Method 4In this method[24] the cell

Method 4
In this method[24] the cell disruption and the yeast cell wall preparation is achieved with sonication. Another point of this method is that the cell walls and β-glucan are obtained as a supernatant by centrifuging at low gs (500g). Saccharomyces cerevisiae yeast cells are obtained after their growth in Sabouraud dextrose agar containing chloramphenicol (0.005%) / 30°C / 3 days. The preparation of yeast suspension is conducted with 500 mL YPG broth (yeast extract 1% / peptone 2% / glucose 2%) with mild agitation (150 rpm) / 30°C / 48 h. The yeast cells are harvested by centrifugation 4500g / 5 min / 4°C, washed three times and freeze-dried. The cell disruption is conducted by sonication (ice bath / 60% amplitude / 48 min: 2/4 min pulse on/off basis) after preparation of yeast cells in chilled 0.1 M sodium phosphate buffer / pH 7.2. The cell walls are obtained with centrifugation (500g / 2 min) as a supernatant and separated by this way from the intact cells. Then, the cell walls are diluted to 10 mL of sterile distilled water and centrifuged (1000g / 4°C / 20 min), washed three times with sterile distilled water, suspended in the same buffer and then heated for 2.5 min in boiling water for the inactivation of cell endolytic enzymes. The extraction of β-glucan is achieved with NaOH (2% / 90°C / 5 h). The obtained supernatant after centrifugation (3000g / 10 min) is neutralized with 2 M acetic acid and treated with 3 volumes of ethanol for β-glucan precipitation. In a next step, the ethanol-β-glucan complex is dissolved in 3% acetic acid and centrifuged for the removal of proteins. β-Glucan is obtained as a supernatant, neutralized with 2 M NaOH and free-dried. In further steps for more purified fractions of β-glucans, proteins are removed with DEAE chromatography and mannans are removed with affinity chromatography.[24]

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีที่ 4ในวิธีการนี้ [24] ทรัพยเซลล์และการเตรียมผนังเซลล์ยีสต์จะทำได้ ด้วย sonication อีกจุดหนึ่งของวิธีนี้คือการ ที่ผนังเซลล์และβ-กลูแคนได้เป็น supernatant ที่ โดยเหวี่ยงที่ gs ต่ำ (500 กรัม) Saccharomyces cerevisiae ยีสต์เซลล์จะได้รับหลังจากการเติบโตใน Sabouraud เป็นอาหารที่ประกอบด้วย chloramphenicol (0.005%) / 3 วัน 30° C ดำเนินการเตรียมการระงับยีสต์กับซุป YPG 500 มล. (ยีสต์สกัด 1% / peptone 2% / กลูโคส 2%) กับปั่นป่วนรุนแรง (150 รอบต่อนาที) / 30° C 48 ชั่วโมง มีการเก็บเกี่ยวเซลล์ยีสต์ โดยการหมุนเหวี่ยง 4500 g/5 นาที / 4° C ล้าง 3 ครั้ง และชนิดแห้ง ทรัพยเซลล์จะดำเนินการ โดย sonication (น้ำแข็ง / คลื่น 60% / 4 นาที 48 นาที: 2 พัลส์ เปิด/ปิดพื้นฐาน) หลังจากเตรียมของเซลล์ยีสต์ในเย็น 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ / ค่า