให้ gelate ใน pDADMAC สำหรับ 4mins ในเวลาต่อมา 300ml ของ lx เพิ่มฟอสเฟต Buffered Saline (PBS) และแคปซูลล้าง 8mins 300ml ของโซลูชันซักผ้าแล้วได้ถูกเอาออก และเพิ่มมล 400 เพิ่มเติมของ PBS และแคปซูลล้างสำหรับการ 4mins เพิ่มเติม โซลูชันการล้างนั้นหมดกำลังแล้ว และแบบเพิ่มเติม 3 x 100ml ต่อผิวหน้า ด้วย PBS แล้วดำเนิน washes 3 x 30ml กับนางสด แคปซูลมีการถ่ายโอนแล้วจะหนาวทรงกรวยเป็น 250ml กับสื่อนางสด 100 มล แคปซูลเหล่านี้มีอ่างค้างคืนที่ 37° C ด้วยความเร็ว 50 rpm งก ๆ[0098] หลังจากวัฒนธรรมค้างคืน แบคทีเรียประกอบด้วยแคปซูลล้าง ด้วย 3 x 50ml สดนางสื่อในหนาว 250ml ก่อน และอยู่ในหลอดเหยี่ยว 15ml ด้วย ml 10 สื่อนางสด 5ml ของนางสื่อถูกนำออก และเพิ่ม 5ml ของ cryopreservation กลางด้วย (5% skim นม (w/v), กลีเซอรอล 1% (w/v), ทรีฮาโลส 10% (w/v) ในน้ำ) แคปซูลถูก incubated ในสารแขวนลอยนี้ 25 นาทีแล้ว 5ml ของสื่อที่ถูกเอาออก และแทนที่ ด้วย 5ml ของ cryopreservation สดกลาง ขั้นตอนนี้ถูกทำซ้ำครั้ง 4 เพิ่มเติม จึง เพิ่มสัดส่วนของกลาง cryopreservation จาก 50% หลังกลาง cryopreservation 98.5% แห่งแรกจน[0099] สุดท้าย แคปซูลจากสื่อ cryopreservation ถูกวางลงในหลอดเหยี่ยว 15 ml ด้วย 500u1 ของการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งอควีประกอบด้วยนม skim 5%, 1% กลีเซอรอล และทรีฮาโลส 10% แล้ว แช่ในน้ำแข็งมีเอทานอลรูมแคปซูลเหล่านี้แล้ว เก็บไว้ที่-80 องศาเซลเซียส[00100] สามารถดูได้จากรูปที่ 11A ถึง 11C ซึ่งแสดงเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มก่อนและ หลังการ encapsulation (รูปที่ 11A แสดงแลคโตบาซิลลัส casei แคปซูลทันทีหลังจากencapsulation, รูป 11B shows Lactobacillus casei capsules one day after encapsulation before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, and รูป 11C shows เติมน้ำกลับ freeze-dried Lactobacillus casei capsules), the Lactobacillus casei capsules appeared be intact after the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, meaning not affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. [00101] In addition to visual examination, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of encapsulated Lactobacillus caseibacteria was checked before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง as explained above in Example 2. As can be seen from รูป 12, the result thereof shows the การอยู่รอดและเติบโตได้ of the Lactobacillus casei bacteria was affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, meaning full การอยู่รอดและเติบโตได้ was picked up after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. Thus, Example 3 confirms the effectiveness and suitability of the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method and respective composition of the การประดิษฐ์นี้.ตัวอย่างที่ 4: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งของ longum infantis Bifidobacterium สรุปโดยใช้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วย skim นม ทรีฮาโลส และกลีเซอรอลเป็นไครโอโพรเทกแทนต์ Longum infantis Bifidobacterium [00102] เป็นตัวอย่างของแบคทีเรียไม่ใช้ออกซิเจนอย่างเข้มงวด เซลล์ถูกดังนั้นอ่างภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจนในนาง 37° C และ 50 rpm พรรณไม้หลากหลายชนิด Gaspak (BD) ถูกใช้เพื่อสร้างสภาพแวดล้อมที่ไม่ใช้ออกซิเจนอย่างเข้มงวดระหว่าง culturingเพาะปลูกหลัง [00103] Bifidobacteria ที่นึ้ใช้โซเดียมซัลเฟตเซลลูโลสตามที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 2 และ 3 อย่างไรก็ตามภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน หลังจากวัฒนธรรมค้างคืน แบคทีเรียประกอบด้วยแคปซูลถูกล้าง ด้วย 3 x 50ml สดนางสื่อในหนาว 250ml ก่อน แล้ววางลงในหลอดเหยี่ยว 15ml ด้วย ml 10 สื่อนางสด 5ml ของนางสื่อถูกนำออก