Salmonella typhi determination usin

Salmonella typhi determination using voltammetric amplification
of nanoparticles: A highly sensitive strategy for metalloimmunoassay
based on a copper-enhanced gold label

A highly sensitive electrochemical amplification immunoassay for Salmonella typhi (S. typhi) determination
has been developed for the first time by using a copper-enhanced gold nanoparticle label coupled with
anodic stripping voltammetry. Monoclonal antibodies for S. typhi were first immobilized on polystyrene
microwells and then captured by S. typhi bacteria. After an immunoreaction occurred, a polyclonal,
antibody–colloidal gold conjugate was added to bind to the S. typhi bacteria. Next, a copper-enhancer
solution containing ascorbic acid and copper (II) sulfate was added into the polystyrene microwells. The
ascorbic acidwas employed to reduce the copper (II) ions to copper (0), whichwas subsequently deposited
onto the gold nanoparticle tags. After the copperwas dissolved in nitric acid, the released copper ionswere
detected by anodic stripping voltammetry. The amount of deposited copper was related to the amount
of gold nanoparticle tag present, which was controlled by the amount S. typhi attached to the polyclonal
antibody–colloidal gold conjugate. Therefore, the anodic stripping peak current was linearly dependent
on the S. typhi concentration over concentration range of 1.30×102 cfu/mL to 2.6×103 cfu/mL in a logarithmic
plot, with a detection limit as low as 98.9 cfu/mL. The influences of the relevant experimental
variables, such as the concentration of copper and the reaction time of S. typhi with antibody, were investigated.
We also successfully applied this method to determine the presence of S. typhi in human serum.
Our results are a step towards developing more sensitive and reliable nanoparticle immunoassays.
1. Introduction
Typhoid fever is a serious problem for the public health of both
underdeveloped and developing countries. It is a bacterial illness
causedby Salmonella typhi (S. typhi), also knownas Salmonella enterica
serotype Typhi, a Gram-negative rod found only in humans.
Each year, around 16 million incidences of typhoid are reported
worldwide, resulting in an estimated 600,000 deaths [1,2]. The
transmission of typhoid fever may occur through several pathways,
such as by contact with infected individuals and by eating
food or by drinking water that is contaminated with typhoid bacteria.
Following ingestion, the bacteria spread from the intestine
via the bloodstream to the intestinal lymph nodes and other areas
of the body where they multiply. The symptoms of this illness
are characterized by the sudden onset of sustained fever, severe
headache, loss of appetite, and either constipation or mild diarrhea.
Samples of urine or blood are used to check the presence of S.
typhi, which is the only way to ensure that the observed illness is
typhoid fever [3]. Therefore, the determination of S. typhi in urine
or blood plays an important role in clinical research and diagnosis
of typhoid fever. Furthermore, a person who recovers from typhoid
fevermay still become an asymptomatic carrier who can infect others.
Thus, the level of S. typhi in the patient’s urine or blood after
recovery should be continuously monitored in order to control the
spread of this epidemic disease. Classical methods are usually used
to detect S. typhi, including culturing [4,5], serological methods,
such as slide agglutination and the Widal test [6], and polymerase
chain reaction (PCR) [7,8]. Even though these methods can provide
highly sensitive results for both qualitative and quantitative analysis,
they are quite labor- and time-intensive to perform due to the
pre-enrichment, isolation, and amplification steps of the bacterial
cells.
With the above-mentioned drawbacks, efforts to develop a
method for S. typhi determination with increased sensitivity and
selectivity and a reduction in analysis time have been proposed.
Currently, alternative methods for biological molecular analysis
are enzyme immunoassay [9,10], surface plasmon resonance [11],
and electrochemical immunoassay [12–14]. In particular, the use
of electrochemical immunoassay has attracted considerable interest
for S. typhi determination because of its inherent simplicity,
high sensitivity, inexpensive instrumentation, and miniaturization.
Although this method has a low detection limit and could be used
in the diagnosis of typhoid fever, a sensitive and rapid method for
analyzing and obtaining important information about the effectiveness
of therapy, follow-up treatments, the epidemic disease, and
protection is still needed. With the development of nanotechnology,
various nanoparticles [15,16] and nano-quantum dots [17,18]
have been used as labels to enhance the sensitivity of the electrochemical
immunoassay technique. Amplified electrochemical
detection of biological molecules was achieved by the dissolution
of the metallic nanoparticles and by recording the subsequent electrochemical
stripping of the dissolved ions. Gold nanoparticles act
as a class of labels with many unique features, such as optical, electronic,
and catalytic properties, that have been previously explored
for potential applications in biomolecular detection. Based on these
advantages, colloidal gold was used as an electrochemical marker
or catalytic label for nanoparticle enlargement in order to elevate
the sensitivity of the bioassay.
Recently, copper, silver, and gold-enhanced colloidal gold have
been reported for immunoglobin G (IgG) determination, which
is the model of electrochemical immunoassay with low detection
limits ranged from 1.0 ng/mL to 0.25 pg/mL [19–21]. The
metal-enhanced colloidal gold electrochemical stripping metalloimmunoassay
combines the high sensitivity of stripping metal
analysis with the remarkable signal amplification resulting from
the catalytic precipitation of metals onto the gold nanoparticles
[21–23]. Among these metals, the copper-enhanced protocol
is better than the other metal-enhancing protocols because the
copper-enhancer solution, which contains ascorbic acid and copper
sulphate, is easy to prepare and preserve. Furthermore, the copper
determination by anodic stripping voltammetry is simple, and
highly sensitive. Willner and co-workers also applied the catalytic
deposition of copper on gold nanoparticles forNADHdetection [24].
However, metal-enhanced colloidal gold has not been previously
applied to the detection of bacterial cells in real samples, especially
for the detection of S. typhi. Therefore,we have employed the
electrochemical strippingmetalloimmunoassay based on a copperenhanced
gold nanoparticle label for the determination of S. typhi in
real samples for the very first time, which will be useful in the diagnosis,
follow-up treatment, and controlling in advance the epidemic
disease of typhoid fever.
In thiswork, our ultimate aimwas to develop an electrochemical
metalloimmunoassay based on copper-enhanced gold nanoparticle
label for S. typhi determination in real samples with a low limit
of detection, high accuracy, and fast analysis time. The details of
the optimization and the excellent performance of our proposed
method are presented in the following sections.
2. Experimental
2.1. Instrumentation
The stripping voltammograms were recorded using an Autolab
Potentiostat 30 (Metrohm, Switzerland) with a three-electrode system.
A glassy-carbon (GC) electrode (Bioanalytical System Inc., area
0.07 cm2) was used as the working electrode. Prior to use, the GC
electrode was pretreated by sequential polishing with 1m and
0.3m of alumina/water slurries on felt pads, followed by rinsing
with deionized water in order to remove the alumina impurities.
A platinum wire and Ag/AgCl with a salt bridge were used as the
counter and reference electrodes, respectively. The electrochemical
equipmentwas housed in a Faraday cage to reduce electronic noise.
2.2. Materials and methods
The polystyrene, 96-well, microtiter plates (high-binding ELISA
plates) were purchased from Ronbio (Shanghai, China). Polyclonal
and monoclonal rabbit antibodies for polysaccharides of
S. typhi O901 and S. typhi were obtained from Siriraj Hospital.
Hydrogen tetrachloroaurate (III) and albumin bovine serum
(BSA) were obtained from the Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO).
Nitric acid (65%), sodium chloride, sodium dihydrogen phosphate,
disodium hydrogen phosphate, sodium carbonate, sodium bicarbonate,
sodium citrate, copper (II) sulfate, and ascorbic acid were
obtained from Merck (Germany).
The coating buffer for the microwells was 0.05M
NaHCO3–Na2CO3 (pH 9.6). The incubation and washing buffer
consisted of 0.01MNaH2PO4–Na2HPO4 (pH 7.4) and 0.15Msodium
chloride. The copper-enhancer solution was made from a 1:1 (v/v)
ratio of 0.10M ascorbic acid and 0.2M copper (II) sulfate. All of
the solutions were prepared using Milli-Q 18M water (Millipore
purification system).
2.3. Preparation of the antibody–colloidal gold conjugate
2.3.1. Preparation of gold nanoparticles
The gold nanoparticles were prepared according to the method
reported in Refs. [19,25] with slight modifications. Briefly, 1mL
of 1% HAuCl4 solution was mixed with 100mL of doubly distilled
water and boiled under vigorous stirring. Then, 2.5mLof 1% sodium
citrate was added into solution under continuous heating and stirring
for 15min until the color of solution changed to wine red. The
colloidal solution was left to cool at room temperature under stirring
and was later stored in dark bottles at 4 ◦C. The solution of
colloidal gold particles was characterized by a UV–vis spectrophotometer
and a transmission electron microscope (TEM).
2.3.2. Antibody–colloidal gold conjugate
The amount of coating antibody (polyclonal rabbit antibody for
polysaccharides of S. typhi O901) on the surface of the gold nanoparticles
was optimized from 75mg/L to 1200 mg/L. Solutions were
prepared from 15,000 mg/L stock solutions of the rabbit antibody
to S. typhi. An appropriat