pH 7.2 ผนังเซลล์จะได้รับจากการหมุนเหวี่ยง (500 กรัม 2 นาที) เป็นการ supernatant และคั่น ด้วยวิธีนี้จากเซลล์เดิม ผนังเซลล์จะเจือจางไป 10 mL ของน้ำกลั่นที่ฆ่าเชื้อ แล้วเหวี่ยง (1000 กรัม / 4° C 20 นาที), ล้าง 3 ครั้ง ด้วยน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อ หยุดการทำงานในบัฟเฟอร์เดียวแล้ว ร้อนสำหรับ 2.5 นาทีในการต้มน้ำเพื่อยกเลิกการเรียกเอนไซม์ endolytic เซลล์ การสกัดของβ-กลูแคนจะประสบความสำเร็จกับ NaOH (2% / 5 h 90° C) Supernatant ได้รับหลังจากหมุนเหวี่ยง (3000 กรัม 10 นาที) neutralized ได้กับกรดอะซิติก 2 ม. และรับการรักษา ด้วย 3 ปริมาณเอทานอลฝนβ-กลูแคน ในขั้นตอนถัดไป คอมเพล็กซ์เอทานอล-β-กลูแคนละลายในกรดอะซิติก 3% แล้วเหวี่ยงสำหรับการกำจัดโปรตีน Β-กลูแคนเป็นรับการ supernatant, neutralized ได้กับ 2 M NaOH และ แห้งฟรี ในการขั้นตอนเพิ่มเติมบริสุทธิ์บางส่วนของβ-glucans โปรตีนจะถูกเอาออก ด้วย DEAE chromatography และ mannans จะถูกเอาออก ด้วยความสัมพันธ์ chromatography [24]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีที่ 4
ในวิธีการนี้ [24] หยุดชะงักมือถือและยีสต์เตรียมผนังเซลล์จะประสบความสำเร็จกับ sonication จุดของวิธีนี้ก็คือการที่ผนังเซลล์และβ-Glucan จะได้รับเป็นสารละลายโดยเหวี่ยงที่ GS ต่ำ (500 กรัม) Saccharomyces cerevisiae เซลล์ยีสต์จะได้รับหลังจากการเจริญเติบโตของพวกเขาใน Sabouraud dextrose agar ที่มี chloramphenicol (0.005%) / 30 ° C / 3 วัน การเตรียมความพร้อมของการระงับยีสต์จะดำเนินการกับ 500 มล YPG น้ำซุป (สารสกัดจากยีสต์ 1% / เปปโตน 2% / เครื่องวัดน้ำตาล 2%) ที่มีการกวนอ่อน (150 รอบต่อนาที) / 30 ° C / 48 ชั่วโมง เซลล์ยีสต์มีการเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง 4500G / 5 นาที / 4 ° C, ล้างสามครั้งและแห้ง การทำลายเซลล์จะดำเนินการโดย sonication (ห้องอาบน้ำน้ำแข็ง / 60% กว้าง / 48 นาที: 2/4 ชีพจรนาที / ปิดพื้นฐาน) หลังจากเตรียมความพร้อมของเซลล์ยีสต์ในแช่เย็น 0.1 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ / ค่า pH 7.2 ผนังเซลล์จะได้รับกับการหมุนเหวี่ยง (500g / 2 นาที) เป็นสารละลายและแยกจากกันโดยวิธีนี้จากเซลล์เหมือนเดิม จากนั้นผนังเซลล์ที่มีการปรับลดถึง 10 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและหมุนเหวี่ยง (1000g / 4 ° C / 20 นาที) ล้างสามครั้งด้วยน้ำกลั่นปลอดเชื้อที่ลอยอยู่ในบัฟเฟอร์เดียวกันและความร้อนแล้ว 2.5 นาทีในน้ำเดือด การใช้งานของเอนไซม์ endolytic เซลล์ การสกัดของβ-Glucan จะประสบความสำเร็จด้วย NaOH (2% / 90 ° C / 5 ชั่วโมง) ใสได้รับหลังจากการหมุนเหวี่ยง (3000G / 10 นาที) เป็นธรรมชาติที่มีกรดอะซิติก 2 เมตรและรับการรักษาที่มี 3 เล่มของเอทานอลสำหรับการตกตะกอนβ-Glucan ในขั้นตอนต่อไปที่มีความซับซ้อนเอทานอลβ-Glucan จะละลายในกรดอะซิติก 3% และหมุนเหวี่ยงสำหรับการกำจัดของโปรตีน เบต้ากลูแคน-จะได้รับเป็นสารละลายที่เป็นกลางกับ 2 M NaOH และฟรีแห้ง ในขั้นตอนต่อไปสำหรับเศษส่วนบริสุทธิ์มากขึ้นของβ-glucans โปรตีนถูกลบออกด้วยดีอีเออีโคและ mannans ถูกลบออกด้วยโครมาเป็นพี่น้องกัน. [24]