และเพิ่ม 5ml ของ cryopreservation กลางด้วย (5% skim นม (w/v), กลีเซอรอล 1% (w/v), ทรีฮาโลส 10% (w/v) ในน้ำ) แคปซูลถูก incubated ในสารแขวนลอยนี้ 25 นาทีแล้ว 5ml ของสื่อที่ถูกเอาออก และแทนที่ ด้วย 5ml ของ cryopreservation สดกลาง ขั้นตอนนี้ถูกทำซ้ำครั้ง 4 เพิ่มเติม จึง เพิ่มสัดส่วนของกลาง cryopreservation จาก 50% หลังกลาง cryopreservation 98.5% แห่งแรกจน[00104] Finally, capsules from the cryopreservation medium were placed into 15 ml falcon tubes with 500u1 of aqueous การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง solution containing 5% skim milk, 1% กลีเซอรอล and ทรีฮาโลส 10% . These capsules were then frozen in an ethanol/dry ice bath and then stored at -80°C.[00105] As can be seen from รูป 13 which shows the เซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้ม before and after encapsulation (รูป 13A shows capsules one day after encapsulation before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, and รูป 13B shows เติมน้ำกลับ freeze-dried Bifidobacterium infantis longum capsules), the Bifidobacterium infantis longum capsules appeared be slightly less intact after the freeze-drying.[00106] In addition to visual examination, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of the encapsulated Bifidobacterium infantis bacteria was checked before การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง and after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง asexplained above in Example 2. As can be seen from รูป 14, the การอยู่รอดและเติบโตได้ of Bifidobacterium infantis longum was somehow affected by the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง, as รูป 14 shows that about 50% of bacteria were viable after การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. However, it is believed that the การอยู่รอดและเติบโตได้ of free (not encapsulated) Bifidobacterium infantis bacteria will be much lower. In addition, higher การอยู่รอดและเติบโตได้ can be expected by the capsules are perfectly dried during การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง process. Thus, also Example 4 confirms the effectiveness and suitability of the การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง method and a respective composition of the การประดิษฐ์นี้.[00107] The การประดิษฐ์ illustratively described herein may suitably be practiced in the absence of any element or elements, limitation or limitations, not specifically disclosed herein. Thus, for example, the terms "ซึ่งประกอบรวมด้วย", "ที่รวมถึง," containing", etc. shall be read expansively and without limitation. Additionally, the terms and expressions employed herein have been used as terms of description and not of limitation, and there is no intention in the use of such terms and expressions of excluding any equivalents of the features shown and described or portions thereof, but it is recognized that various modifications are possible within the scope of the การประดิษฐ์ ข้อถือสิทธิed. Thus, it should be understood that although the การประดิษฐ์นี้ has been specifically disclosed by exemplary รุรุ and optional features, modification and variation of the การประดิษฐ์s embodied therein herein disclosed may be resorted to by those skilled in the art, and that such modifications and variations are considered to be within the scope of this การประดิษฐ์.[00108] The การประดิษฐ์ has been described broadly and generically herein. Each of the narrower species and subgeneric groupings falling within the generic disclosure also form part of the การประดิษฐ์. This includes the generic description of the การประดิษฐ์ with a proviso or negative limitation removing any subject matter from the genus, regardless of whether or not the excised material is specifically recited herein.
