Standard protocols were followed fo

Standard protocols were followed for DNA manipulation [26] with enzymes for restriction digests and ligations sourced from Roche Applied Science (Germany). Where applicable, DNA was eluted from agarose gels with the Zymoclean™ Gel Recovery Kit (Zymo Research). The glaA gene was subcloned as an EcoRI-XhoI fragment and the amyA gene as an EcoRI fragment into the corresponding sites of plasmid yBBH1, yielding plasmids yBBH1-AmyA and yBBH1-GlaA, respectively (Figure 1). The ENO1P-GlaA-ENO1T cassette was excised from yBBH1-GlaA as a BamHI-BglII fragment and cloned into the BglII site on pBBH1-AmyA, generating pBBH1-AmyA-GlaA (Figure 1).

The host strains, S. cerevisiae Y294 and S. cerevisiae Mnuα1, were transformed with the recombinant plasmids using electroporation [43] with subsequent selection on SC-URA plates. The presence of the respective amylase genes was verified by PCR amplification with gene-specific primers (Table 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพรโทคอลมาตรฐานได้ตามการบริหารจัดการดีเอ็นเอ [26] มีเอนไซม์ digests จำกัดและ ligations ที่มาจากโรใช้วิทยาศาสตร์ (เยอรมนี) เกี่ยวข้อง มี eluted ดีเอ็นเอจากเจ agarose กับชุดอุปกรณ์กู้เจของ™ Zymoclean (Zymo วิจัย) ยีน glaA เป็น subcloned เป็นส่วน EcoRI XhoI และ amyA ยีนเป็นส่วน EcoRI มีเป็นเว็บไซต์ที่เกี่ยวข้องของ plasmid yBBH1 ผลผลิต plasmids yBBH1 AmyA และ yBBH1-GlaA ตามลำดับ (รูปที่ 1) เทป ENO1P-GlaA-ENO1T excised จาก yBBH1-GlaA เป็นส่วน BamHI-BglII และโคลนเข้าไปในเว็บไซต์ BglII ใน pBBH1 AmyA การสร้าง pBBH1-AmyA-GlaA (รูปที่ 1) .

สายพันธุ์โฮสต์ S ได้ cerevisiae Y294 และ S. cerevisiae Mnuα1 ถูกแปลง ด้วย plasmids recombinant electroporation [43] ด้วยตัวเลือกต่อมาในแผ่น SC URA ของยีนนั้น ๆ amylase ถูกตรวจสอบ โดยขยาย PCR กับยีนเฉพาะไพรเมอร์ (ตาราง 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอลมาตรฐานตามมาสำหรับการจัดการดีเอ็นเอ [26] ด้วยเอนไซม์เพื่อย่อยสลายและข้อ จำกัด ligations ที่มาจากโรชวิทยาศาสตร์ประยุกต์ (เยอรมนี) ที่สามารถใช้งานได้ดีเอ็นเอถูกชะจากเจล agarose กับชุด Zymoclean ™เจลการกู้คืน (Zymo วิจัย) ยีน glaA ถูก subcloned เป็นส่วน EcoRI-XhoI และยีน amyA เป็นส่วน EcoRI เข้าไปในเว็บไซต์ที่สอดคล้องกันของพลาสมิด yBBH1 ยอมพลาสมิด yBBH1-AmyA และ yBBH1-GlaA ตามลำดับ (รูปที่ 1) เทป ENO1P-GlaA-ENO1T พอร์จาก yBBH1-GlaA เป็นส่วน BamHI-BglII และโคลนเข้าไปในเว็บไซต์ BglII บน pBBH1-AmyA สร้าง pBBH1-AmyA-GlaA (รูปที่ 1) สายพันธุ์โฮสต์, S. cerevisiae และ Y294 S. cerevisiae Mnuα1ถูกเปลี่ยนด้วยพลาสมิดสายผสมโดยใช้ electroporation [43] ที่มีให้เลือกตามมาบนจาน SC-URA การแสดงตนของยีนอะไมเลสที่เกี่ยวข้องได้รับการตรวจสอบโดยการขยาย PCR ด้วยไพรเมอร์ยีนที่เฉพาะเจาะจง (ตารางที่ 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรโตคอลมาตรฐานสำหรับการใช้ดีเอ็นเอ [ 26 ] กับเอนไซม์สำหรับย่อย และการ ligations ที่มาจากวิทยาศาสตร์ประยุกต์ โรช ( เยอรมนี ) ที่เกี่ยวข้อง ตัวอย่างดีเอ็นเอจากเจล , เจลกับ zymoclean ™ Recovery Kit ( zymo วิจัย )การ glaa ยีนเป็นชิ้นส่วนของ xhoi เบสและยีน amya เป็นด้วยส่วนในเว็บไซต์ที่เกี่ยวข้องของพลาสมิด ybbh1 หยุ่น ) และ ybbh1 amya ybbh1 glaa ตามลำดับ ( รูปที่ 1 ) การ eno1p-glaa-eno1t เทปถูกตัดจาก ybbh1 จำเพาะ BamHI glaa เป็น bglii และโคลนเข้าไปใน bglii เว็บไซต์บน pbbh1 amya สร้าง pbbh1 amya glaa ( รูปที่ 1 ) .

เจ้าบ้านสายพันธุ์S . cerevisiae y294 และ S . cerevisiae MNU α 1 ถูกเปลี่ยนด้วยการใช้ electroporation พลาสมิดพาหะ [ 43 ] เลือกตามมาใน sc-ura จาน การปรากฏตัวของยีนอะไมเลสที่เกี่ยวข้องถูกยืนยันโดยวิธี PCR ไพรเมอร์แบบเฉพาะเจาะจงกับยีน ( ตารางที่ 3 )