MYB23 Localizes to the Nucleus of N

MYB23 Localizes to the Nucleus of N-Position Epidermal Cells As a predicted transcription factor protein produced from N cell– specific transcripts, MYB23 may be expected to localize and act within the nucleus of cells in the N position of the root epidermis. On the other hand, some transcription factors participating in root epidermal cell specification (e.g., CPC and GL3) are able to move from cell to cell (Bernhardt et al., 2005; Kurata et al., 2005). To define the location of the MYB23 protein, we generated and analyzed a transgenic line bearing an in-frame MYB23-GFP (for green fluorescent protein) reporter translational fusion (PMYB23: MYB23-GFP) (Figure 3A). This transgene was expressed under the control of MYB23 regulatory sequences (3.1-kb 59 flanking DNA fragment and 1.0-kb 39 flanking DNA fragment) previously determined to be sufficient in genomic complementation experiments to rescue the trichome-branching defect in the myb23 mutant (Kirik et al., 2005). We found that this translational fusion was able to rescue the branching defect in the myb23 mutant trichomes (Figure 3B), indicating that the MYB23-GFP protein functions like the native MYB23 in Arabidopsis. Analysis of the PMYB23:MYB23-GFP plants showed that GFP fluorescence was present in the nucleus of the developing root epidermal cells located in the N position (Figure 3C). As a negative control, we generated a GFP transcriptional fusion driven by the same regulatory sequences that were used for the PMYB23:MYB23-GFP construction (PMYB23: GFP), which exhibited fluorescence generally distributed throughout the cells (Figure 3C). This overall distribution seems to be caused by the nonspecific diffusion of the GFP, which is expressed in the N-position cells, based on the fact that the fluorescent signal from the endoplasmic reticulum (ER)–targeted GFP driven by the same regulatory sequences is found only in the N-position cells (Figure 3C, inset). These results indicate that the MYB23 protein accumulates in the nuclei of the developing non-hair cells and does not move from cell to cell.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