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนด typhi สายใช้ขยาย voltammetric
ของเก็บกัก: กลยุทธ์มีความไวสูงสำหรับ metalloimmunoassay
ตามป้ายทองเพิ่มทองแดง

immunoassay ขยายไฟฟ้าสำคัญมากสำหรับการกำหนดระดับ typhi (S. typhi)
ได้รับการพัฒนาสำหรับครั้งแรก โดยใช้ป้ายชื่อเพิ่มทองแดง nanoparticle ทองควบคู่กับ
voltammetry ในการปอก anodic แอนตี้ monoclonal สำหรับ S. typhi แรกถูกตรึงบนโฟม
microwells และจากนั้น บันทึก โดยแบคทีเรีย S. typhi หลังจาก immunoreaction, polyclonal,
เพิ่มค่าสังยุคทอง colloidal – แอนติบอดีเพื่อผูกเข้า S. typhi แบคทีเรีย ถัดไป ทองแดงเพิ่ม
โซลูชันที่ประกอบด้วยกรดแอสคอร์บิคและทองแดง (II) ซัลเฟตถูกเพิ่มเข้าไปใน microwells โฟม ใน
acidwas แอสคอร์บิคลูกจ้างเพื่อลดประจุ (II) ทองแดงทองแดง (0), whichwas มาฝาก
บนแท็ก nanoparticle ทอง หลังจาก copperwas การละลายในกรดไนตริก ionswere ทองแดงออก
พบ โดย voltammetry ปอก anodic จำนวนทองที่ฝากทั้งหมดเกี่ยวข้องกับยอด
ของ nanoparticle ทอง ป้ายอยู่ ซึ่งถูกควบคุม โดยจำนวน S. typhi แนบกับแบบ polyclonal
แอนติบอดี-colloidal ค่าสังยุคทอง ดังนั้น ค stripping anodic ปัจจุบันเป็นอิสระเชิงเส้น
ในความเข้มข้น S. typhi ช่วงความเข้มข้นของ 1.30 × 102 cfu/mL ไป 2.6 × 103 cfu/mL ในการลอการิทึม
พล็อต มีการตรวจสอบขีดจำกัดต่ำสุด 98.9 cfu/mL การอิทธิพลเกี่ยวข้องทดลอง
ตัวแปร ความเข้มข้นของทองแดงและเวลาตอบสนองของ S. typhi มีแอนติบอดี ถูกสอบสวน
เรายังนำไปใช้วิธีการนี้จะกำหนดสถานะของ S. typhi ในมนุษย์เซรั่ม
ผลของเราจะก้าวพัฒนาขึ้นมีความสำคัญ และความน่าเชื่อถือ nanoparticle immunoassays
1. แนะนำ
ไทฟอยด์เป็นปัญหาสาธารณสุขของทั้งสองที่รุนแรง
ธรรมชาติ และพัฒนาประเทศ เป็นโรคแบคทีเรีย
typhi ซัล causedby (S. typhi), ยัง knownas ซัล enterica
serotype Typhi ร็อดแบคทีเรียแกรมลบที่พบเฉพาะในมนุษย์
แต่ละปี incidences ประมาณ 16 ล้านของรากสาดรายงาน
ทั่วโลก ผลในการตาย 600000 ประมาณ [1, 2]
ส่งไข้รากสาดน้อยอาจเกิดขึ้นผ่านหลายหลัก,
โดยติดต่อกับบุคคลที่ติดเชื้อ และกินโดย
อาหาร หรือน้ำดื่มที่ปนเปื้อน ด้วยแบคทีเรียรากสาด.
ต่อกิน แบคทีเรียที่แพร่กระจายจากลำไส้
ผ่านทางกระแสเลือดกับโหนดน้ำเหลืองลำไส้และพื้นที่อื่น ๆ
ของร่างกายที่จะคูณได้ อาการของโรคนี้
ลักษณะ โดยเริ่มมีอาการฉับพลันของ sustained ไข้ รุนแรง
ปวด สูญเสียความอยาก อาหาร และท้องผูก หรือท้องเสียไม่รุนแรง.
ตัวอย่างปัสสาวะหรือเลือดใช้ในการตรวจสอบสถานะของ S.
typhi ซึ่งเป็นวิธีเดียวที่จะให้เจ็บป่วยพบว่า
ไทฟอยด์ [3] ดังนั้น ความมุ่งมั่นของ S. typhi ในปัสสาวะ
หรือเลือดมีบทบาทสำคัญในการวิจัยทางคลินิกและการวินิจฉัย
ของไข้ไทฟอยด์ นอกจากนี้ บุคคลที่กู้คืนจากรากสาด
fevermay ยังคงเป็น บริษัทขนส่งที่แสดงอาการผู้ติดเชื้ออื่น ๆ
ดัง ระดับของ S. typhi ในปัสสาวะของผู้ป่วยหรือเลือดหลังจาก
กู้คืนควรมีติดตามอย่างต่อเนื่องเพื่อควบคุม
แพร่กระจายของโรคนี้ติดต่อ มักจะใช้วิธีคลาสสิ
สืบ S. typhi รวม culturing [4,5], วิธีชุก,
agglutination ภาพนิ่ง และการทดสอบ Widal [6], และพอลิเมอเรส
ปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) [7,8] แม้ว่าวิธีการเหล่านี้สามารถให้
ผลความไวสูงสำหรับการวิเคราะห์ทั้งเชิงคุณภาพ และเชิงปริมาณ,
จะค่อนข้างแรง และเวลามากเนื่องการการ
ก่อนเติมเต็ม แยก และขั้นตอนการขยายของแบคทีเรีย
เซลล์
กับข้อเสียดังกล่าว ความพยายามที่จะพัฒนาเป็น
วิธีสำหรับการกำหนด S. typhi มีความไวเพิ่มขึ้น และ
ใวและลดเวลาการวิเคราะห์ได้รับการเสนอชื่อ
ปัจจุบัน วิธีอื่นสำหรับการวิเคราะห์โมเลกุลชีวภาพ
มีเอนไซม์ immunoassay [9,10], พื้นผิวการสั่นพ้อง plasmon [11],
และไฟฟ้า immunoassay [12-14] โดยเฉพาะ ใช้
ของไฟฟ้า immunoassay มีดึงดูดสนใจมาก
สำหรับ S. typhi กำหนดเนื่องจากความเรียบง่ายโดยธรรมชาติ,
ความไวสูง เครื่องมือวัดราคาไม่แพง ก miniaturization
ถึงแม้ว่าวิธีการนี้มีขีดจำกัดต่ำสุดที่ตรวจสอบ และสามารถใช้
ในการวินิจฉัยไข้ไทฟอยด์ วิธีการอย่างรวดเร็ว และมีความสำคัญสำหรับ
วิเคราะห์ และได้รับข้อมูลสำคัญเกี่ยวกับประสิทธิภาพ
บำบัด ติดตามผลการรักษา โรคเรื้อรัง และ
ยังคงต้องป้องกัน กับการพัฒนาของนาโนเทคโนโลยี,
ต่าง ๆ เก็บกัก [15,16] และจุดควอนตัมนาโน [17,18]
ถูกใช้เป็นป้ายชื่อเพื่อเพิ่มความไวของการไฟฟ้า
เทคนิค immunoassay ขยายไฟฟ้า
ตรวจหาโมเลกุลชีวภาพสำเร็จ โดยยุบ
เก็บกักโลหะ และ ตามบันทึกการต่อไฟฟ้า
ปอกของประจุที่ละลาย ทำหน้าที่เก็บกักทอง
เป็นคลาสของป้ายชื่อมีหลายคุณลักษณะเฉพาะ เช่นแสง อิเล็กทรอนิกส์,
และ คุณสมบัติตัวเร่งปฏิกิริยา ที่ได้รับก่อนหน้านี้อุดม
สำหรับโปรแกรมประยุกต์ที่มีศักยภาพในตรวจวทคร ๕๐๘ ตามเหล่านี้
ประโยชน์ colloidal ทองถูกใช้เป็นเครื่องหมายการไฟฟ้า
หรือป้ายชื่อตัวเร่งปฏิกิริยาสำหรับขยาย nanoparticle เพื่อยกระดับพันธมิตร
ความไวของ bioassay
ล่า ทองแดง เงิน และทองเพิ่มทอง colloidal มี
การรายงานสำหรับการกำหนด immunoglobin G (IgG) ซึ่ง
เป็นรูปแบบของไฟฟ้า immunoassay มีตรวจจับต่ำ
จำกัดอยู่ในช่วง 10 ng/mL ให้ pg 0.25 mL [19 – 21] ใน
เพิ่มโลหะ colloidal ทองไฟฟ้าปอก metalloimmunoassay
รวมความไวสูงของปอกโลหะ
มีขยายสัญญาณที่โดดเด่นที่เป็นผลจากการวิเคราะห์
ฝนตัวเร่งปฏิกิริยาโลหะบนเก็บกักทอง
[21-23] ระหว่างนี้โลหะ โพรโทคอทองแดงเพิ่ม
ดีกว่าการเพิ่มโลหะโพรโทคอลอื่น ๆ เนื่องจาก
โซลูชันเพิ่มทอง ซึ่งประกอบด้วยกรดแอสคอร์บิคและทองแดง
ซัลเฟต จะง่ายต่อการเตรียม และเก็บรักษา นอกจากนี้ ทองแดง
กำหนด โดย voltammetry ปอก anodic ได้ง่าย และ
ความไวสูง Willner และเพื่อนร่วมงานยังใช้ตัวเร่งปฏิกิริยาที่
สะสมของทองแดงกับทองเก็บกัก forNADHdetection [24] .
อย่างไรก็ตาม เพิ่มโลหะทอง colloidal ได้รับก่อนหน้านี้
กับการตรวจพบเซลล์แบคทีเรียในตัวอย่างแท้จริง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง
S. typhi ที่ตรวจ ดังนั้น เรามีพนักงาน
strippingmetalloimmunoassay ไฟฟ้าตาม copperenhanced
nanoparticle ทองป้ายชื่อสำหรับการกำหนดของ S. typhi ใน
ตัวอย่างแท้จริงเป็นครั้งแรก ซึ่งจะเป็นประโยชน์ในการวินิจฉัย,
ติดตามผลการรักษา และการควบคุมการระบาดล่วงหน้า
โรคของไข้ไทฟอยด์
ใน thiswork, aimwas ของเราที่ดีที่สุดในการพัฒนาการไฟฟ้า
metalloimmunoassay ตาม nanoparticle ทองเพิ่มทองแดง
