Disc diffusion test (K-B method) an

Disc diffusion test (K-B method) and β-lactamase activity assay
Disc diffusion test (K-B Method) was used for susceptibility test
by following the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)
standards guidelines (detailed procedures are given in the Supplementary Information) and E. coli ATCC 25922 was used as the
positive control. For the β-lactamase activity assay, bacterial
mixtures with different percentages of antibiotic-resistant cells
were diluted to 100-fold. Then 10 μL PopCulture Reagent and 1 μL
of 1 mg/mL lysozyme were added into the 90 μL 100-fold diluted
bacterial cells. After 15 min incubation at the room temperature,
5 μL of 10 mM nitrocefin was added and then incubated at 37 °C
for 3 min. After centrifugation at 10000 rpm for 5 min, 80 μL of the
supernatant was transferred to a 96-well plate and analyzed by a
324 T. Huang et al. / Biosensors and Bioelectronics 80 (2016) 323–330
microplate reader at 490 nm.
2.5. Treatment of the clinical urine samples
Clinical urine samples were collected from Zhongshan Hospital,
Xiamen University. Twelve milliliter of the original specimen was
centrifuged at 500 g for 5 min to remove mammalian cells and
some large particles. The supernatant was centrifuged at
10000 rpm for 5 min and resuspended in 300 μL PBS. Then 100 μL
of the centrifuged clinical samples were dual fluorescent-stained
and analyzed on the HSFCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Β-lactamase กิจกรรมทดสอบและทดสอบแพร่ดิสก์ (วิธี K-B)แผ่นประจุทดสอบ (วิธี K-B) ใช้สำหรับทดสอบความไวต่อตามคลินิกและห้องปฏิบัติการมาตรฐานสถาบัน (CLSI)แนวทางมาตรฐาน (ขั้นตอนโดยละเอียดจะให้ข้อมูลเสริม) และ E. coli ATCC 25922 ถูกใช้เป็นการควบคุมเชิงบวก สำหรับการβ-lactamase กิจกรรมทดสอบ แบคทีเรียส่วนผสมเปอร์เซ็นต์แตกต่างกันของเซลล์ดื้อยาถูกเจือจางไป 100-fold แล้ว 10 μL PopCulture เอเจนต์และ 1 μLของ 1 mg/mL lysozyme การถูกเพิ่มลงใน μL 90 ที่ผสม 100-foldเซลล์แบคทีเรีย หลังจาก 15 นาทีบ่มที่อุณหภูมิห้อง5 μL ของ nitrocefin 10 มม.เพิ่ม และจากนั้น ได้รับการกกที่ 37 ° C3 นาที หลังจากหมุนที่ 10000 rpm 5 นาที μL 80 ของการโอนย้ายไปยังแผ่นดี 96 supernatant และวิเคราะห์โดยการ324 T. หวงร้อยเอ็ด / Biosensors และ Bioelectronics 80 (2016) 323-330อ่าน microplate 490 nm2.5 การรักษาตัวอย่างปัสสาวะทางคลินิกตัวอย่างปัสสาวะทางคลินิกถูกรวบรวมจากโรงพยาบาลจงซานมหาวิทยาลัยเซี่ยเหมิน สิบสองมิลลิเมตรตัวเดิมอย่างถูกเหวี่ยงที่ 500 กรัม 5 นาทีเพื่อเอาเซลล์ที่ไว และอนุภาคบางใหญ่ Supernatant ถูกเหวี่ยงที่10000 รอบต่อนาที 5 นาทีและ resuspended ใน PBS μL 300 แล้ว 100 μLตัวอย่างคลินิกเหวี่ยงถูกคู่ย้อมฟลูออเรสเซนต์และวิเคราะห์ในการ HSFCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แผ่นทดสอบการแพร่กระจาย (KB Method) และβ-lactamase กิจกรรมการทดสอบ
การทดสอบแผ่นกระจาย (วิธี KB) ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบความไวต่อ
โดยทำตามคลินิกและห้องปฏิบัติการ Standards Institute (CLSI)
แนวทางมาตรฐาน (ขั้นตอนอย่างละเอียดจะได้รับในข้อมูลเสริม) และอี . coli ATCC 25922 ถูกใช้เป็น
ควบคุมบวก สำหรับกิจกรรมการทดสอบβ-lactamase แบคทีเรีย
ผสมกับร้อยละที่แตกต่างกันของเซลล์ทนต่อยาปฏิชีวนะ
ที่ถูกปรับลดถึง 100 เท่า จากนั้น 10 ไมโครลิตร PopCulture Reagent และ 1 ไมโครลิตร
1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรไลโซไซม์ที่ถูกเพิ่มเข้ามาใน 90 ไมโครลิตร 100 เท่าเจือจาง
เซลล์แบคทีเรีย หลังจาก 15 นาทีบ่มที่อุณหภูมิห้อง,
5 ไมโครลิตร 10 มิลลิเมตร nitrocefin ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 3 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที 80 ไมโครลิตรของ
สารละลายที่ถูกย้ายไปเป็นแผ่น 96 หลุมและวิเคราะห์โดย
324 ตัน Huang et al, / ไบโอเซนเซอร์และ Bioelectronics 80 (2016) 323-330
อ่าน microplate ที่ 490 นาโนเมตร.