[00109] Other รุรุ are within the following ข้อถือสิทธิ. In addition, where features or aspects of the การประดิษฐ์ are described in terms of Markush groups, those skilled in the art will recognize that the การประดิษฐ์ is also thereby described in terms of any individual member or subgroup of members of the Markush group.
[00109] Other รุรุ are within the following ข้อถือสิทธิ. In addition, where features or aspects of the การประดิษฐ์ are described in terms of Markush groups, those skilled in the art will recognize that the การประดิษฐ์ is also thereby described in terms of any individual member or subgroup of members of the Markush group.
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตัวอย่างที่ 3: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งของ casei Lactobacillus ห่อหุ้มโดยใช้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วยนมพร่องมันเนย, ทรีฮาโลสและกลีเซอรอลเป็นไครโอโพรเทกแทนต์
[0096] เป็นแช่แข็งก่อนหน้านี้ ขวดของแบคทีเรียโปรไบโอติก, Lactobacillus casei
ถูกละลายออกมาจากที่-80 องศาเซลเซียสและ 20111 ถูกเพิ่มเข้าไปใน 50 มล. ของสื่อ MRS เชื้อแบคทีเรียที่ถูกเพาะเลี้ยงต่อมาค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสด้วยความเร็วสั่นของ 50rpm
วันรุ่งแสงความหนาแน่นของวัฒนธรรมแบคทีเรียถูกกำหนดที่ 600Nm (0D600) ใน Tecan ไม่มีที่สิ้นสุดM200 โดยปกติการอ่าน OD600 1 สอดคล้องกับเมื่อเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในระยะเจริญเติบโต แบคทีเรียที่ควรจะอยู่ในระยะการเจริญเติบโตชี้แจงเมื่อห่อหุ้ม. [0097] สำหรับการห่อหุ้มของเชื้อแบคทีเรียที่ 100u1 ของวัฒนธรรมแบคทีเรียที่มีการอ่าน OD600 1 ผสมกับ 2ml เซลลูโลสซัลเฟตโซเดียม 1.8% ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 0.9% เข็มฉีดยา 5ml และเข็ม 23G ถูกใช้สำหรับขั้นตอนการห่อหุ้ม วัฒนธรรมแบคทีเรียที่เป็นผสมกับโซเดียมซัลเฟตเซลลูโลสและลดลงในห้องอาบน้ำที่มีส่วนผสมของเจล 150ml 1.3% pDADMAC (24kDa) 0.9% โซเดียมคลอไรด์ แคปซูลได้รับอนุญาตให้ gelate ใน pDADMAC สำหรับ 4mins ต่อมา 300ml ของ LX ฟอสเฟต Buffered Saline (พีบีเอส) ถูกบันทึกและแคปซูลล้างสำหรับ 8mins 300ml ของการแก้ปัญหาการซักแล้วก็ลบออกและ 400ml ต่อไปของพีบีเอสถูกบันทึกและแคปซูลล้างสำหรับ 4mins เพิ่มเติม วิธีการแก้ปัญหาการซักผ้าได้ถูกระบายออกแล้วและอีกล้าง 100ml 3x กับพีบีเอสแล้วล้าง 30ml 3x กับนางสดได้ดำเนินการ แคปซูลถูกถ่ายโอนไปแล้ว 250ml ขวดรูปกรวยกับ 100ml ของสื่อ MRS สด แคปซูลเหล่านี้ถูกเลี้ยงค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสด้วยความเร็วสั่นของ 50rpm. [0098] หลังจากที่วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนแบคทีเรียที่มีถูกล้างแคปซูลกับ 3x 50ml สื่อนางสดในขวด 250ml แรกแล้ววางไว้ในหลอดเหยี่ยว 15ml 10 มล. สื่อ MRS สด 5ml ของสื่อ MRS ถูกนำออกมาและ 5ml ของกลางเก็บรักษาที่มี (5% นมพร่องมันเนย (w / v), 1% กลีเซอรอล (w / v), 10% (w / v) ทรีฮาโลสในน้ำ ) ถูกเพิ่มเข้ามา แคปซูลถูกบ่มในสารแขวนลอยนี้เป็นเวลา 25 นาทีแล้ว 5ml ของกลางออกไปและแทนที่ด้วย 5ml ของกลางเก็บรักษาความสดใหม่ ขั้นตอนนี้ซ้ำเพิ่มอีก 4 ครั้งจึงเพิ่มสัดส่วนของกลางเก็บรักษาจาก 50% หลังจากที่นอกจากนี้ครั้งแรกของกลางเก็บรักษา 98.5% ในที่สุด. [0099] สุดท้ายแคปซูลจากกลางเก็บรักษาที่ถูกวางลง 15 มลหลอดเหยี่ยวกับ 500u1 ของน้ำการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการแก้ปัญหาที่มี 5% นมพร่องมันเนย, 1% กลีเซอรอลและทรีฮาโลส 10% แคปซูลเหล่านี้ถูกแช่แข็งแล้วในเอทานอล / อาบน้ำน้ำแข็งแห้งและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส. [00100] ที่สามารถเห็นได้จากรูป 11A 11C ซึ่งจะแสดงเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มก่อนและหลังการห่อหุ้ม(รูป 11A แสดงให้เห็นแคปซูล casei Lactobacillus ทันทีหลังจากที่ห่อหุ้ม, รูป 11B แสดงแคปซูล casei Lactobacillus วันหนึ่งหลังจากที่ห่อหุ้มก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและรูป 11C แสดงเติมน้ำกลับแลคโตบาซิลลัสแห้งแคปซูล casei) แคปซูล casei Lactobacillus ปรากฏเป็นเหมือนเดิมหลังจากที่ การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งหมายถึงไม่ได้รับผลกระทบจากการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. [00101] นอกเหนือไปจากการตรวจสอบภาพในการอยู่รอดและเติบโตได้ของ casei Lactobacillus ห่อหุ้มแบคทีเรียที่ได้รับการตรวจสอบก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและหลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในตัวอย่างที่ 2 ที่สามารถเห็นได้จากรูปที่ 12 ผลดังกล่าวแสดงให้เห็นถึงการอยู่รอดและเติบโตได้ของ Lactobacillus casei แบคทีเรียที่ได้รับผลกระทบจากการทำแห้ง แบบแช่เยือกแข็งที่มีความหมายอย่างเต็มรูปแบบการอยู่รอดและเติบโตได้ถูกหยิบขึ้นมาหลังจากการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง ดังนั้นตัวอย่างที่ 3 ยืนยันประสิทธิภาพและความเหมาะสมของการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการและองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องของการประดิษฐ์นี้. ตัวอย่างที่ 4: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งของ Bifidobacterium ห่อหุ้ม infantis longum ใช้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วย หางนม, ทรีฮาโลสและกลีเซอรอลเป็นไครโอโพรเทกแทนต์[00102] Bifidobacterium longum infantis เป็นตัวอย่างของแบคทีเรียอย่างเคร่งครัด เซลล์จึงเพาะเลี้ยงภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจนในสื่อ MRS ที่ 37 องศาเซลเซียสและ 50rpm สำหรับในชั่วข้ามคืน Gaspak (BD) ถูกใช้ในการสร้างสภาพแวดล้อมที่ไม่ใช้ออกซิเจนอย่างเข้มงวดในระหว่างการเพาะเลี้ยง. [00103] หลังจากที่ไบฟิโดแบคทีเรียเพาะปลูกถูกห่อหุ้มโดยใช้โซเดียมซัลเฟตเซลลูโลสที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 2 และ 3 แต่ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน หลังจากที่มีวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนแบคทีเรียที่มีแคปซูลถูกล้างด้วย 3x 50ml สื่อนางสดในขวด 250ml แรกแล้ววางไว้ในหลอดเหยี่ยว 15ml 10 มล. ของสื่อ MRS สด 5ml ของสื่อ MRS ถูกนำออกมาและ 5ml ของกลางเก็บรักษาที่มี (5% นมพร่องมันเนย (w / v), 1% กลีเซอรอล (w / v), 10% (w / v) ทรีฮาโลสในน้ำ ) ถูกเพิ่มเข้ามา แคปซูลถูกบ่มในสารแขวนลอยนี้เป็นเวลา 25 นาทีแล้ว 5ml ของกลางออกไปและแทนที่ด้วย 5ml ของกลางเก็บรักษาความสดใหม่ ขั้นตอนนี้ซ้ำเพิ่มอีก 4 ครั้งจึงเพิ่มสัดส่วนของกลางเก็บรักษาจาก 50% หลังจากที่นอกจากนี้ครั้งแรกของกลางเก็บรักษาเพื่อ 98.5% ในที่สุด. [00104] สุดท้ายแคปซูลจากกลางเก็บรักษาที่ถูกวางลง 15 มลหลอดเหยี่ยวกับ 500u1 ของน้ำการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการแก้ปัญหาที่มี 5% นมพร่องมันเนย, 1% กลีเซอรอลและทรีฮาโลส 10% แคปซูลเหล่านี้ถูกแช่แข็งแล้วในเอทานอล / อาบน้ำน้ำแข็งแห้งและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส. [00105] ที่สามารถเห็นได้จากรูปที่ 13 ซึ่งแสดงให้เห็นเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มก่อนและหลังการห่อหุ้ม (13A แสดงรูปแคปซูล วันหนึ่งหลังจากที่ห่อหุ้มก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและแสดงให้เห็นรูป 13B เติมน้ำกลับแห้ง Bifidobacterium longum infantis แคปซูล) ที่ Bifidobacterium longum infantis แคปซูลปรากฏจะน้อยเหมือนเดิมหลังจากที่ freeze- อบแห้ง. [00,106] นอกจากนี้ เพื่อตรวจสอบภาพที่การอยู่รอดและเติบโตได้ห่อหุ้มของเชื้อแบคทีเรีย