ป้ายชื่อสำหรับ S. typhi กำหนดในตัวอย่างจริงที่มีวงเงินต่ำ
ตรวจ ความแม่นยำสูง และการวิเคราะห์อย่างรวดเร็วเวลานั้น รายละเอียดของ
การเพิ่มประสิทธิภาพและประสิทธิภาพที่ดีเยี่ยมของเราเสนอ
วิธีแสดงในต่อไปนี้ส่วน
2 ทดลอง
2.1 เครื่องมือ
stripping voltammograms ถูกบันทึกไว้โดยใช้การ Autolab
Potentiostat 30 (Metrohm สวิตเซอร์แลนด์) กับระบบไฟฟ้า 3 แบบ.
ไฟฟ้าฟิตคาร์บอน (GC) (Bioanalytical ระบบ Inc. ตั้ง
0.07 cm2) ใช้เป็นอิเล็กโทรดทำงาน ก่อนที่จะใช้ GC
อิเล็กโทรดถูก pretreated โดยขัดกับ 1 เมตรตามลำดับ และ
0.3 m ของ slurries อลูมินา/น้ำบนแผ่นสักหลาด ตาม ด้วยล้าง
น้ำ deionized เพื่อเอาสิ่งสกปรกอลูมินาออก
ลวดแพลทินัมและ Ag/AgCl กับสะพานเกลือถูกใช้เป็น
เคาน์เตอร์ และอ้างอิงหุงต ตามลำดับ การไฟฟ้า
equipmentwas ในกรงฟาราเดย์ลดสัญญาณรบกวนทางอิเล็กทรอนิกส์
2.2. วัสดุและวิธีการ
แผ่นโฟม 96- ดี microtiter (ELISA ผูกสูง
แผ่น) ซื้อจาก Ronbio (เซี่ยงไฮ้ ประเทศจีน) Polyclonal
และแอนตี้กระต่ายโมโนสำหรับ polysaccharides ของ
S. typhi O901 และ S. typhi ได้รับมาจากศิริราชพยาบาล
serum
(BSA) วัว albumin และไฮโดรเจน tetrachloroaurate (III) ได้รับมาจาก บริษัทเคมีของซิก (St. Louis, MO) .
กรดไนตริก (65%), โซเดียมคลอไรด์ โซเดียมไดไฮโดรเจน ฟอสเฟต,
หัวไฮโดรเจนฟอสเฟต โซเดียมคาร์บอเนต โซเดียมไบ คาร์บอเนต,
โซเดียมซิเตรต ทองแดง (II) ซัลเฟต และกรดแอสคอร์บิค
รับจากเมอร์ค (เยอรมนี) .
บัฟเฟอร์เคลือบสำหรับ microwells มี 0.05M
NaHCO3 – Na2CO3 (pH 9.6) คณะทันตแพทยศาสตร์และล้างบัฟเฟอร์
ประกอบด้วย 0.01MNaH2PO4-Na2HPO4 (pH 7.4) และ 0.15Msodium
คลอไรด์ โซลูชันเพิ่มทองแดงทำจากแบบ 1:1 (v/v)
อัตราส่วนของกรดแอสคอร์บิค 0.10M และ 0.2 M ทองแดง (II) ซัลเฟต ทั้งหมด
โซลูชั่นถูกเตรียมการใช้ Q น้ำ 18M (มาก
ระบบ) .
2.3 เตรียมค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal
2.3.1 เตรียมเก็บกักทอง
เก็บกักทองถูกจัดเตรียมตามวิธี
รายงานใน Refs [1925] มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ 1mL
1% HAuCl4 โซลูชันถูกผสมกับ 100mL ของสองเหตุการณ์กลั่น
น้ำ และต้มภายใต้คึกคักกวน แล้ว 2.5mLof 1% โซเดียม
ซิเตรตถูกเพิ่มลงในโซลูชันภายใต้ความร้อน และกวนต่อเนื่อง
สำหรับ 15 นาทีจนกว่าไวน์แดงเปลี่ยนสีของโซลูชัน ใน
โซลูชัน colloidal ถูกทิ้งให้เย็นที่อุณหภูมิห้องภายใต้กวน
และถูกเก็บไว้ในขวดสีเข้มที่ 4 ◦C ภายหลัง โซลูชั่นของ
อนุภาค colloidal ทองถูกลักษณะ โดยเครื่องทดสอบกรดด่าง UV – vis
และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนส่ง (ยการ) .
2.3.2 ค่าสังยุคทองแอนติบอดี-colloidal
จำนวนเคลือบแอนติบอดี (กระต่าย polyclonal แอนติบอดีสำหรับ
polysaccharides ของ S. typhi O901) บนพื้นผิวของเก็บกักทอง
ปรับจาก 75mg/L การ 1200 มิลลิกรัม/L. โซลูชั่นถูก
เตรียมแก้ไขปัญหาสต็อกของแอนติบอดีกระต่ายจาก 15000 mg/L
กับ S. typhi Appropriat การ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การใช้เชื้อไทฟอยด์
( มากของอนุภาค : กลยุทธ์ที่สำคัญมากสำหรับ metalloimmunoassay
ตามป้ายทองทองแดงเพิ่ม

