Leaves were ground to a fine powder

Leaves were ground to a fine powder in liquid nitrogen and mixed with an equal volume of 2×SDS sample buffer (0.125 M Tris-HCl, pH 6.8, 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2 mercaptoethanol, 0.01% bromophenol blue). The homogenized sample was incubated at 95°C for 5 min and centrifuged for 5 min at 14,000 rpm. Equal volumes of each supernatant were loaded into wells of a 12% SDS-PAGE gel and subjected to electrophoresis at 4 V/cm. Proteins separated by the gel were transferred to an Immobilon-P PVDF membrane
(Millipore, MA USA) using a wet-type blotting apparatus followed by incubation in TBE blocking solution with 5%
skimmed milk for 1 h. HA-PYR1 and p19-HA proteins were
detected using an anti-HA monoclonal antibody conjugated
with peroxidase (Roche, Basel Switzerland). Venus protein
was detected using the anti-Green Fluorescent Protein (GFP)
polyclonal antibody (Abcam, Cambridge, UK) and the antirabbit
IgG peroxidase-linked antibody (GE Healthcare, Little
Chalfont, UK) as the primary and secondary antibodies,
respectively. Bands were visualized using the enhanced
chemiluminescence (ECL) prime reagent (GE Healthcare)
according to manufacturer’s instructions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ใบไม้ก็จะเป็นผงละเอียดในไนโตรเจนเหลว และผสม ด้วยปริมาณเท่ากับ 2 × SDS อย่างบัฟเฟอร์ (0.125 M ทริสเรทติ้ง HCl, pH 6.8, 4% SDS กลีเซอร 20%, 10% 2 mercaptoethanol, 0.01% bromophenol blue) ตัวอย่าง homogenized เป็นกลุ่ม incubated ที่ 95° C สำหรับ 5 นาที และ centrifuged ใน 5 นาทีที่ 14000 รอบต่อนาที วอลุ่มเท่าของ supernatant ละถูกโหลดลงในบ่อของเจ SDS-หน้า 12% และอยู่ภายใต้การ electrophoresis ใน 4 V / ซม.โดยเจโปรตีนถูกโอนย้ายไปเมมเบรน PVDF Immobilon-P(มาก MA USA) โดยใช้อุปกรณ์ชนิดเปียก blotting ตาม ด้วยฟักตัวใน TBE บล็อกด้วย 5%นมขาดมันเนย 1 h. HA PYR1 และ p19 HA โปรตีนได้ตรวจพบการใช้ป้องกันตัว-ฮา แอนติบอดี monoclonal กลวงมี peroxidase (โร บาเซิลสวิตเซอร์แลนด์) โปรตีนวีนัสพบโดยใช้การป้องกันสีเขียวเรืองแสงโปรตีน (GFP)polyclonal แอนติบอดี (Abcam เคมบริดจ์ สหราชอาณาจักร) และที่ antirabbitเชื่อมโยง peroxidase แอนติบอดี igG (GE สุขอนามัย น้อยชาร์ฟอร์นเซน สหราชอาณาจักร) เป็นแอนตี้หลัก และรองตามลำดับ วงมี visualized การใช้ที่เพิ่มขึ้นรีเอเจนต์เฉพาะ chemiluminescence (ECL) (GE สุขภาพ)ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ใบมาบดให้เป็นผงละเอียดในไนโตรเจนเหลวและผสมกับปริมาณที่เท่ากันของ 2 ×บัฟเฟอร์ตัวอย่าง SDS (0.125 M Tris-HCl, pH 6.8, 4% SDS, กลีเซอรีน 20%, 10% 2 mercaptoethanol 0.01% bromophenol สีฟ้า) . กลุ่มตัวอย่างที่หดหายถูกบ่มที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและปั่นเป็นเวลา 5 นาทีที่ 14,000 รอบต่อนาที ปริมาณที่เท่ากันของแต่ละใสถูกโหลดลงในหลุมของเจล 12% SDS-PAGE และยัดเยียดให้อิที่ 4 V / cm โปรตีนที่แยกจากกันโดยเจลถูกย้ายไปยังเมมเบรน PVDF Immobilon-P
(คซาชูเซตส์สหรัฐอเมริกา) โดยใช้เครื่องช่วยซับชนิดเปียกตามด้วยการบ่มในการแก้ปัญหาการปิดกั้น TBE 5%
นมไขมันต่ำเป็นเวลา 1 ชั่วโมง HA-PYR1 และโปรตีน P19-HA
ถูกตรวจพบโดยใช้แอนติบอดีต่อต้านHA
ผันกับperoxidase (Roche, บาเซิลวิตเซอร์แลนด์) โปรตีนวีนัสถูกตรวจพบโดยใช้ต่อต้านโปรตีนเรืองแสงสีเขียว (GFP) แอนติบอดีโพลี (Abcam เคมบริดจ์, สหราชอาณาจักร) และ antirabbit IgG แอนติบอดี peroxidase เชื่อมโยง (GE Healthcare เล็ก ๆ น้อย ๆChalfont สหราชอาณาจักร) เป็นแอนติบอดี้ประถมศึกษาและมัธยมศึกษาตามลำดับ วงดนตรีที่ได้รับการมองเห็นการใช้ที่เพิ่มขึ้นchemiluminescence (ECL) สารสำคัญ (GE Healthcare) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ใบพื้นเพื่อผงละเอียดในไนโตรเจนเหลว และผสมกับปริมาณเท่ากับ 2 × SDS ตัวอย่างบัฟเฟอร์ ( 0.125 เมตรโดย HCl , pH 6.8 , 4 % SDS , 20 % กลีเซอรอล 10 % 2 mercaptoethanol โบรโมฟีน 0.01 % , สีฟ้า ) การบดตัวอย่างที่บ่มที่อุณหภูมิ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาทีและไฟฟ้าสำหรับ 5 นาทีที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีปริมาณเท่ากันของแต่ละน่านถูกโหลดลงในหลุมของเจล SDS-PAGE 12% และภายใต้วิธีที่ 4 โวลท์ / เซนติเมตร โปรตีน แยกด้วยเจลถูกย้ายไป
immobilon-p เมมเบรน PVDF ( มิลลิ , MA USA ) ใช้ชนิดเปียก blotting เครื่องมือตามบ่มในทีบีบล็อกโซลูชั่น 5%
นมเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ha-pyr1 และโปรตีน p19 ถูก
ฮาตรวจพบโดยใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านฮา conjugated
กับเปอร์ออกซิเดส ( โรช , Basel สวิตเซอร์แลนด์ ) ดาวศุกร์โปรตีน
พบใช้ต่อต้านโปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( GFP )
ใช้แอนติบอดี ( ABCAM , เคมบริดจ์ , UK ) และเอนไซม์แอนติบอดี IgG antirabbit
เชื่อมโยง ( GE สุขภาพน้อย
ริดสีดวงทวาร , UK ) เป็นแอนติบอดีประถมศึกษาและมัธยมศึกษา
ตามลำดับภาพที่ใช้รัดเพิ่ม
เคมีลูมิเนสเซนต์ ( ECL ) นายกรัฐมนตรีรีเอเจนต์ ( GE Healthcare )
ตามคำแนะนำของผู้ผลิต