3.2. Multiplex PCR using truncated

3.2. Multiplex PCR using truncated primers As a strategy to increase the sensitivity of multiplex PCR, a set of truncated primers were designed. Under the experimental conditions described by Matsunaga et al. (1999), the pork, beef, chicken and mutton DNA could be identified solely by multiplex PCR using the shortened primers, and the size of amplified fragments were as expected. Yet, when beef DNA was mixed with other template, the beef-specific band was not observed (Fig. 3). Subsequently, we adjusted the ratio of primers, but beef could not been detected in the mixture even when the concentration of B2 was higher than SIM2 (figure not shown). A temperature gradient PCR was performed to seek the appropriate annealing temperature. However, beef was still not detected in the mixture when the annealing temperature was lowered to 49 _C. Simultaneously, a number of non-specific amplifications were observed (figure not shown). So, the identical efficiency on different templates could not been optimized using these truncated primers. Moreover, according to the lightness of bands, the sensitivity of multiplex PCR was not markedly improved.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.2 multiplex PCR โดยใช้ไพรเมอร์ถูกตัดทอนเป็นกลยุทธ์ในการเพิ่มความไวของ multiplex PCR, ชุดของไพรเมอร์ถูกตัดทอนได้รับการออกแบบ ภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่อธิบายโดย Matsunaga ตอ​​ัล (1999), เนื้อหมู, เนื้อไก่และเนื้อแกะ dna สามารถระบุได้ แต่เพียงผู้เดียวโดย multiplex PCR โดยใช้ไพรเมอร์สั้นลงและขนาดของชิ้นส่วนขยายได้ตามที่คาดไว้ ยังเมื่อ dna เนื้อผสมกับแม่แบบอื่น ๆ วงดนตรีเนื้อเฉพาะที่ไม่ได้สังเกต (รูปที่ 3) ต่อมาเราปรับอัตราส่วนของไพรเมอร์ แต่เนื้อไม่สามารถถูกตรวจพบในส่วนผสมถึงแม้ความเข้มข้นของ b2 สูงกว่า SIM2 (คิดไม่แสดง) อุณหภูมิ pcr ลาดได้ดำเนินการที่จะแสวงหาการหลอมอุณหภูมิที่เหมาะสม อย่างไรก็ตามเนื้อก็ยังคงตรวจไม่พบในส่วนผสมเมื่ออุณหภูมิการหลอมที่ถูกลดลงไป 49 _c พร้อมกันจำนวน amplifications ไม่เฉพาะถูกสังเกตเห็น (ภาพที่ไม่แสดง) ดังนั้นที่มีประสิทธิภาพเหมือนกันกับแม่แบบที่แตกต่างกันอาจจะไม่ได้รับการปรับปรุงโดยใช้ไพรเมอร์เหล่านี้ถูกตัดทอน นอกจากนี้ตามความสว่างของวงที่ความไวของ multiplex PCR ไม่ได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้นอย่างเห็นได้ชัด.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.2 การ multiplex PCR ที่ใช้ไพรเมอร์ตัดเป็นกลยุทธ์เพื่อเพิ่มความไวของ multiplex PCR ชุดไพรเมอร์ตัดถูกออกแบบ ภายใต้เงื่อนไขการทดลองที่อธิบายไว้โดย Matsunaga et al. (1999), เนื้อหมู เนื้อ ไก่ และ mutton ดีเอ็นเอสามารถระบุได้ ด้วย multiplex PCR โดยใช้ไพรเมอร์ย่อเท่านั้น และขนาดของชิ้นส่วนเอาต์ได้ตามที่คาดไว้ ยัง เมื่อดีเอ็นเอเนื้อถูกผสมกับต้นอื่น ๆ วงดนตรีเฉพาะเนื้อถูกไม่สังเกต (Fig. 3) ในเวลาต่อมา เราปรับอัตราส่วนของไพรเมอร์ แต่เนื้ออาจไม่ถูกตรวจพบในส่วนผสมได้เมื่อความเข้มข้นของ B2 สูงกว่า SIM2 (ไม่แสดงรูป) ทำ PCR อุณหภูมิไล่หาอุณหภูมิหลอมที่เหมาะสม อย่างไรก็ตาม เนื้อยังไม่พบในส่วนผสมเมื่ออุณหภูมิหลอมถูกลดลงถึง 49 _C พร้อมกัน จำนวนเจาะจง amplifications สุภัค (ไม่แสดงรูป) ดังนั้น ประสิทธิภาพเหมือนกับแม่ไม่ได้เหมาะใช้ไพรเมอร์เหล่านี้ตัดได้ นอกจากนี้ ตามความสว่างของวง อย่างเด่นชัดคือไม่สามารถทำการปรับปรุงความไวของ multiplex PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.2 . มัลติเพล็กซ์ pcr โดยใช้ primers ถูกตัดให้สั้นลงเป็นกลยุทธ์ที่จะนำไปสู่การเพิ่มระดับความไวที่ตั้งของ pcr แบบมัลติเพล็กซ์ของ primers ถูกตัดให้สั้นลงเป็นได้รับการออกแบบ ภายใต้ เงื่อนไขทดลองที่อธิบายไว้โดย matsunaga et al . ( 1999 )ไก่เนื้อหมูเนื้อวัวเนื้อแกะและดีเอ็นเอไม่สามารถระบุได้แต่เพียงผู้เดียวโดย pcr แบบมัลติเพล็กซ์โดยใช้ primers สั้นลงและขนาดของเศษแอมพลิฟายก็คาดว่าจะเป็น ยังไม่เมื่อดีเอ็นเอเนื้อถูกนำไปผสมกับเทมเพลตอื่นๆคลื่นความถี่เนื้อวัว - เฉพาะที่ไม่ได้สังเกตเห็น(รูปที่ 3 ) ต่อมาเราได้ปรับสัดส่วนของ primers แต่เนื้อไม่สามารถรับการตรวจพบในแบบของการผสมผสานที่ได้เมื่อความเข้มข้นของ B 2 จะสูงขึ้นกว่าซิมการ์ด 2 (รูปที่ไม่มีใน ภาพ ประกอบ) การไล่ระดับสีที่ อุณหภูมิ pcr ได้ดำเนินการเพื่อหา annealing อุณหภูมิ ที่เหมาะสม แต่ถึงอย่างไรก็ตามเนื้อวัวไม่ตรวจพบในแบบของการผสมผสานที่เมื่อ อุณหภูมิ annealing ลงใน 49 _c. พร้อมกันจำนวนของ amplifications ไม่ใช่เฉพาะเป็น(รูปที่ไม่มีใน ภาพ ประกอบ) ดังนั้นจึงมี ประสิทธิภาพ เหมือนกันในเทมเพลตต่างๆไม่สามารถรับการปรับแต่งโดยใช้ primers เหล่านี้ถูกตัดให้สั้นลง ยิ่งไปกว่านั้นตามน้ำหนักเบาเพื่อความคล่องตัวของคลื่นความถี่ความไวของ pcr แบบมัลติเพล็กซ์ไม่ได้อย่างชัดเจนมากขึ้น.