ความไวสูง ( ทางเคมีไฟฟ้าสำหรับเชื้อไทฟอยด์ ( S . ไทฟอยด์ ) กำหนด
ได้รับการพัฒนาเป็นครั้งแรกโดยใช้ทองแดงเพิ่มสำหรับป้ายทองคู่กับ
การปอกโวลแทมเมทรี โมโนโคลนอลแอนติบอดีของประเทศแรกที่ตรึงบนโฟม
microwells แล้วจับโดย ที่ได้รับเชื้อ หลังจาก immunoreaction เกิดขึ้น การใช้แอนติบอดี , Colloidal Gold )
) เพิ่มไปผูกกับเอสที่ได้รับเชื้อแบคทีเรีย เพิ่มทองแดง
ต่อไปสารละลายที่มีกรดแอสคอร์บิค และคอปเปอร์ ( II ) ซัลเฟตที่เพิ่มลงในพอลิสไตรีน microwells .
acidwas แอสใช้ลดทองแดงไอออนทองแดง ( 0 ) ซึ่งต่อมาฝาก
บนอนุภาคนาโนทองคำ Tags หลังจาก copperwas ละลายในกรดไนตริกออกทองแดง ionswere
ตรวจโดยการปอกโวลแทมเมทรีจํานวนเงิน ทองแดง มีความสัมพันธ์กับปริมาณของทอง
สำหรับแท็กปัจจุบันซึ่งถูกควบคุมโดยปริมาณของประเทศติดกับแอนติบอดีโพลี
( Colloidal Gold ) . ดังนั้น การปอกสูงสุดในปัจจุบันเป็นเส้นตรงใน S
ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของประเทศผ่านช่วง 1.30 × 102 CFU / ml ถึง 2.6 × 103 CFU / ml ในพล็อตลอการิทึม
,มีขีดจำกัดของการ 98.9 CFU / มิลลิลิตร อิทธิพลของตัวแปร
ที่เกี่ยวข้อง เช่น ความเข้มข้นของทองแดงและเวลาปฏิกิริยา ของสหรัฐอเมริกาที่ได้รับกับแอนติบอดีศึกษา .
นอกจากนี้เราเรียบร้อยแล้วใช้วิธีนี้เพื่อตรวจสอบสถานะของประเทศสหรัฐอเมริกาในซีรัมของมนุษย์ .
ผลของเราเป็นขั้นตอนต่อ การพัฒนาที่สำคัญมากขึ้นและเชื่อถือได้สำหรับ
( .1 . บทนำ
ไทฟอยด์ไข้เป็นปัญหาร้ายแรงต่อสุขภาพของประชาชน ทั้ง
ด้อยพัฒนาและการพัฒนาประเทศ มันเป็นเชื้อแบคทีเรีย โรคที่เกิดจากเชื้อไทฟอยด์ ( S
ไทฟอยด์ ) นอกจากนี้ knownas Salmonella enterica
หรือไทฟอยด์ , แท่งกรัมลบที่พบเฉพาะในมนุษย์
ปีละประมาณ 16 ล้านอุบัติการณ์ของไข้ไทฟอยด์รายงาน
ทั่วโลก ส่งผลให้ประมาณการ 600000 ความตาย [ 1 , 2 ]
ส่งของไทฟอยด์ไข้อาจเกิดขึ้นผ่านหลายแนวทาง เช่น การติดต่อกับบุคคล

