Virus purification. Leaves of musta

Virus purification. Leaves of mustard,
14 days after inoculation, were used for
virus purification. Viruses were purified
according to the procedures described
previously for several potyviruses (11).
Yields of virions were determined by absorbance
at 260 nm (HITACHI spectrophotometer
220S; Hitachi, Ltd., Tokyo,
Japan) and calculated using an extinction
coefficient of 2.4 for potyviruses without
light scattering correction (16). The purity
and the molecular weight of capsid protein
were analyzed by discontinuous sodium
dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS-PAGE) after treating the
purified virions with an equal volume of
dissociation buffer (250 mM Tris-HCl,
containing 2% (wt/vol) SDS, 4% (vol/vol)
2-mercaptoethanol, and 10% (wt/vol) sucrose)
as described by Laemmli (18).
Electron microscopy. Virus particles
from infected tissue extracts or purified
samples were negatively stained with 2%
uranyl acetate (pH 4.2) as described by
Christie et al. (13) and examined with an
electron microscope (HITACH H-7000;
Hitachi, Ltd.).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ไวรัสทำให้บริสุทธิ์ ใบของผักกาดวันที่ 14 หลังจาก inoculation ใช้สำหรับไวรัสทำให้บริสุทธิ์ ไวรัสที่บริสุทธิ์ตามกล่าวก่อนหน้านี้ในหลาย potyviruses (11)อัตราผลตอบแทนของ virions ถูกกำหนด โดย absorbanceที่ 260 nm (ฮิตาชิเครื่องทดสอบกรดด่าง220S ฮิตาชิ จำกัด โตเกียวญี่ปุ่น) และคำนวณโดยใช้การสูญพันธุ์สัมประสิทธิ์ของ 2.4 สำหรับ potyviruses ไม่มีแสง scattering การแก้ไข (16) ความบริสุทธิ์และน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน capsidได้วิเคราะห์ โดยโซเดียมไม่ต่อเนื่องelectrophoresis dodecyl ซัลเฟต – polyacrylamide เจล(SDS-หน้า) หลังจากการรักษาvirions บริสุทธิ์ มีปริมาณเท่ากันบัฟเฟอร์ dissociation (250 mM ตรี-HClประกอบด้วย 2% (wt/vol) SDS, 4% (vol/vol)2-mercaptoethanol และซูโครส 10% (wt/vol))ตามที่อธิบายไว้ โดย Laemmli (18)Microscopy อิเล็กตรอน อนุภาคไวรัสสารสกัดจากเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อ หรือบริสุทธิ์ตัวอย่างในเชิงลบได้สีกับ 2%uranyl acetate (pH 4.2) อธิบายไว้ด้วยคริสตี้ et al. (13) และกล่าวถึงด้วยการกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (HITACH H-7000ฮิตาชิ Ltd.)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทำให้บริสุทธิ์ไวรัส ใบของมัสตาร์ด,
14 วันหลังการฉีดวัคซีนถูกนำมาใช้สำหรับ
การทำให้บริสุทธิ์ไวรัส ไวรัสที่ถูกทำให้บริสุทธิ์
ตามขั้นตอนที่อธิบาย
. ก่อนหน้านี้สำหรับหลาย potyviruses (11)
อัตราผลตอบแทนของ virions ถูกกำหนดโดยการดูดกลืนแสง
ที่ 260 นาโนเมตร (Spectrophotometer HITACHI
220S; ฮิตาชิ จำกัด , โตเกียว,
ประเทศญี่ปุ่น) และคำนวณโดยใช้การสูญเสีย
ค่าสัมประสิทธิ์ของ 2.4 สำหรับ potyviruses โดยไม่ต้องมี
การแก้ไขกระเจิงแสง (16) ความบริสุทธิ์
และน้ำหนักโมเลกุลของโปรตีน capsid
วิเคราะห์โซเดียมต่อเนื่อง
ข่าวคราวซัลเฟต polyacrylamide โดเดซิล
(SDS-PAGE) หลังจากการรักษา
virions บริสุทธิ์ที่มีปริมาณที่เท่ากันของ
บัฟเฟอร์แยกออกจากกัน (250 มิลลิ Tris-HCl,
ที่มี 2% (น้ำหนัก / ฉบับ) SDS, 4% (ปริมาตร / ปริมาตร)
2-mercaptoethanol และ 10% (น้ำหนัก / ปริมาตร) ซูโครส)
ตามที่อธิบายไว้โดย Laemmli (18).
การใช้กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน อนุภาคไวรัส
จากสารสกัดจากเนื้อเยื่อที่ติดเชื้อหรือบริสุทธิ์
ตัวอย่างมีการย้อมลบกับ 2%
acetate uranyl (pH 4.2) ตามที่อธิบายไว้โดย
คริสตี้และคณะ (13) และการตรวจสอบด้วย
กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (HITACH H-7000;
ฮิตาชิ จำกัด )

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลิตไวรัส ใบผักกาด ,
14 วันหลังจากที่ได้รับใช้สำหรับ
ผลิตไวรัส ไวรัสบริสุทธิ์

ตามขั้นตอนที่อธิบายก่อนหน้านี้หลาย potyviruses ( 11 ) .
ผลผลิตของไวรัสถูกกำหนดโดยการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตร ( Hitachi เครื่อง

คริสต์ทศวรรษ 20 ; Hitachi , Ltd . , โตเกียว ,
ญี่ปุ่น ) และคำนวณโดยใช้ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์

potyviruses 2.4 ไม่มีแสงกระจายแก้ไข ( 16 ) ความบริสุทธิ์
และน้ำหนักโมเลกุลของแคปซิดโปรตีน
วิเคราะห์โดยสม่ำเสมอ โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต )

polyacrylamide gel electrophoresis ( SDS-PAGE ) หลังจากการรักษา
บริสุทธิ์ไวรัสที่มีขนาดเท่ากัน
การบัฟเฟอร์ ( 250 มม. หรือ HCl ,
2 เปอร์เซ็นต์ ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) ) SDS , 4 % ( ปริมาตร / ปริมาตร )
อย่างเดียว และ 10 เปอร์เซ็นต์ ( น้ำหนัก / ปริมาตร )
) ซูโครสตามที่อธิบายไว้โดย laemmli ( 18 ) .
จุลทรรศน์อิเล็กตรอน อนุภาคไวรัสที่ติดเชื้อหรือสารสกัดบริสุทธิ์จากเนื้อเยื่อ

ตัวอย่างที่ใช้ในการย้อมด้วย 2 %
ยูเรนิลอะซิเตต ( pH 4.2 ) ตามที่อธิบายไว้โดย
คริสตี้ et al . ( 13 ) และตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน ( hitach h-7000
;
Hitachi , Ltd . )