Approximately 5 L of the plasmid p

Approximately 5 L of the plasmid preparations containing the inserted amplicons were used to transform competent E. coli DH 5cells by heat shock, and the transformed cells were plated on Luria-Bertani medium (LB) plates containing ampicillin(100 g/mL) plus IPTG (0.1 mM) and X-Gal (20 g/mL). The recombinant colonies were identified based on the white color of the colonies and then transferred to liquid LB medium containing ampicillin (100 g/mL) and incubated at 37◦C for 12 h at 250 rpm.
The presence of recombinant colonies containing the target fragment was confirmed by PCR using the primers RD6F and RD6R.
These PCR products were purified for nucleotide sequencing using the QIAquick@ PCR Purification Kit, following the protocol provided by the manufacturer

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใช้ประมาณ 5 ลิตรการเตรียมการของ plasmid ที่ประกอบด้วย amplicons แทรกเพื่อแปลงอำนาจ E. coli DH 5 เซลล์ โดยการช็อกความร้อน และรับการเปลี่ยนแปลงเซลล์ถูกชุบบน Luria Bertani ปานกลาง (ปอนด์) แผ่นที่ประกอบด้วยโกคอ (100 g/mL) IPTG (0.1 mM) และ X-Gal (20 g/mL) Recombinant อาณานิคมถูกระบุตามสีขาวของอาณานิคมแล้วโอนไปเหลว LB ขนาดกลางที่มีโกคอ (100 กรัม/มิลลิลิตร) และรับการกกที่ 37◦C สำหรับ 12 ชม.ที่ 250 rpmการปรากฏตัวของ recombinant อาณานิคมที่ประกอบด้วยส่วนเป้าหมายได้รับการยืนยัน โดย PCR ที่ใช้ไพรเมอร์ RD6F และ RD6Rผลิตภัณฑ์ PCR ได้บริสุทธิ์สำหรับลำดับนิวคลีโอไทด์โดยใช้ QIAquick @ชุดฟอก PCR โพรโทคอที่มาจากผู้ผลิตดังต่อไปนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ประมาณ 5? L ของการเตรียมพลาสมิดที่มีแอมพลิคอนแทรกถูกนำมาใช้ในการแปลงอำนาจ E. coli DH 5? เซลล์โดยช็อตความร้อนและเซลล์เปลี่ยนที่ถูกชุบบนสื่อ Luria-Bertani (ปอนด์) แผ่นที่มี ampicillin (100 กรัม / มิลลิลิตร) บวก IPTG (0.1 มิลลิเมตร) และ X-Gal (20? g / ml) อาณานิคม recombinant ถูกระบุขึ้นอยู่กับสีขาวของอาณานิคมแล้วโอนไปยังของเหลว LB ขนาดกลางที่มี ampicillin (100 g / ml) และบ่มที่37◦C 12 ชั่วโมงที่ 250 รอบต่อนาที
การปรากฏตัวของอาณานิคม recombinant ที่มีชิ้นส่วนเป้าหมายได้รับการยืนยันโดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์และ RD6F RD6R
ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์เหล่านี้ถูกทำให้บริสุทธิ์สำหรับลำดับเบสโดยใช้ชุดฟอก QIAquick @ PCR ตามโปรโตคอลให้โดยผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ประมาณ 5 ชั้น ของ ในการเตรียมบรรจุใส่ amplicons ถูกใช้เพื่อเปลี่ยนความสามารถ E . coli DH 5cells โดยช็อกความร้อนและเปลี่ยนเซลล์มีการชุบในลุเรียแบร์ตานิขนาดกลาง ( ปอนด์ ) แผ่นที่มีแอมพิซิลลิน ( 100 กรัม / มิลลิลิตร ) และโปรตีน ( 0.1 มิลลิเมตร ) และ x-gal ( 20 กรัม / มิลลิลิตร ) อาณานิคมแนนท์ถูกระบุตามสีขาวของอาณานิคมและจากนั้นโอนไปยังของเหลวปอนด์ขนาดกลางที่มีแอมพิซิลลิน ( 100 กรัม / มิลลิลิตร ) และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 12 ชั่วโมง◦ที่ 250 รอบต่อนาทีการปรากฏตัวของอาณานิคมของยีนที่มีส่วนเป้าหมายได้รับการยืนยันโดยวิธี PCR โดยใช้ไพรเมอร์และ rd6f rd6r .ผลิตภัณฑ์ PCR เหล่านี้บริสุทธิ์สำหรับการวิเคราะห์หาลำดับนิวคลีโอไทด์โดยใช้เชื้อบริสุทธิ์ qiaquick @ ชุดดังต่อไปนี้โปรโตคอลที่ให้โดยผู้ผลิต