Materials and methods
Plant material and in vitro culture
Diploid plants of A. thaliana ecotype Columbia
(2n = 2x = 10) were used as sources of explants. Axenic
plants were obtained from seeds sterilized for 5 min in a
mixture of 3 % H2O2 (v/v): 70 % (v/v) EtOH (1 : 1), and
rinsed five times with sterile distilledwater. Seedswere placed
in culture vessels containing hormone-free MS medium
(Murashige and Skoog 1962) enriched with mineral salts,
vitamins, sucrose (3 %,w/v) and agar (0.8 %,w/v).The plants
were grown at 21 C, 16-h photoperiod and 70 lmol m-2 s-1
irradiance. The same growth-room conditions were used for
tissue culture. Leaf explants were obtained by cutting young
rosette leaves excised from 3-week-old plants into 1 cm2
squares, each with a part of a mid vein. Explants were cultured
on a B5 callus-inducing medium (Gamborg et al. 1968)
containing 0.5 mg/L of 2,4-D and 0.05 mg/L of kinetin
(Valvakens et. al 1988). Two and 6-week old calli were
transferred on to a shoot-inducing B5 medium supplemented
with 0.15 mg/L of IAA and 5 mg/L of 2iP (Valvakens et al.
1988). The regenerated rosettes and shootswere transferred to
a root-inducing B5 medium supplemented with 0.125 mg/L
of NAA. These procedures produced regenerated plants (R1),
and the next generation phase (R2) was obtained from seeds
that were collected from the R1 regenerants. The pH of all
media was adjusted to 5.8 and autoclaved at 121 C for
20 min (Jiang et al. 2011).
วัสดุและวิธีการพืชวัสดุและเพาะพฤติกรรมมักพืชของ A. thaliana ecotype โคลัมเบีย(2n = 2 x = 10) ถูกใช้เป็นแหล่งของ explants Axenicพืชที่ได้จากเมล็ดที่ผ่านการฆ่าเชื้อสำหรับ 5 นาทีในการส่วนผสม 3% H2O2 (v/v): 70% (v/v) คะแนน (1:1), และล้าง 5 ครั้ง ด้วย distilledwater เป็นหมัน Seedswere ที่วางไว้ในเรือวัฒนธรรมประกอบด้วยฮอร์โมนฟรี MS ปานกลาง(Murashige และ Skoog 1962) ที่อุดมไป ด้วยเกลือแร่วิตามิน ซูโครส (3 %,w/v) และอาหาร (0.8 %,w/v) พืชที่ปลูกที่ 21 C, 16 h ชั่วโมง และ 70 lmol m-2 s-1irradiance ใช้สำหรับเงื่อนไขการเติบโตห้องเดียวกันเนื้อเยื่อ Explants ใบรับ โดยหนุ่มตัดกุหลาบใบสรรพสามิตจากพืชอายุ 3 สัปดาห์ 1 cm2สี่เหลี่ยม มีส่วนของเส้นกลาง Explants มีอ่างบนมี B5 กระตุ้นให้เกิดแคลลัส (Gamborg et al. 1968)ที่ประกอบด้วย 2, 4-D 0.5 mg/L และ 0.05 mg/L kinetin(Valvakens et. al 1988) สอง และ calli 6 - สัปดาห์เก่าได้โอนไปกระตุ้นให้เกิดยิง B5 สื่อเสริม0.15 mg/L ของ IAA และ 5 mg/L 2iP (Valvakens et al1988) อาศัยแหวนและ shootswere โอนไปการกระตุ้นให้เกิดราก B5 กลางเสริม ด้วย 0.125 mg/Lของ NAA ขั้นตอนเหล่านี้ผลิตสร้างพืช (R1),และระยะรุ่นถัดไป (R2) ได้รับจากเมล็ดที่ถูกเก็บรวบรวมจาก R1 regenerants ค่า pH ของปรับปรุงสื่อการนึ่งที่ 121 C สำหรับ และ 5.820 นาที (Jiang et al. 2011)
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)