อาหารติดเชื้อและการรับประทาน หรือดื่มที่ถูกปนเปื้อนด้วยแบคทีเรียไทฟอยด์ .
ต่อไปนี้การกินแบคทีเรียที่แพร่กระจายจากลำไส้
ผ่านกระแสเลือดไปยังโหนดในลำไส้และต่อมน้ำเหลืองบริเวณ
ของร่างกายที่พวกเขาคูณ อื่น ๆ อาการของการเจ็บป่วย
มีการโจมตีอย่างฉับพลันของยั่งยืนไข้ ปวดศีรษะรุนแรง
, เบื่ออาหาร ท้องผูก หรือท้องเสีย อาจไม่รุนแรง .
ตัวอย่างปัสสาวะหรือเลือดจะถูกใช้เพื่อตรวจสอบสถานะของ S .
ไทฟอยด์ ซึ่งเป็นวิธีเดียวที่จะให้สังเกตการเจ็บป่วยคือ
ไข้รากสาดน้อย [ 3 ] ดังนั้น การกำหนดประเทศในปัสสาวะ
Sหรือเลือด มีบทบาทสำคัญในการวิจัยทางคลินิกและการวินิจฉัยของโรคไข้รากสาด
. นอกจากนี้ คนที่กู้คืนจากไทฟอยด์
fevermay ยังเป็นพาหะของโรคที่สามารถติดเชื้อคนอื่น .
ดังนั้นระดับของ S . ไทฟอยด์ในคนไข้ปัสสาวะหรือเลือดหลัง
กู้ควรจะตรวจสอบอย่างต่อเนื่อง เพื่อควบคุมการแพร่กระจายของโรคระบาดนี้
.วิธีคลาสสิกมักจะใช้เพื่อตรวจสอบ s
ประเทศ รวมทั้งการเพาะเลี้ยง [ 4 , 5 ] วิธีการทาง
เช่นการจับกลุ่ม , ภาพนิ่งและ widal ทดสอบ [ 6 ] และปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR )
[ 7 , 8 ) ถึงแม้ว่าวิธีการเหล่านี้สามารถให้ผลความไวสูง
การวิเคราะห์ทั้งเชิงคุณภาพและปริมาณ
มีแรงงานและเวลามากที่จะดำเนินการเนื่องจาก
ก่อนเสริม แยกและขยายขั้นตอนของเซลล์แบคทีเรีย
.
กับข้อเสียดังกล่าว ความพยายามที่จะพัฒนาวิธีการได้รับการกำหนดด้วย
.
และความไวเพิ่มขึ้น และสามารถลดเวลาในการวิเคราะห์ได้เสนอวิธีการทางเลือกสำหรับ

