2. Materials and methods2.1. Body f

2. Materials and methods
2.1. Body fluid samples

Body fluids were collected from volunteers using procedures approved by the UCF’s Institutional Review Board. Blood, semen, saliva, vaginal secretions, menstrual blood and skin samples were collected as previously described [2]. Human skin total RNA was obtained from commercial sources: Stratagene/Agilent Technologies (Santa Clara, CA), Biochain® (Hayward, CA), Zenbio (Research Triangle Park, NC) and Zyagen (San Diego, CA).

2.2. RNA isolation and quantitation

Total RNA was extracted from body fluids using a manual organic RNA extraction (guanidine isothiocyanate-phenol:chloroform) as previously described [2]. All extracts were treated with DNase I to remove residual DNA using the Turbo DNA-freeTM kit (Life Technologies, Foster City, CA).

2.3. Next generation sequencing (NGS)

Multiplexed gene expression profiling was performed using the TruSeq® Targeted RNA expression kit (degraded RNA protocol for reverse transcription; dual indices) and custom target panels (30–55 gene targets) (Illumina, San Diego, CA). Pooled libraries were run on a MiSeq instrument (Illumina) using a MiSeq reagent kit v3 (Illumina) with 151 cycles/read. All data was analysed using the MSR Targeted RNA application (BaseSpace).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. ตัวอย่างเหลวในร่างกายร่างกายถูกเก็บรวบรวมจากอาสาสมัครที่ใช้กระบวนอนุมัติ โดยคณะกรรมการสถาบันของ UCF เลือด น้ำอสุจิ น้ำลาย หลั่งช่องคลอด เลือดประจำเดือน และผิวตัวอย่างถูกเก็บรวบรวมอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [2] RNA รวมผิวมนุษย์ได้รับจากแหล่งทางการค้า: Stratagene/Agilent เทคโนโลยี (ซานตาคลารา CA), Biochain ® (เฮย์เวิร์ด CA), Zenbio (อุทยานสามเหลี่ยมวิจัย NC) และ Zyagen (San Diego, CA)2.2. RNA แยกและการวิเคราะห์หาปริมาณรวม RNA ถูกแยกจากร่างกายของเหลวที่ใช้สกัด RNA เป็นอินทรีย์ด้วยตนเอง (guanidine isothiocyanate-ฟีนอล: คลอโรฟอร์ม) อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [2] สารสกัดจากทั้งหมดได้รับการรักษากับ DNase เป็นเอาดีเอ็นเอที่เหลือใช้โดยใช้ชุด Turbo ดีเอ็นเอ-freeTM (เทคโนโลยีชีวิต เมืองฟอสเตอร์ CA)2.3 ต่อไปลำดับรุ่น (NGS)รวบนิพจน์ multiplexed ยีนดำเนินการใช้ RNA เป้าหมาย TruSeq ®ชุดนิพจน์ (โพรโทคอล RNA ลดสำหรับถอดรหัสย้อนกลับ ดัชนีคู่) และเป้าหมายที่กำหนดเองแผง (30 – 55 ยีนเป้าหมาย) (Illumina, San Diego, CA) Pooled ไลบรารีถูกเรียกใช้บนเครื่องมือ MiSeq (Illumina) โดยใช้การ MiSeq สารชุด v3 (Illumina) กับ 151 รอบ/อ่าน ข้อมูลทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้โปรแกรม MSR RNA เป้าหมาย (BaseSpace)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . ตัวอย่างของเหลวในร่างกายของเหลวในร่างกาย เก็บข้อมูลจากอาสาสมัครโดยใช้กระบวนการอนุมัติของ UCF สถาบันทบทวนบอร์ด เลือด น้ำอสุจิ น้ำลายหลั่งเลือดประจำเดือน , ช่องคลอด , และหนังตัวอย่างตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 2 ] ผิวหนังของมนุษย์อาร์เอ็นเอทั้งหมดได้มาจากแหล่งพาณิชย์ : stratagene / Agilent Technologies ( ซานตา คลาร่า , แคลิฟอร์เนีย ) biochain ® ( เฮย์เวิร์ด ( CA ) , zenbio ( วิจัยอุทยานสามเหลี่ยม , NC ) และ zyagen ( San Diego , CA )2.2 . การแยก RNA และเซลล์อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากของเหลวในร่างกายโดยใช้การสกัดอาร์เอ็นเออินทรีย์คู่มือ ( กัวนิดีนไอโซไธโอไซยาเนต ฟีนอล : คลอโรฟอร์ม ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 2 ] สารสกัดทั้งหมดได้รับการรักษาด้วยการตรวจหา ADNase ผมเอา DNA ที่เหลือใช้ Turbo ดีเอ็นเอ freetm Kit ( เทคโนโลยี , ชีวิต Foster City ( CA )2.3 รุ่นถัดไปของลำดับ ( ภาพหลุด )การแสดงออกของยีนในการมัลติเพลกซ์มีการใช้ truseq ®เป้าหมายการแสดงออกอาร์เอ็นเอ ( RNA ) ชุดลายรีถอดความ ; ดัชนีคู่ ) และเซลล์เป้าหมายที่กําหนด ( 30 – 55 ยีนเป้าหมาย ) ( Illumina , San Diego , CA ) รวมห้องสมุดวิ่งบน miseq เครื่องดนตรี ( Illumina ) การใช้สารเคมี miseq ชุด V3 ( Illumina ) กับ 151 ครั้ง / อ่าน ข้อมูลทั้งหมดถูกวิเคราะห์โดยใช้โปรแกรม ( basespace MSR เป้าหมาย RNA )