Enzyme assays. To analyze the XR, X

Enzyme assays. To analyze the XR, XDH, XK activities, strain AH22 or
fusion 1400 transformants carrying pLNH32, pUCKm10-AR, pUCKm10-A*R,
pUCKm10-KD, or pUCKm10-KK were cultured in YEPD containing the proper
concentration of geneticin until the density was 200 KU (20 OD600, 20). Cells (10
ml) were harvested by centrifugation, washed with 10 ml of sterile water, resus-
pended in 400 ml of buffer (0.1 M sodium phosphate, pH 7.2), and chilled in a
freezer for at least 30 min until they were frozen. The cells were then thawed and
transferred to a 1.5-ml Eppendorf tube. About 0.3 g of acid-treated glass beads
and 150 ml of 0.1 M 2-mercaptoethanol were added to the cells, which were then
disrupted by vortexing. The resulting cell extracts were assayed for XR and XDH
activities as described by Bolen and Detroy (5) and for XK activity as described

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Assays เอนไซม์ วิเคราะห์ XR, XDH, XK กิจกรรม สายพันธุ์ AH22 หรือฟิวชั่น 1400 transformants พก pLNH32, pUCKm10 AR, pUCKm10 A * RpUCKm10 KD หรือ pUCKm10 KK ถูกล้างใน YEPD ที่ประกอบด้วยเหมาะสมความเข้มข้นของ geneticin จนกระทั่งความหนาแน่นคือ คุ 200 (20 OD600, 20) เซลล์ (10มล.) เก็บเกี่ยว โดยการหมุนเหวี่ยง ล้าง ด้วย 10 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อน้ำ resus -pended ใน 400 มล.ของบัฟเฟอร์ (0.1 M โซเดียมฟอสเฟต pH 7.2), และแช่เย็นในการแช่อย่างน้อย 30 นาทีจนกว่าพวกเขาถูกแช่แข็ง เซลล์แล้วถูกเตรียม และโอนไป Eppendorf หลอด 1.5 มิลลิลิตร ประมาณ 0.3 กรัมของกรดถือแก้วลูกปัดและเซลล์ ซึ่งถูกแล้วเพิ่ม 150 มล.ของ 0.1 M 2-mercaptoethanolหยุดชะงัก โดย vortexing เซลล์สารสกัดจากผลถูก assayed XR และ XDHกิจกรรมตามที่อธิบายไว้ โดย Bolen และ Detroy (5) และ สำหรับกิจกรรม XK ดังที่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตรวจเอนไซม์ . วิเคราะห์ 9000 xdh XK , กิจกรรม , ความเครียด , ah22 หรือฟิวชั่น 1400 transformants แบก plnh32 puckm10 , AR , puckm10-a * R ,puckm10 KD หรือ puckm10 โดยเพาะเลี้ยงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เหมาะสมความเข้มข้นของ geneticin จนถึงความหนาแน่น 200 มก. ( 20 od600 , 20 ) เซลล์ ( 10มิลลิลิตรเก็บเกี่ยวโดยปั่นล้างด้วย 10 ml ของน้ำหมันรีซัส -pended 400 มิลลิลิตร ( 0.1 โมลาร์โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ) และเย็นในแช่แข็งเป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาทีจนกว่าพวกเขาจะถูกแช่แข็ง เซลล์จึงละลายและย้ายไป 1.5-ml เพนดอร์ฟหลอด ประมาณ 0.3 กรัมกรดทำลูกปัดแก้วและ 150 ml 0.1 M อย่างเดียวถูกเพิ่มไปยังเซลล์ซึ่งเป็นแล้วรบกวนด้วย vortexing . ส่งผลให้เซลล์มีเอนไซม์และสารสกัด xdh 9000 สำหรับกิจกรรมตามที่อธิบายไว้โดย detroy โบเลน และ ( 5 ) และ XK กิจกรรมตามที่ระบุไว้