infantis Bifidobacterium ได้รับการตรวจสอบก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและหลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งเป็นที่อธิบายข้างต้นในตัวอย่างที่2 ที่สามารถเห็นได้จากรูปที่ 14 ที่การอยู่รอดและเติบโตได้ของ Bifidobacterium longum infantis ได้รับผลกระทบอย่างใดโดยการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งเป็นรูปที่ 14 แสดงให้เห็นว่าประมาณ 50% ของเชื้อแบคทีเรียที่เป็นที่ทำงานได้หลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง แต่ก็เป็นที่เชื่อกันว่าการอยู่รอดและเติบโตได้ฟรี (ไม่ห่อหุ้ม) Bifidobacterium แบคทีเรีย infantis จะต่ำกว่ามาก นอกจากนี้ที่สูงกว่าการอยู่รอดและเติบโตได้สามารถคาดหวังโดยแคปซูลจะแห้งได้อย่างสมบูรณ์แบบในระหว่างการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งกระบวนการ ดังนั้นยังตัวอย่างที่ 4 ยืนยันประสิทธิภาพและความเหมาะสมของการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการและองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องของการประดิษฐ์นี้. [00107] ที่การ illustratively ประดิษฐ์บรรยายในที่นี้เหมาะสมอาจได้รับการปฏิบัติในกรณีที่ไม่มีองค์ประกอบใด ๆ หรือ องค์ประกอบข้อ จำกัด หรือข้อ จำกัด ไม่เป็นที่เปิดเผยในที่นี้โดยเฉพาะ ดังนั้นสำหรับตัวอย่างเช่นคำว่า "ซึ่งประกอบรวมด้วย", "ที่รวมถึง" ที่มี "ฯลฯ จะต้องอ่านเผล่และไม่ จำกัด . นอกจากคำและสำนวนที่ใช้ในเอกสารฉบับนี้ได้ถูกใช้เป็นแง่ของรายละเอียดและไม่ได้ ข้อ จำกัด และมีความตั้งใจในการใช้งานไม่มีข้อตกลงดังกล่าวและการแสดงออกของความไม่รวมรายการเทียบเท่าใด ๆ ของคุณสมบัติที่แสดงและอธิบายหรือบางส่วนของมัน แต่มันก็เป็นที่ยอมรับว่าการปรับเปลี่ยนต่างๆที่เป็นไปได้ภายในขอบเขตของการประดิษฐ์ข้อถือสิทธิเอ็ด . ดังนั้นจึงควรจะเข้าใจว่าแม้ว่าการประดิษฐ์นี้ได้รับการเปิดเผยโดยเฉพาะที่เป็นแบบอย่างรุรุและคุณสมบัติตัวเลือกการปรับเปลี่ยนและการเปลี่ยนแปลงของการประดิษฐ์ s เป็นตัวเป็นตนเปิดเผยนั้นในที่นี้อาจจะหันไปใช้โดยผู้ที่มีฝีมือในงานศิลปะและที่ดังกล่าว การปรับเปลี่ยนรูปแบบและจะถือว่าเป็นอยู่ในขอบเขตของการประดิษฐ์นี้. [00108] ที่การประดิษฐ์ได้รับการอธิบายในวงกว้างและทั่วไปในที่นี้. แต่ละสายพันธุ์ที่แคบและกลุ่ม subgeneric ตกอยู่ในการเปิดเผยข้อมูลทั่วไปนอกจากนี้ยังเป็นส่วนหนึ่งของการประดิษฐ์ ซึ่งรวมถึงรายละเอียดทั่วไปของการประดิษฐ์ที่มีเงื่อนไขหรือข้อ จำกัด เชิงลบลบเรื่องใดเรื่องจากพืชและสัตว์โดยไม่คำนึงถึงหรือไม่ว่าวัสดุที่พอถูกอ่านโดยเฉพาะในที่นี้. [00109] รุรุอื่น ๆ ที่อยู่ในต่อไปนี้ข้อถือสิทธิ นอกจากนี้การที่มีคุณสมบัติหรือลักษณะของการประดิษฐ์จะมีการอธิบายในแง่ของกลุ่ม Markush ผู้ที่มีฝีมือในงานศิลปะจะรับรู้ว่าการประดิษฐ์นอกจากนี้ยังอธิบายดังนั้นในแง่ของการเป็นสมาชิกของแต่ละบุคคลหรือกลุ่มย่อยของสมาชิกของกลุ่ม Markush
[0096] เป็นแช่แข็งก่อนหน้านี้ ขวดของแบคทีเรียโปรไบโอติก, Lactobacillus casei
ถูกละลายออกมาจากที่-80 องศาเซลเซียสและ 20111 ถูกเพิ่มเข้าไปใน 50 มล. ของสื่อ MRS เชื้อแบคทีเรียที่ถูกเพาะเลี้ยงต่อมาค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสด้วยความเร็วสั่นของ 50rpm
วันรุ่งแสงความหนาแน่นของวัฒนธรรมแบคทีเรียถูกกำหนดที่ 600Nm (0D600) ใน Tecan ไม่มีที่สิ้นสุดM200 โดยปกติการอ่าน OD600 1 สอดคล้องกับเมื่อเชื้อแบคทีเรียที่อยู่ในระยะเจริญเติบโต แบคทีเรียที่ควรจะอยู่ในระยะการเจริญเติบโตชี้แจงเมื่อห่อหุ้ม. [0097] สำหรับการห่อหุ้มของเชื้อแบคทีเรียที่ 100u1 ของวัฒนธรรมแบคทีเรียที่มีการอ่าน OD600 1 ผสมกับ 2ml เซลลูโลสซัลเฟตโซเดียม 1.8% ที่มีโซเดียมคลอไรด์ 0.9% เข็มฉีดยา 5ml และเข็ม 23G ถูกใช้สำหรับขั้นตอนการห่อหุ้ม วัฒนธรรมแบคทีเรียที่เป็นผสมกับโซเดียมซัลเฟตเซลลูโลสและลดลงในห้องอาบน้ำที่มีส่วนผสมของเจล 150ml 1.3% pDADMAC (24kDa) 0.9% โซเดียมคลอไรด์ แคปซูลได้รับอนุญาตให้ gelate ใน pDADMAC สำหรับ 4mins ต่อมา 300ml ของ LX ฟอสเฟต Buffered Saline (พีบีเอส) ถูกบันทึกและแคปซูลล้างสำหรับ 8mins 300ml ของการแก้ปัญหาการซักแล้วก็ลบออกและ 400ml ต่อไปของพีบีเอสถูกบันทึกและแคปซูลล้างสำหรับ 4mins เพิ่มเติม วิธีการแก้ปัญหาการซักผ้าได้ถูกระบายออกแล้วและอีกล้าง 100ml 3x กับพีบีเอสแล้วล้าง 30ml 3x กับนางสดได้ดำเนินการ แคปซูลถูกถ่ายโอนไปแล้ว 250ml ขวดรูปกรวยกับ 100ml ของสื่อ MRS สด แคปซูลเหล่านี้ถูกเลี้ยงค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสด้วยความเร็วสั่นของ 50rpm. [0098] หลังจากที่วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนแบคทีเรียที่มีถูกล้างแคปซูลกับ 3x 50ml สื่อนางสดในขวด 250ml แรกแล้ววางไว้ในหลอดเหยี่ยว 15ml 10 มล. สื่อ MRS สด 5ml ของสื่อ MRS ถูกนำออกมาและ 5ml ของกลางเก็บรักษาที่มี (5% นมพร่องมันเนย (w / v), 1% กลีเซอรอล (w / v), 10% (w / v) ทรีฮาโลสในน้ำ ) ถูกเพิ่มเข้ามา แคปซูลถูกบ่มในสารแขวนลอยนี้เป็นเวลา 25 นาทีแล้ว 5ml ของกลางออกไปและแทนที่ด้วย 5ml ของกลางเก็บรักษาความสดใหม่ ขั้นตอนนี้ซ้ำเพิ่มอีก 4 ครั้งจึงเพิ่มสัดส่วนของกลางเก็บรักษาจาก 50% หลังจากที่นอกจากนี้ครั้งแรกของกลางเก็บรักษา 98.5% ในที่สุด. [0099] สุดท้ายแคปซูลจากกลางเก็บรักษาที่ถูกวางลง 15 มลหลอดเหยี่ยวกับ 500u1 ของน้ำการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการแก้ปัญหาที่มี 5% นมพร่องมันเนย, 1% กลีเซอรอลและทรีฮาโลส 10% แคปซูลเหล่านี้ถูกแช่แข็งแล้วในเอทานอล / อาบน้ำน้ำแข็งแห้งและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส. [00100] ที่สามารถเห็นได้จากรูป 11A 11C ซึ่งจะแสดงเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มก่อนและหลังการห่อหุ้ม(รูป 11A แสดงให้เห็นแคปซูล casei Lactobacillus ทันทีหลังจากที่ห่อหุ้ม, รูป 11B แสดงแคปซูล casei Lactobacillus วันหนึ่งหลังจากที่ห่อหุ้มก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและรูป 11C แสดงเติมน้ำกลับแลคโตบาซิลลัสแห้งแคปซูล casei) แคปซูล casei Lactobacillus ปรากฏเป็นเหมือนเดิมหลังจากที่ การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งหมายถึงไม่ได้รับผลกระทบจากการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง. [00101] นอกเหนือไปจากการตรวจสอบภาพในการอยู่รอดและเติบโตได้ของ casei Lactobacillus ห่อหุ้มแบคทีเรียที่ได้รับการตรวจสอบก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและหลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งตามที่อธิบายไว้ข้างต้นในตัวอย่างที่ 2 ที่สามารถเห็นได้จากรูปที่ 12 ผลดังกล่าวแสดงให้เห็นถึงการอยู่รอดและเติบโตได้ของ Lactobacillus casei แบคทีเรียที่ได้รับผลกระทบจากการทำแห้ง แบบแช่เยือกแข็งที่มีความหมายอย่างเต็มรูปแบบการอยู่รอดและเติบโตได้ถูกหยิบขึ้นมาหลังจากการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง ดังนั้นตัวอย่างที่ 3 ยืนยันประสิทธิภาพและความเหมาะสมของการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการและองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องของการประดิษฐ์นี้. ตัวอย่างที่ 4: การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งของ Bifidobacterium ห่อหุ้ม infantis longum ใช้องค์ประกอบซึ่งประกอบรวมด้วย หางนม, ทรีฮาโลสและกลีเซอรอลเป็นไครโอโพรเทกแทนต์[00102] Bifidobacterium longum infantis เป็นตัวอย่างของแบคทีเรียอย่างเคร่งครัด เซลล์จึงเพาะเลี้ยงภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจนในสื่อ MRS ที่ 37 องศาเซลเซียสและ 50rpm สำหรับในชั่วข้ามคืน Gaspak (BD) ถูกใช้ในการสร้างสภาพแวดล้อมที่ไม่ใช้ออกซิเจนอย่างเข้มงวดในระหว่างการเพาะเลี้ยง. [00103] หลังจากที่ไบฟิโดแบคทีเรียเพาะปลูกถูกห่อหุ้มโดยใช้โซเดียมซัลเฟตเซลลูโลสที่อธิบายไว้ในตัวอย่างที่ 2 และ 3 แต่ภายใต้เงื่อนไขที่ไม่ใช้ออกซิเจน หลังจากที่มีวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนแบคทีเรียที่มีแคปซูลถูกล้างด้วย 3x 50ml สื่อนางสดในขวด 250ml แรกแล้ววางไว้ในหลอดเหยี่ยว 15ml 10 มล. ของสื่อ MRS สด 