MYB23 Localizes การนิวเคลียสของ N ตำแหน่งผิวหนังเซลล์เป็น โปรตีนปัจจัยทำนายถอดผลิตจากใบเซลล์ – เฉพาะ N, MYB23 อาจต้องจำกัด และดำเนินการภายในนิวเคลียสของเซลล์ในตำแหน่ง N ของผิวราก บนมืออื่น ๆ ปัจจัยการถอดรหัสในรากข้อมูลจำเพาะของเซลล์ผิวหนัง (เช่น CPC และ GL3) จะย้ายจากเซลล์ไปยังเซลล์ (ราห์แบร์นฮาร์ด et al. 2005 การแปรผัน et al. 2005) เพื่อกำหนดตำแหน่งของโปรตีน MYB23 เราสร้างขึ้น และวิเคราะห์เส้นจำลองลูกปืนตัวในกรอบ MYB23-GFP (สำหรับโปรตีนเรืองแสงสีเขียว) ข่าวไทหมิงฟิวชั่น (PMYB23: MYB23 GFP) (รูปที่ 3A) Transgene นี้ถูกแสดงภายใต้การควบคุมของ MYB23 ระเบียบลำดับ (59 3.1 kb โล่งส่วนดีเอ็นเอและ 39 1.0 kb โล่งดีเอ็นเอแยกส่วน) ที่กำหนดไว้ก่อนหน้านี้จะเพียงพอในการทดลองการ complementation กู้แยก trichome ข้อบกพร่องในการกลายพันธุ์ myb23 (Kirik et al. 2005) เราพบว่า ฟิวชั่นไทหมิงนี้สามารถช่วยชีวิตบกพร่องด้านใน trichomes กลายพันธุ์ myb23 (รูปที่ 3B), ระบุว่า การทำงานของโปรตีน MYB23 GFP เช่น MYB23 เจ้าใน Arabidopsis การวิเคราะห์ของ PMYB23:MYB23 การ-GFP พืชพบว่า GFP เรืองแสงมีอยู่ในนิวเคลียสของเซลล์ผิวหนังรากกำลังพัฒนาอยู่ในตำแหน่ง N (รูปที่ 3C) เป็นตัวควบคุมค่าลบ เราสร้างฟิวชั่น transcriptional GFP ขับเคลื่อน โดยลำดับระเบียบเดียวกันที่ใช้สำหรับการ PMYB23:MYB23-ก่อสร้าง GFP (PMYB23: GFP), ซึ่งกุมารทั่วไปกระจายทั่วเซลล์ (รูปที่ 3C) เรืองแสง การแจกจ่ายนี้โดยรวมน่าจะเกิดจากแพร่เจาะจงของ GFP แสดงในเซลล์ตำแหน่ง N ตามในที่หลอดฟลูออเรสเซนต์ที่สัญญาณจากการกเรติ (ER) – GFP เป้าหมายขับเคลื่อน โดยลำดับระเบียบเดียวที่พบเฉพาะในเซลล์ตำแหน่ง N (รูปที่ 3C สอด) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า โปรตีน MYB23 สะสมในนิวเคลียสของการพัฒนาไม่ใช่ผมเซลล์ และย้ายจากเซลล์ไปยังเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

MYB23 localizes กับนิวเคลียสของ N-Epidermal ตำแหน่งเป็นเซลล์ถอดความโปรตีนปัจจัยที่คาดการณ์ไว้ที่ผลิตจากเซลล์ N จิตบำบัดเฉพาะ MYB23 อาจจะคาดว่าจะ จำกัด วงและทำหน้าที่ภายในนิวเคลียสของเซลล์ในตำแหน่ง N ของหนังกำพร้าราก ในทางกลับกันบางถอดความปัจจัยที่เข้าร่วมโครงการในรากเปเซลล์ผิวหนัง (เช่น CPC และ GL3) สามารถที่จะย้ายจากเซลล์ไปยังเซลล์ (แบร์นฮาร์ด et al, 2005;.. คุราตะ, et al, 2005) ในการกำหนดสถานที่ตั้งของโปรตีน MYB23 ที่เราสร้างและวิเคราะห์เส้นดัดแปรพันธุกรรมแบริ่งในกรอบ MYB23-GFP (โปรตีนเรืองแสงสีเขียว) ผู้สื่อข่าวแปลฟิวชั่น (PMYB23: MYB23-GFP) (รูปที่ 3A) ยีนนี้ถูกแสดงออกภายใต้การควบคุมของ MYB23 ลำดับการกำกับดูแล (3.1 กิโลไบต์ 59 ขนาบชิ้นดีเอ็นเอและ 1.0 กิโลไบต์ 39 ขนาบชิ้นดีเอ็นเอ) กำหนดไว้ก่อนหน้านี้จะเพียงพอในการทดลอง complementation จีโนมที่จะช่วยข้อบกพร่อง trichome แขนงในกลายพันธุ์ myb23 นี้ (Kirik et al., 2005) เราพบว่าฟิวชั่นนี้แปลก็สามารถที่จะช่วยชีวิตข้อบกพร่องแตกแขนงใน myb23 trichomes กลายพันธุ์ (รูปที่ 3B) แสดงให้เห็นว่า MYB23-GFP ฟังก์ชั่นที่มีโปรตีนเช่น MYB23 พื้นเมืองใน Arabidopsis การวิเคราะห์ของ PMYB23: พืช MYB23-GFP