3.5. Cytotoxicity assayCytotoxicity

3.5. Cytotoxicity assay
Cytotoxicity of compound 1 was evaluated in a 96-well flatbottomed
microplate by using a standard MTT (3-[4,5-
dimethylthiazole-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) colorimetric
assay (Mosmann, 1983; Choudhary et al., 2012). For
this purpose, PC-3 cells (human prostate cancer) and 3T3 cells
(normal mouse fibroblast) were cultured in DMEM (Dulbecco’s
modified Eagle’s medium) and HeLa cells (human cervical
cancer) in MEM (modified Eagle’s medium), supplemented with
5% fetal bovine serum (FBS), 100 IU/mL pencillin, and 100 mg/mL
streptomycin in a 25 cm3 flask, and kept in a 5% CO2 incubator at
37 8C. Exponentially growing cells were harvested, counted with
hemocytometer, and diluted with DMEM. Cell cultures at the
concentration of 1  105 cells/mL were prepared and introduced
(100 mL/well) into 96-well plates. After overnight incubation,
the medium was removed and 200 mL of fresh medium was
added with different concentrations of compound 1 (1–
100 mM). After 72 h, 50 mL of MTT (2 mg/mL) was added to
each well and incubated further for 4 h. Subsequently, 100 mL of
DMSO was added to each well. The extent of MTT reduction to
formazan within cells was calculated by measuring the
absorbance at 570 nm, by using a microplate ELISA reader
(Spectra Max Plus, Molecular Devices, CA, USA). The cytotoxicity
was recorded as the concentration causing 50% growth inhibition
for all cell lines. Doxorubicin was used as positive control
for prostate and cervical cancer cell lines, whereas cycloheximide
was used as the standard for normal mouse fibroblast
cell line.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.5 วิเคราะห์ cytotoxicityมีประเมิน cytotoxicity ผสม 1 ใน 96-ดี flatbottomedmicroplate โดย MTT มาตรฐาน (3- [4,5-dimethylthiazole-2-yl] - 2, 5 - diphenyltetrazolium โบรไมด์) เทียบเคียงวิเคราะห์ (Mosmann, 1983 Choudhary et al., 2012) สำหรับวัตถุประสงค์นี้ PC 3 เซลล์ (มนุษย์มะเร็งต่อมลูกหมาก) และเซลล์ 3T3(เมาส์ปกติ fibroblast) มีอ่างใน DMEM (ดุลเบกโกของปรับเปลี่ยนขนาดกลางของอีเกิ้ล) และเซลล์ HeLa (ปากมดลูกมนุษย์โรคมะเร็ง) ในหน่วยความจำ (แก้ไขอินทรีกลาง เสริมด้วย5% ครรภ์วัวซีรั่ม (FBS), pencillin 100 IU/mL และ 100 mg/mLstreptomycin ในหนาว 25 cm3 และเก็บไว้ใน incubator 5% CO2 ที่37 8C. สร้างการเติบโตของเซลล์เก็บเกี่ยวผลผลิต นับด้วยhemocytometer และผสมกับ DMEM วัฒนธรรมที่เซลล์เตรียม และนำความเข้มข้นของ 1 105 เซลล์/มล.(100 mL/ดี) ลงในแผ่นดี 96 หลังจากบ่มค้างคืนสื่อที่ถูกเอาออก และถูก 200 mL ของสดกลางเพิ่มกับความเข้มข้นแตกต่างกันของบริเวณที่ 1 (1-100 มม.) หลังจาก 72 h, 50 mL ของ MTT (2 mg/mL) ถูกเพิ่มเข้าไปดีละ และ incubated เพิ่มเติมสำหรับ 4 h ในเวลาต่อมา 100 mL ของเพิ่ม DMSO ให้ดีละกัน ขอบเขตของ MTT ลดให้formazan ภายในเซลล์ถูกคำนวณ โดยการวัดการabsorbance ที่ 570 nm โดย microplate ELISA อ่าน(แรมสเป็คตรา Max Plus อุปกรณ์โมเลกุล CA, USA) การ cytotoxicityบันทึกเป็นความเข้มข้นที่ทำให้เกิดการยับยั้งการเจริญเติบโต 50%สำหรับรายการทั้งหมดในเซลล์ ใช้เป็นตัวควบคุมบวก doxorubicinสำหรับต่อมลูกหมากและมะเร็งปากมดลูกเซลล์บรรทัด ขณะ cycloheximideใช้เป็นมาตรฐานสำหรับ fibroblast เมาส์ปกติเซลล์เส้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.5 พิษการทดสอบความเป็นพิษของสาร 1 ถูกประเมินใน