5ml ของสื่อ MRS ถูกนำออกมาและ 5ml ของกลางเก็บรักษาที่มี (5% นมพร่องมันเนย (w / v), 1% กลีเซอรอล (w / v), 10% (w / v) ทรีฮาโลสในน้ำ ) ถูกเพิ่มเข้ามา แคปซูลถูกบ่มในสารแขวนลอยนี้เป็นเวลา 25 นาทีแล้ว 5ml ของกลางออกไปและแทนที่ด้วย 5ml ของกลางเก็บรักษาความสดใหม่ ขั้นตอนนี้ซ้ำเพิ่มอีก 4 ครั้งจึงเพิ่มสัดส่วนของกลางเก็บรักษาจาก 50% หลังจากที่นอกจากนี้ครั้งแรกของกลางเก็บรักษาเพื่อ 98.5% ในที่สุด. [00104] สุดท้ายแคปซูลจากกลางเก็บรักษาที่ถูกวางลง 15 มลหลอดเหยี่ยวกับ 500u1 ของน้ำการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการแก้ปัญหาที่มี 5% นมพร่องมันเนย, 1% กลีเซอรอลและทรีฮาโลส 10% แคปซูลเหล่านี้ถูกแช่แข็งแล้วในเอทานอล / อาบน้ำน้ำแข็งแห้งและเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส. [00105] ที่สามารถเห็นได้จากรูปที่ 13 ซึ่งแสดงให้เห็นเซลล์ที่ได้รับการห่อหุ้มก่อนและหลังการห่อหุ้ม (13A แสดงรูปแคปซูล วันหนึ่งหลังจากที่ห่อหุ้มก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและแสดงให้เห็นรูป 13B เติมน้ำกลับแห้ง Bifidobacterium longum infantis แคปซูล) ที่ Bifidobacterium longum infantis แคปซูลปรากฏจะน้อยเหมือนเดิมหลังจากที่ freeze- อบแห้ง. [00,106] นอกจากนี้ เพื่อตรวจสอบภาพที่การอยู่รอดและเติบโตได้ห่อหุ้มของเชื้อแบคทีเรีย infantis Bifidobacterium ได้รับการตรวจสอบก่อนการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งและหลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งเป็นที่อธิบายข้างต้นในตัวอย่างที่2 ที่สามารถเห็นได้จากรูปที่ 14 ที่การอยู่รอดและเติบโตได้ของ Bifidobacterium longum infantis ได้รับผลกระทบอย่างใดโดยการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งเป็นรูปที่ 14 แสดงให้เห็นว่าประมาณ 50% ของเชื้อแบคทีเรียที่เป็นที่ทำงานได้หลังการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง แต่ก็เป็นที่เชื่อกันว่าการอยู่รอดและเติบโตได้ฟรี (ไม่ห่อหุ้ม) Bifidobacterium แบคทีเรีย infantis จะต่ำกว่ามาก นอกจากนี้ที่สูงกว่าการอยู่รอดและเติบโตได้สามารถคาดหวังโดยแคปซูลจะแห้งได้อย่างสมบูรณ์แบบในระหว่างการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งกระบวนการ ดังนั้นยังตัวอย่างที่ 4 ยืนยันประสิทธิภาพและความเหมาะสมของการทำแห้งแบบแช่เยือกแข็งวิธีการและองค์ประกอบที่เกี่ยวข้องของการประดิษฐ์นี้. [00107] ที่การ illustratively ประดิษฐ์บรรยายในที่นี้เหมาะสมอาจได้รับการปฏิบัติในกรณีที่ไม่มีองค์ประกอบใด ๆ หรือ องค์ประกอบข้อ จำกัด หรือข้อ จำกัด ไม่เป็นที่เปิดเผยในที่นี้โดยเฉพาะ ดังนั้นสำหรับตัวอย่างเช่นคำว่า "ซึ่งประกอบรวมด้วย", "ที่รวมถึง" ที่มี "ฯลฯ จะต้องอ่านเผล่และไม่ จำกัด . นอกจากคำและสำนวนที่ใช้ในเอกสารฉบับนี้ได้ถูกใช้เป็นแง่ของรายละเอียดและไม่ได้ ข้อ จำกัด และมีความตั้งใจในการใช้งานไม่มีข้อตกลงดังกล่าวและการแสดงออกของความไม่รวมรายการเทียบเท่าใด ๆ ของคุณสมบัติที่แสดงและอธิบายหรือบางส่วนของมัน แต่มันก็เป็นที่ยอมรับว่าการปรับเปลี่ยนต่างๆที่เป็นไปได้ภายในขอบเขตของการประดิษฐ์ข้อถือสิทธิเอ็ด . ดังนั้นจึงควรจะเข้าใจว่าแม้ว่าการประดิษฐ์นี้ได้รับการเปิดเผยโดยเฉพาะที่เป็นแบบอย่างรุรุและคุณสมบัติตัวเลือกการปรับเปลี่ยนและการเปลี่ยนแปลงของการประดิษฐ์ s เป็นตัวเป็นตนเปิดเผยนั้นในที่นี้อาจจะหันไปใช้โดยผู้ที่มีฝีมือในงานศิลปะและที่ดังกล่าว การปรับเปลี่ยนรูปแบบและจะถือว่าเป็นอยู่ในขอบเขตของการประดิษฐ์นี้. [00108] ที่การประดิษฐ์ได้รับการอธิบายในวงกว้างและทั่วไปในที่นี้. แต่ละสายพันธุ์ที่แคบและกลุ่ม subgeneric ตกอยู่ในการเปิดเผยข้อมูลทั่วไปนอกจากนี้ยังเป็นส่วนหนึ่งของการประดิษฐ์ ซึ่งรวมถึงรายละเอียดทั่วไปของการประดิษฐ์ที่มีเงื่อนไขหรือข้อ จำกัด เชิงลบลบเรื่องใดเรื่องจากพืชและสัตว์โดยไม่คำนึงถึงหรือไม่ว่าวัสดุที่พอถูกอ่านโดยเฉพาะในที่นี้. [00109] รุรุอื่น ๆ ที่อยู่ในต่อไปนี้ข้อถือสิทธิ นอกจากนี้การที่มีคุณสมบัติหรือลักษณะของการประดิษฐ์จะมีการอธิบายในแง่ของกลุ่ม Markush ผู้ที่มีฝีมือในงานศิลปะจะรับรู้ว่าการประดิษฐ์นอกจากนี้ยังอธิบายดังนั้นในแง่ของการเป็นสมาชิกของแต่ละบุคคลหรือกลุ่มย่อยของสมาชิกของกลุ่ม Markush
