The Turner BioSystems TD-700 Labora

The Turner BioSystems TD-700 Laboratory Fluorometer in combination with Molecular Probes' LIVE/DEAD® BacLightTM Bacterial Viability Kit provides a novel two-color fluorescence assay of bacterial viability that allows researchers to quantitatively distinguish live and dead bacteria in minutes, even in a mixed population containing a range of bacterial types. Conventional direct-count assays of bacterial viability are based on metabolic characteristics or membrane integrity. However, methods relying on metabolic characteristics often only work for a limited subset of bacterial groups,(1) and methods for assessing bacterial membrane integrity commonly have high levels of background fluorescence.(2) Both types of determinations suffer from being very sensitive to growth and staining conditions.(3,4)

The LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability assay utilizes mixtures of SYTO® 9 green fluorescent nucleic acid stain and the red fluorescent nucleic acid stain, propidium iodide. These stains differ both in their spectral characteristics and in their ability to penetrate healthy bacterial cells. When used alone, the SYTO 9 stain labels bacteria with both intact and damaged membranes. In contrast, propidium iodide penetrates only bacteria with damaged membranes, competing with the SYTO 9 stain for nucleic acid binding sites when both dyes are present. When mixed in recommended proportions, SYTO 9 stain and propidium iodide produce green fluorescent staining of bacteria with intact cell membranes and red fluorescent staining of bacteria with damaged membranes. The background remains virtually nonfluorescent. Consequently, the ratio of green to red fluorescence intensities provides a quantitative index of bacterial viability (Figure 1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เทอร์เนอร์ BioSystems TD-700 ห้องปฏิบัติ Fluorometer ร่วมกับโมเลกุล Probes' LIVE/ตาย ® BacLightTM แบคทีเรียชีวิตชุดช่วยให้การวิเคราะห์นวนิยายสองสี fluorescence ของชีวิตแบคทีเรียที่ช่วยให้นักวิจัย quantitatively แยกแยะแบคทีเรียอยู่ และตายในนาที แม้ในประชากรผสมประกอบด้วยหลากหลายชนิดของแบคทีเรีย ปกติ assays ตรงจำนวนของแบคทีเรียนี้ขึ้นอยู่กับลักษณะที่เผาผลาญหรือเมมเบรนความ อย่างไรก็ตาม วิธีการอาศัยลักษณะเผาผลาญมักจะทำการย่อยของแบคทีเรีย groups,(1) จำกัดและวิธีการประเมินความสมบูรณ์ของเมมเบรนของแบคทีเรียโดยทั่วไปมีพื้น fluorescence ระดับสูง(2) ประสบ determinations ทั้งสองชนิดมีความสำคัญมากในการเจริญเติบโต และสภาพการย้อมสี(3, 4)

วิเคราะห์ที่ LIVE/ตาย BacLight แบคทีเรียนี้ใช้ส่วนผสมของ SYTO ® 9 กรดนิวคลีอิกเรืองแสงสีเขียวคราบและคราบสีแดงเรืองแสงเอ็น ไอโอไดด์ propidium คราบเหล่านี้แตกต่างกันทั้ง ในลักษณะของสเปกตรัม และความสามารถในการเข้าเซลล์แบคทีเรียเพื่อสุขภาพ ใช้คนเดียว คราบ SYTO 9 ป้ายชื่อแบคทีเรีย ด้วยสารเหมือนเดิม และเสียหาย ในทางตรงกันข้าม ไอโอไดด์ propidium แทรกซึมแบคทีเรียกับเข้าเสียหาย การแข่งขันกับคราบ SYTO 9 กรดนิวคลีอิกรวมเที่ยวเมื่อทั้งสองสีมีอยู่ เมื่อผสม สัดส่วน SYTO 9 คราบ และ propidium แนะนำไอโอไดด์ผลิตสีเขียวเรืองแสงย้อมสีของแบคทีเรียกับเยื่อหุ้มเซลล์เหมือนเดิมและสีแดงเรืองแสงย้อมสีของแบคทีเรียด้วยสารเสียหาย พื้นหลังยังคงลุก nonfluorescent ดังนั้น อัตราส่วนของสีเขียวเพื่อการปลดปล่อยก๊าซ fluorescence สีแดงช่วยให้ดัชนีเชิงปริมาณของแบคทีเรียนี้ (รูปที่ 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทอร์เนอซึ่ง td-700 ห้องปฏิบัติการฟลู โรมิเตอร์ร่วมกับโมเลกุลโพรบ ' สด / ตาย® baclighttm แบคทีเรีย 1 ชุดให้นวนิยายสองสีเรืองแสง การทดสอบความมีชีวิตของแบคทีเรียที่ช่วยให้นักวิจัยเพื่อใช้แยกแยะมีชีวิตและตายแบคทีเรียในนาทีแม้ในผสมประชากรที่มีช่วงของชนิดของเชื้อแบคทีเรียปกตินับโดยตรงหรือขึ้นอยู่กับลักษณะของแบคทีเรียสามารถสลายหรือเมมเบรน ความซื่อสัตย์ อย่างไรก็ตาม วิธีการอาศัยลักษณะการเผาผลาญมักจะทำงานย่อยจำกัดของกลุ่มแบคทีเรีย ( 1 ) และวิธีการประเมินความสมบูรณ์ของแผ่นมักมีระดับสูงของการเรืองแสงพื้นหลัง( 2 ) มีทั้งชนิดใช้ประสบการมากไวต่อการเจริญเติบโตและการเงื่อนไข ( 3 , 4 )

อยู่ / ตาย baclight ความมีชีวิต assay แบคทีเรียใช้ผสม syto ® 9 เรืองแสงสีเขียวคราบแดงเรืองแสงและกรดนิวคลีอิกกรดนิวคลีอิกคราบ propidium ไอโอไดด์ .คราบเหล่านี้แตกต่างกันทั้งในลักษณะของสเปกตรัมและความสามารถของพวกเขาที่จะเจาะเซลล์แบคทีเรียที่มีสุขภาพดี เมื่อใช้คนเดียว syto 9 คราบแบคทีเรีย มีทั้งป้ายเหมือนเดิม และความเสียหายเยื่อ ในทางตรงกันข้าม propidium ไอโอไดด์แทรกซึมเฉพาะแบคทีเรียกับเสียหาย membranes ประชันกับ syto 9 คราบสำหรับกรดนิวคลีอิกปกเว็บไซต์เมื่อทั้งสองสีอยู่เมื่อผสมในสัดส่วนที่แนะนำ syto 9 คราบ และ propidium ไอโอไดด์ผลิตเรืองแสงสีเขียวคราบแบคทีเรียกับเยื่อหุ้มเซลล์เหมือนเดิมและสีแดงเรืองแสงคราบแบคทีเรียที่ทำลายเยื่อ พื้นหลังยังคงแทบ nonfluorescent . ดังนั้น อัตราส่วนของการเรืองแสงสีเขียวเข้ม สีแดง มีดัชนีเชิงปริมาณของแบคทีเรีย 3 ( รูปที่ 1 )