flatbottomed 96 หลุม microplate โดยใช้ MTT มาตรฐาน (3 [4,5- dimethylthiazole-2-YL] โบรไมด์ -2,5-diphenyltetrazolium) สีทดสอบ(Mosmann 1983; Choudhary et al., 2012) สำหรับวัตถุประสงค์นี้ PC-3 เซลล์ (มะเร็งต่อมลูกหมากมนุษย์) และ 3T3 เซลล์ (fibroblast เมาส์ปกติ) มาเลี้ยงใน DMEM (Dulbecco ของการปรับเปลี่ยนขนาดกลางนกอินทรี) และเซลล์ HeLa (ปากมดลูกของมนุษย์มะเร็ง) ใน MEM (แก้ไขกลางนกอินทรี) เสริมด้วย5 ซีรั่มวัว% ของทารกในครรภ์ (FBS) 100 IU / mL pencillin และ 100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรstreptomycin ในขวด 25 cm3 และเก็บไว้ในตู้อบ CO2 5% ที่37 8C ชี้แจงเซลล์เจริญเติบโตเก็บเกี่ยวนับกับhemocytometer และเจือจางด้วย DMEM เซลล์เพาะเลี้ยงที่ความเข้มข้น 1? 105 เซลล์ / มิลลิลิตรได้จัดทำและนำเสนอ(100 มิลลิลิตร / ดี) ลงในแผ่น 96 หลุม หลังจากการบ่มค้างคืนที่สื่อจะถูกลบออกและ 200 มิลลิลิตรของกลางสดเพิ่มความเข้มข้นแตกต่างกันของสารประกอบที่1 (1- 100 มิลลิเมตร) หลังจาก 72 ชั่วโมง 50 มิลลิลิตร MTT (2 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดีและบ่มอีก4 ชั่วโมง ต่อมา 100 มิลลิลิตรDMSO ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละดี ขอบเขตของการลด MTT ไปformazan ภายในเซลล์ที่คำนวณได้จากการวัดการดูดกลืนแสงที่570 นาโนเมตรโดยใช้วิธี ELISA อ่าน microplate (Spectra แม็กซ์พลัส, อุปกรณ์โมเลกุล, CA, USA) พิษถูกบันทึกไว้เป็นความเข้มข้นที่ก่อให้เกิดการยับยั้งการเจริญ 50% สำหรับทุกเซลล์ doxorubicin ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวกสำหรับต่อมลูกหมากและเซลล์มะเร็งปากมดลูกในขณะที่cycloheximide ถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับการ fibroblast เมาส์ปกติเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.5 . ความเป็นพิษต่อเซลล์ของสารประกอบ 1
ถูกประเมินใน 96 ดี flatbottomed
พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยโดยใช้ยามาตรฐาน ( 3 - [ 4 , 5 ] - -
dimethylthiazole-2-yl 2,5-diphenyltetrazolium โบรไมด์ ) 7.4
assay ( mosmann , 1983 ; choudhary et al . , 2012 ) สำหรับ
วัตถุประสงค์นี้ pc-3 เซลล์ ( มะเร็งต่อมลูกหมากของมนุษย์ ) และเซลล์ 3T3
( fibroblast เมาส์ปกติ ) เพาะเลี้ยงใน dmem ของ
( ดัลเบโค่แก้ไขนกอินทรีขนาดกลาง ) และ Hela เซลล์ ( มะเร็งปากมดลูก
มนุษย์ ) แหม่ม ( แก้ไขนกอินทรีขนาดกลาง ) เสริมด้วย
5 % ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ ( FBS ) 100 IU / ml pencillin และ 100 มก. / มล. ในขวด
streptomycin 25 cm3 และเก็บไว้ใน 5% CO2 Incubator ที่
37 8C . ชี้แจงการเติบโตเซลล์เก็บนับด้วย
hemocytometer และเจือจางด้วย dmem . เซลล์ที่
วัฒนธรรมเข้มข้น 1  105 เซลล์ / มิลลิลิตรเตรียมและแนะนำ
( 100 มล. / ดี ) เป็น 96 ด้วยแผ่น หลังจากค้างคืนระยะเวลา
สื่อถูกลบออกและ 200 มล. ขนาดกลางสดถูก
เพิ่มกับระดับความเข้มข้นของสารประกอบ 1 ( 1 )
100 มม. ) หลังจาก 72 ชั่วโมง , 50 ml ของ MTT ( 2 mg / ml ) คือเพิ่ม

แต่ละอย่างดีและบ่มอีก 4 ชั่วโมงต่อมา 100 มล.
DMSO เติมแต่ละครั้งได้อีกด้วยขอบเขตของ MTT ลด
ปฏิบัติการภายในเซลล์ที่ถูกคำนวณโดยการวัดการดูดกลืนแสงที่
570 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านอีไล
( Spectra พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย แม็กซ์ พลัสโมเลกุล , อุปกรณ์ , CA , USA ) มะเร็ง
ถูกบันทึกเป็นสมาธิก่อให้เกิด 50%
เพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตเซลล์ทั้งหมด ดอกโซรูบิซินใช้
ควบคุมบวกสำหรับต่อมลูกหมากและเซลล์มะเร็งปากมดลูก ,ในขณะที่ร้อยเรียง
ถูกใช้เป็นมาตรฐานสำหรับปกติเมาส์เซลล์ fibroblast
บรรทัด