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตัวอย่าง 3 : การทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง Lactobacillus casei โดยใช้องค์ประกอบของเกาะกุมซึ่งประกอบรวมด้วยหางกะทิ และทรีฮาโลสกลีเซอรอลเป็นไครโอโพรเทกแทนต์
[ ] 0096 แช่แข็งของแบคทีเรียโปรไบโอติกจากขวด , Lactobacillus casei ถูกละลาย
ออกจาก - 80 ° C และ 20111 ได้เพิ่มเป็น 50 มิลลิลิตร นางสื่อแบคทีเรียถูก
ต่อมาเลี้ยงค้างคืนที่ 37 ° C เขย่าที่ความเร็วของ 50rpm . วันถัดไป , ความหนาแน่นของแสงของแบคทีเรียวัฒนธรรมถูกกำหนดที่ 600nm ( 0d600 ) บน TECAN อนันต์
m200 . โดยปกติจะเป็น od600 อ่าน 1 สอดคล้องกับเมื่อแบคทีเรียในขั้นตอนการเจริญเติบโตที่ชี้แจง แบคทีเรียควรในการเจริญเติบโตที่ชี้แจงขั้นตอนเมื่อ
3 .[ 0097 ] สำหรับ encapsulation ของแบคทีเรีย 100u1 ของแบคทีเรียที่มี od600 อ่าน 1 ผสมกับโซเดียมเซลลูโลส ซัลเฟต 2ml 1.8% ที่ 0.9% โซเดียมคลอไรด์ เข็ม 5 เข็ม และ 23g ใช้สำหรับกระบวนการ encapsulation . แบคทีเรียวัฒนธรรมผสมกับโซเดียมเซลลูโลส ซัลเฟต และลดลงในการเกิดเจลล้างหน้าอาบน้ำที่มี 1.3 % pdadmac ( 24kda )0.9% โซเดียมคลอไรด์ แคปซูลได้รับอนุญาตให้กลายเป็นเจลใน pdadmac สำหรับ 4mins . ต่อมา 300 มล. เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ LX ( PBS ) คือการเพิ่มและแคปซูลล้าง 8mins 300 มล. ซักโซลูชั่นถูกลบออกแล้ว และ 400ml เพิ่มเติมของพีบีเอส ได้เพิ่มและแคปซูลล้างสำหรับ 4mins เพิ่มเติมล้างในสารละลายแล้วระบาย และอีก 3 x 100 ล้างกับ PBS แล้วล้าง 30ml 3x กับนางสดแสดง แคปซูลถูกโอนให้กับ 250ml ขวด 100ml ของกรวยกับนางสดสื่อ แคปซูลเหล่านี้ถูกเลี้ยงค้างคืนที่ 37 ° C เขย่าที่ความเร็วของ 50rpm .
[ ] 0096 แช่แข็งของแบคทีเรียโปรไบโอติกจากขวด , Lactobacillus casei ถูกละลาย
ออกจาก - 80 ° C และ 20111 ได้เพิ่มเป็น 50 มิลลิลิตร นางสื่อแบคทีเรียถูก
ต่อมาเลี้ยงค้างคืนที่ 37 ° C เขย่าที่ความเร็วของ 50rpm . วันถัดไป , ความหนาแน่นของแสงของแบคทีเรียวัฒนธรรมถูกกำหนดที่ 600nm ( 0d600 ) บน TECAN อนันต์
m200 . โดยปกติจะเป็น od600 อ่าน 1 สอดคล้องกับเมื่อแบคทีเรียในขั้นตอนการเจริญเติบโตที่ชี้แจง แบคทีเรียควรในการเจริญเติบโตที่ชี้แจงขั้นตอนเมื่อ
3 .[ 0097 ] สำหรับ encapsulation ของแบคทีเรีย 100u1 ของแบคทีเรียที่มี od600 อ่าน 1 ผสมกับโซเดียมเซลลูโลส ซัลเฟต 2ml 1.8% ที่ 0.9% โซเดียมคลอไรด์ เข็ม 5 เข็ม และ 23g ใช้สำหรับกระบวนการ encapsulation . แบคทีเรียวัฒนธรรมผสมกับโซเดียมเซลลูโลส ซัลเฟต และลดลงในการเกิดเจลล้างหน้าอาบน้ำที่มี 1.3 % pdadmac ( 24kda )0.9% โซเดียมคลอไรด์ แคปซูลได้รับอนุญาตให้กลายเป็นเจลใน pdadmac สำหรับ 4mins . ต่อมา 300 มล. เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ LX ( PBS ) คือการเพิ่มและแคปซูลล้าง 8mins 300 มล. ซักโซลูชั่นถูกลบออกแล้ว และ 400ml เพิ่มเติมของพีบีเอส ได้เพิ่มและแคปซูลล้างสำหรับ 4mins เพิ่มเติมล้างในสารละลายแล้วระบาย และอีก 3 x 100 ล้างกับ PBS แล้วล้าง 30ml 3x กับนางสดแสดง แคปซูลถูกโอนให้กับ 250ml ขวด 100ml ของกรวยกับนางสดสื่อ แคปซูลเหล่านี้ถูกเลี้ยงค้างคืนที่ 37 ° C เขย่าที่ความเร็วของ 50rpm .
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- POLICIES
- Are you naked
- not that bad, just bad habit , for drink
- i am really because i am clear you marry
- บาท
- ใจดี
- Et qui s'appelorio quezac
- Call jjetrin my dad
- สามแยก
- ฉันกำลังดูหนัง fast 4
- เเบบประเมินความพึงพอใจ
- ก่อนเริ่มการแก้ไขปัญหา
- i think so
- บาท
- มันเป็นการอวดดีอวดรู้ทั้งๆที่ความรู้น้อย
- ฉันหาแล้วแต่หาไม่เจอ
- นี่คือโรงเรียนของฉัน
- 옹박이 태국에서 인기 많아요??
- ฉันผิดตรงไหน
- เราเป็นเพื่อนกันดีมั้ย
- Some families go on a trip.
- ฉันไม่ใช่ผู้หญิงขายตัว
- Waht is your skype ID?
- กลับกี่โมง
