The relatively pure osteoclastic ce

The relatively pure osteoclastic cells were cultured according to the published method (Xue et al. 2012) and then treated with or without KN (10−6, 10−7, 10−8 mol/l, respectively) for 30 min, and sub-sequently analyzed in a buffer containing 20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, protease and phosphatase inhibitors. The lysates (30–40 mg) were separated by 10% SDS PAGE and transferred to a polyvinylidene difluoride membrane. After blocking with 5% skim milk, the membrane was probed with anti-phospho IκB, ERK, JNK and p38. The same membrane was stripped and reprobed, with chemi- luminescent signals detected by a Gel Doc 2000 luminescent imageanalyzer (Wealtec Dolphin-Doc, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Osteoclastic เซลล์บริสุทธิ์ค่อนข้างถูกล้างตามวิธีการเผยแพร่ (Xue et al. 2012) แล้ว ถือว่ามี หรือไม่ มี KN (เวลา 10-6, 10−7, 10−8 mol/l ตามลำดับ) สำหรับ 30 นาที และ sequently ย่อยวิเคราะห์ในบัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วยขนาด 20 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, 150 มม. NaCl, 1% Triton X-100 โปรติเอส และฟอสฟายับยั้ง Lysates (30-40 มิลลิกรัม) ถูกคั่น ด้วย 10% SDS หน้า และโอนย้ายไปเมมเบรน difluoride polyvinylidene หลังบล็อกกับนมพร่องมันเนย 5% เมมเบรนถูกพิสูจน์ phospho ป้องกัน IκB, ERK, JNK และ p38 เมมเบรนเดียวกันถูกปล้น และ reprobed มีแพ็กเกจ - เรืองแสงสัญญาณตรวจพบ โดยเรืองแสง imageanalyzer 2000 Doc เจล (Wealtec โลมา-Doc สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ค่อนข้างบริสุทธิ์ osteoclastic เซลล์เพาะเลี้ยงตามวิธีการเผยแพร่ ( Xue et al . 2012 ) และรักษาด้วยหรือโดยไม่รู้ ( 10 − 6 , 10 − 7 , 10 − 8 โมล / ลิตร ) เป็นเวลา 30 นาที และ sequently ย่อยข้อมูลในบัฟเฟอร์ที่มีกรดไฮโดรคลอริกหรือ 20 มม. ขนาด 150 มิลลิเมตร 1% Triton X-100 , โปรตีน phosphatase และตัวยับยั้ง การ lysates ( 30 – 40 มิลลิกรัม ) ถูกแยกจากกันโดย 10% SDS หน้าและโอนไปยังีน ดิ fl uoride เมมเบรน หลังจากการปิดกั้น 5% หางนม , เมมเบรนตรวจสอบป้องกัน phospho ผมκ B , กา ��� jnk P38 , และ . แผ่นเดียวกันถูกปล้น และ reprobed ด้วยเคมี - สัญญาณเรืองแสงพบโดยเจลหมอ 2000 เรืองแสง imageanalyzer ( wealtec โลมา Doc , USA )