ปัจจุบันการวิเคราะห์โมเลกุลทางชีวภาพเอนไซม์ที่มี 9,10 [ ] , พื้นผิว PLASMON แนนซ์ [ 11 ]
,ทางไฟฟ้าเคมีและ [ 12 – 14 ] โดยเฉพาะการใช้
ของทางเคมีไฟฟ้าได้ดึงดูดความสนใจมากได้รับการกำหนดสำหรับ S

เพราะความเรียบง่ายโดยธรรมชาติของมัน ความไวสูง , เครื่องมือราคาไม่แพงและ miniaturization .
ถึงแม้ว่าวิธีนี้มีจำกัดการค้นหาต่ำและสามารถใช้
ในการวินิจฉัยของโรคไข้รากสาด , อารมณ์และวิธีที่รวดเร็วใน
การวิเคราะห์และการได้รับข้อมูลสำคัญเกี่ยวกับประสิทธิภาพของการบำบัดรักษา
, ติดตาม , โรคระบาด , และ
ป้องกันยังต้องการ กับการพัฒนานาโนเทคโนโลยี อนุภาคต่าง ๆ
[ ] 15,16 และนาโนควอนตัมจุด [ 17,18 ]
ถูกใช้เป็นฉลากเพื่อเพิ่มความไวของเทคนิคทางเคมีไฟฟ้า

เบสไฟฟ้า
การตรวจจับโมเลกุลทางชีวภาพ คือ ได้จากการสลายตัวของอนุภาคนาโนของโลหะและ

ตามมา โดยการใช้กำจัดละลายไอออน อนุภาคนาโนทองคำ
เป็นคลาสของป้ายที่มีคุณสมบัติพิเศษมากมาย เช่น แสงและอิเล็กทรอนิกส์
คุณสมบัติการเร่งปฏิกิริยาที่ได้รับก่อนหน้านี้ที่มีการประยุกต์ใช้ในการสำรวจ
ชีวโมเลกุลการตรวจหาจากข้อดีเหล่านี้
, คอลลอยด์ทองถูกใช้เป็นตัวเร่งปฏิกิริยาเคมีไฟฟ้าเครื่องหมาย
หรือป้ายสำหรับขยายอนุภาคนาโนเพื่อยกระดับความไวของวิธี
.
เมื่อเร็ว ๆนี้ , ทองแดง , เงิน , ทองและปรับปรุง Colloidal Gold มี
ถูกรายงานอิมมูโนโกลบินจี ( IgG ) กำหนด ซึ่งมีรูปแบบของโรค
ไฟฟ้าเคมีมีจำกัดการค้นหา
ต่ำตั้งแต่ 10 ng / ml 0.1 pg / ml [ 19 – 21 ]
โลหะเพิ่มคอลลอยด์ทองไฟฟ้าเคมีปอก metalloimmunoassay
รวมความไวสูงลอกการวิเคราะห์โลหะ
กับสัญญาณที่น่าจับตา ( ที่เกิดจากการตกตะกอนของโลหะ

บนอนุภาคนาโนทองคำ [ 21 – 23 ] ของโลหะทองแดงเพิ่มโปรโตคอล
เหล่านี้ได้ดีกว่าโลหะอื่นๆเพิ่มโปรโตคอลเพราะ
ทองแดงเพิ่มโซลูชั่นซึ่งประกอบด้วยกรดแอสคอร์บิค และทองแดง
ซัลเฟต , เป็นเรื่องง่ายในการเตรียมและเก็บรักษา นอกจากนี้ การกำหนดโดยการถอดแคทไอออนทองแดง

ง่ายและความไวสูง วิลเนอร์ และเพื่อนร่วมงานที่ใช้สะสมโลหะทองแดงบนอนุภาคทองระดับนาโนเมตร fornadhdetection

แต่ [ 24 ]โลหะเพิ่มคอลลอยด์ทองไม่ได้รับก่อนหน้านี้
ใช้ตรวจหาเซลล์แบคทีเรียในตัวอย่างแท้จริง โดยเฉพาะอย่างยิ่ง
เพื่อตรวจหาประเทศสหรัฐอเมริกา . ดังนั้นเราจึงต้องใช้
strippingmetalloimmunoassay ไฟฟ้าเคมีตาม copperenhanced
ป้ายทองอนุภาคนาโนสำหรับการหาปริมาณ S . ไทฟอยด์ใน
ตัวอย่างจริงเป็นครั้งแรก ซึ่งจะเป็นประโยชน์ในการวินิจฉัย ,
การติดตามผลการรักษา และการควบคุมการระบาดของโรคล่วงหน้า