2.5 การรักษาของคลินิกตัวอย่างปัสสาวะ
ตัวอย่างปัสสาวะคลินิกที่ถูกเก็บรวบรวมจาก Zhongshan โรงพยาบาล
มหาวิทยาลัยเซียะเหมิ สิบสองมิลลิลิตรตัวอย่างเดิมถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 500 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อขจัดเซลล์เลี้ยงลูกด้วยนมและ
บางอนุภาคขนาดใหญ่ ใสถูกหมุนเหวี่ยงที่
10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีและ resuspended ใน 300 ไมโครลิตรพีบีเอส แล้ว 100 ไมโครลิตร
ของตัวอย่างทางคลินิกปั่นเป็นคู่เรืองแสงสี
และวิเคราะห์ใน HSFCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การทดสอบการแพร่กระจายแผ่น ( k-b วิธี ) และบีตา - แลคตาเมสกิจกรรมการทดสอบการทดสอบการแพร่กระจายแผ่น ( k-b วิธี ) ใช้ทดสอบความไวตามทางคลินิกและห้องปฏิบัติการสถาบันมาตรฐาน ( ต่าง )แนวทางมาตรฐาน ( ขั้นตอนมีรายละเอียดที่ระบุในข้อมูลเพิ่มเติม ) และ E . coli ATCC 25922 ถูกใช้เป็นการควบคุมในเชิงบวก บีตา - แลคตาเมส สำหรับกิจกรรมโดยแบคทีเรียผสมกับเปอร์เซ็นต์ที่แตกต่างกันของเซลล์ที่ทนต่อยาปฏิชีวนะลดถึง 100 เท่า แล้ว 10 μผม popculture รีเอเจนต์ 1 μ l1 มก. / มล. และไลโซไซม์เป็นเพิ่มเป็น 90 μผม 100 เท่า ทั้งนี้เซลล์แบคทีเรีย . หลัง 15 นาที การบ่มที่อุณหภูมิห้อง ,5 μ l nitrocefin 10 มม. เพิ่มแล้วบ่มที่ 37 ° C3 นาทีหลังการปั่นเหวี่ยงที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาที , 80 μ l ของน่านถูกส่งไป 96 ดีจานและวิเคราะห์โดย324 . Huang et al . ตาม และไบโอ เล็กทรอนิกส์ / 80 ( 2016 ) 323 – 330ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยอ่าน 290 nm .2.5 การรักษาปัสสาวะตัวอย่างทางคลินิกจากการเก็บตัวอย่างปัสสาวะคลินิกโรงพยาบาล Zhongshan ,เซียะเหมิ ) 12 มิลลิลิตรของร่างเดิมคือระดับที่ 500 กรัมเป็นเวลา 5 นาที เอาเฉพาะเซลล์และขนาดใหญ่บางอนุภาค และน่าน เป็นระดับที่10 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีและ resuspended ใน PBS ผม 300 μ . แล้ว 100 μ lของระดับคลินิกจำนวนสองสีเรืองแสงและวิเคราะห์ข้อมูลบน hsfcm