แสดงให้เห็นว่า GFP เรืองแสงถูกนำเสนอในนิวเคลียสของเซลล์ผิวหนังพัฒนารากอยู่ในตำแหน่ง N (รูปที่ 3C) เป็นตัวควบคุมเชิงลบเราสร้าง GFP ฟิวชั่นแรงผลักดันจากการถอดรหัสลำดับเดียวกันกฎระเบียบที่ถูกนำมาใช้สำหรับ PMYB23 นี้: การก่อสร้าง MYB23-GFP (PMYB23: GFP) ซึ่งแสดงเรืองแสงกระจายทั่วไปตลอดทั้งเซลล์ (รูปที่ 3C) นี้จัดจำหน่ายโดยรวมดูเหมือนว่าจะเกิดจากการแพร่กระจายของเชิญชม GFP ซึ่งจะแสดงในเซลล์ N-ตำแหน่งขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าสัญญาณเรืองแสงจาก endoplasmic reticulum (ER) GFP -targeted ขับเคลื่อนโดยลำดับกฎระเบียบเดียวกัน พบเฉพาะในเซลล์ N-ตำแหน่ง (รูปที่ 3C สอด) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่าโปรตีน MYB23 สะสมในนิวเคลียสของเซลล์พัฒนาไม่ใช่ผมและจะไม่ย้ายจากเซลล์ไปยังเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

myb23 localizes กับนิวเคลียสของเซลล์ epidermal ถอดความปัจจัยทำนาย n-position เป็นโปรตีนที่ผลิตจากเซลล์โดยเฉพาะ คำว่า บันทึก myb23 คาดว่าอาจจะ จำกัด และกฎหมายภายในนิวเคลียสของเซลล์ใน N ตำแหน่งของราก หนังกําพร้า บนมืออื่น ๆ , บางปัจจัย transcription ที่เข้าร่วมในเซลล์รากสเปค epidermal ( เช่น CPC และ gl3 ) จะสามารถย้ายจากเซลล์ ( แบร์นฮาร์ด et al . , 2005 ; คุราตะ et al . , 2005 ) การกำหนดตำแหน่งของ myb23 โปรตีน ที่เราสร้างขึ้น และวิเคราะห์ข้อมูลพันธุกรรมสายแบริ่งในกรอบ myb23-gfp ( โปรตีนเรืองแสงสีเขียว ) นักข่าวแปลฟิวชั่น ( pmyb23 : myb23-gfp ) ( รูปที่ 3 ) ยีนนี้ถูกแสดงภายใต้ การควบคุมของ myb23 กฎระเบียบดังนี้ ( 3.1-kb 59 flanking ชิ้นส่วนดีเอ็นเอชิ้นส่วนดีเอ็นเอ และ 1.0-kb 39 จ ) ก่อนหน้านี้ตั้งใจจะเพียงพอในการทดลองสร้างเอนไซม์เพื่อช่วยรูปร่างแยกของเสียใน myb23 กลายพันธุ์ ( kirik et al . , 2005 ) เราพบว่าฟิวชั่นแปลนี้สามารถช่วยย่อยของเสียใน myb23 กลายพันธุ์ ไตรโคม ( รูปที่ 3B ) แสดงว่าโปรตีน myb23-gfp ฟังก์ชันเหมือน myb23 พื้นเมืองใน Arabidopsis . การวิเคราะห์ pmyb23 : myb23-gfp พืชพบว่า GFP เรืองแสงอยู่ในนิวเคลียสของการพัฒนาเซลล์รากตรงอยู่ในตำแหน่ง N ( รูปที่ 3 ) เป็นชุดควบคุมลบ เราสร้าง GFP particle ฟิวชั่นขับเคลื่อนด้วยกฎระเบียบเดียวกัน ลำดับ ที่ใช้สำหรับ pmyb23 : การก่อสร้าง myb23-gfp ( pmyb23 : GFP ) ซึ่งโดยทั่วไปมีการกระจายทั่วเซลล์ ( รูปที่ 3 ) การกระจายโดยรวมนี่น่าจะเกิดจากการแพร่กระจายของการติดเชื้อของ GFP ซึ่งแสดงออกในเซลล์ n-position ขึ้นอยู่กับความจริงที่ว่าสัญญาณฟลูออเรสเซนต์จาก endoplasmic reticulum ( ER ) –เป้าหมาย GFP ขับเคลื่อนโดยลำดับเดียวกันซึ่งพบเฉพาะในเซลล์ n-position ( รูปที่ 3 C , สิ่งที่ใส่เข้าไป ) ผลลัพธ์เหล่านี้บ่งชี้ว่า myb23 โปรตีนที่สะสมอยู่ในนิวเคลียสของเซลล์และการพัฒนา ไม่ใช่ผมไม่ย้ายจากเซลล์ไปยังเซลล์