thiswork ไทฟอยด์ไข้ ใน aimwas , สูงสุดของเราพัฒนาไฟฟ้า
metalloimmunoassay ขึ้นอยู่กับทองแดงเพิ่มทองอนุภาคนาโน
ป้ายชื่อสำหรับ s ในตัวอย่างจริงที่ได้รับการกำหนดด้วย
วงเงินต่ำตรวจสอบความถูกต้องสูงและเวลาในการวิเคราะห์อย่างรวดเร็ว รายละเอียดของ
การเพิ่มประสิทธิภาพและประสิทธิภาพที่ยอดเยี่ยมของเราเสนอ
วิธีการนําเสนอในส่วนต่อไปนี้ .
2 ทดลอง
2.1 . เครื่องมือปอก voltammograms
ถูกบันทึกไว้โดยใช้ autolab
โพเทนทิโอ 30 ( metrohm , สวิตเซอร์แลนด์ ) กับระบบสามขั้วไฟฟ้าคาร์บอนเหลือบ .
( GC ) ไฟฟ้า ( bioanalytical ระบบอิงค์ , พื้นที่
0.07 CM2 ) ถูกใช้เป็นขั้วไฟฟ้าทำงาน ก่อนที่จะใช้GC
กรัม ซึ่งขั้วไฟฟ้าขัดด้วย 1  m
0.3  M ของอะลูมินา / น้ำ slurries บนรู้สึกผ้า ตามด้วยการล้างด้วยน้ำ
คล้ายเนื้อเยื่อประสานเพื่อขจัดสิ่งสกปรก Alumina .
ลวดแพลทินัมและ AG 0.46% ด้วยสะพานเกลือที่ใช้เป็นเคาน์เตอร์และขั้วอ้างอิง
, ตามลำดับ การ equipmentwas ไฟฟ้าเคมี
ตั้งอยู่ในหนังสือรายสัปดาห์เพื่อลดสัญญาณรบกวนทางอิเล็กทรอนิกส์ .
2.2 . วัสดุและวิธีการ
polystyrene , 96 , ไมโครจานสูง ( ผูก )
แผ่น ) ซื้อจาก ronbio ( เซี่ยงไฮ้ , จีน ) ใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีสำหรับ polysaccharides และกระต่าย

. . o901 ประเทศของประเทศได้รับจากโรงพยาบาลศิริราช tetrachloroaurate
ไฮโดรเจน ( III ) และอัลบูมินและเซรั่ม
( BSA ) ที่ได้รับจาก Sigma Chemical Co . ( St . Louis , MO )
.กรดไนตริก ( 65% ) , โซเดียมคลอไรด์ , โซเดียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟตโซเดียมฟอสเฟต ,
, โซเดียมคาร์บอเนต , โซเดียมไบคาร์บอเนต ,
โซเดียมซิเตรต จุนสี และกรดแอสคอร์บิค (
) จากเมอร์ค ( เยอรมนี ) .
บัฟเฟอร์เคลือบสำหรับ microwells คือ 0.05m
โซเดียมไบคาร์บอเนต ( Na2CO3 ( pH 9.6 ) . บ่มเพาะ และล้างบัฟเฟอร์
ประกอบด้วย 0.01mnah2po4 – na2hpo4 ( pH 7.4 ) และ 0.15msodium
คลอไรด์Enhancer ทองแดง โซลูชั่น ทำจาก 1 : 1 ( v / v )
0.10m และอัตราส่วนของกรดแอสคอร์บิก 0.2m คอปเปอร์ ( II ) ซัลเฟต ทั้งหมดของโซลูชั่นเตรียมใช้ milli-q
m  น้ำ ( ระบบบำบัดมิลลิ
.
2.3 การเตรียมแอนติบอดี–คอลลอยด์ทองผัน
2.3.1 . การเตรียมอนุภาคทองระดับนาโนเมตร
อนุภาคนาโนของทองที่เตรียมไว้ตามวิธีการ
รายงานอ้างอิง [ 1925 ] กับการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย สั้น ๆ , 1ml
ของโซลูชั่น haucl4 1 % ผสมกับ 100ml ของทวีคูณกลั่น
น้ำและต้มภายใต้แรงปลุกเร้า แล้ว 2.5mlof 1% โซเดียมซิเทรตเป็นโซลูชั่นภายใต้
เพิ่มความร้อนอย่างต่อเนื่องและกวน
สำหรับ 15 นาทีจนกว่าสีของสารละลายเปลี่ยนเป็นไวน์แดง สารละลายคอลลอยด์
ถูกทิ้งไว้ให้เย็นที่อุณหภูมิห้องภายใต้กวน
ต่อมาได้เก็บไว้ในขวดสีเข้มที่ 4 ◦ซี. โซลูชั่นของ
อนุภาคคอลลอยด์ทองถูก characterized โดย UV Spectrophotometer ( 2
และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องผ่าน ( TEM )
2.3.2 . แอนติบอดี - คอลลอยด์ทองผัน
ปริมาณเคลือบแอนติบอดี ( antibody กระต่ายใช้สำหรับ S .
polysaccharides ที่ได้รับ o901 ) บนพื้นผิวของอนุภาคนาโนของทอง
คือปรับจาก 75 มก. / ลิตร , 200 มก. / ล. โซลูชั่น
เตรียมจาก 15 , 000 มก. / ล. หุ้นโซลูชั่นของกระต่ายที่ได้รับภูมิคุ้มกัน
s . การ appropriat