and 0.55% (w/v) to replace carbon a

and 0.55% (w/v) to replace carbon and nitrogen sources,respectively. Protease yield was determined after 72 h ofincubation at 37◦C with shaking at 150–200 rpm. Afterproduction, the yield was estimated quantitatively.2.6. Separation and purification of proteaseThe culture was harvested after 2 days’ growth atroom temperature. The crude enzyme preparation wassubjected to ammonium sulphate precipitation, and theharvested culture was filtered through Whatman no. 1filter paper of pore size 125 mm and centrifuged (REMIC-24BL) at 5000 rpm for 30 min at 4◦C. Ammoniumsulphate was added slowly to the cell-free culture fil-trate at 75% saturation to precipitate the protein, withcontinuous shaking and a magnetic stirrer. The precipi-tated protein was separated by centrifugation at 5000 rpmfor 30 min and was dissolved in 0.5 mmol/L phosphatebuffer, pH 7, dialysed and stored. This source of crudeenzyme was used for further enzyme characterization. Ateach step, the protease activity and total protein contentwere measured in an ultraviolet spectrophotometer.2.7. Quantitative assay of proteaseThe protease activity in the culture filtrate of B. sub-tilis was assayed in a mixture containing 0.5 mL of 0.65%gelatin as the substrate and 1 mL of cell-free culturefiltrate as the enzyme source. The mixture was incu-bated at 37◦C for 10 min, and then 5 mL of 110 mmol/Ltrichloroacetic acid (TCA) were added to the reactionmixture to terminate the enzyme reaction. The reactionmixture was centrifuged (REMI C-24BL) at 5000 rpmfor 30 min, and the supernatant was collected. To 2 mLof supernatant, 5 mL of alkaline solution (500 mmol/L ofNa2CO3) and 1 mL of 25% Folin phenol reagent (25 mLof reagent diluted with 100 mL of glass-distilled waterbefore use) were added and the mixture was incubatedat room temperature. After 30 min, the protease activ-ity was read at 650 nm in a spectrophotometer (U-2900UV/VIS). Simultaneous controls containing enzyme,heat-killed enzyme and substrate were maintained. Oneunit of protease activity was defined as the amount ofenzyme required to liberate 1 mol tyrosine/mL per min.The protein content of the culture filtrate was estimatedby the dye-binding method of Bradford [34].Enzyme activity was calculated from the formula

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

และ 0.55% (w/v) แทนแหล่งคาร์บอนและไนโตรเจน ตามลำดับ ผลผลิตรติเอสถูกกำหนดหลังจาก ofincubation 72 h ที่ 37◦C กับสั่นที่ 150-200 รอบต่อนาที Afterproduction ผลผลิตได้ประมาณ quantitatively.2.6 แยกและทำให้บริสุทธิ์ของวัฒนธรรม proteaseThe ถูกเก็บเกี่ยวหลังจากอุณหภูมิ atroom เจริญเติบโต 2 วัน Wassubjected เตรียมเอนไซม์ดิบแอมโมเนียมซัลเฟตฝน และ theharvested วัฒนธรรมถูกกรองผ่าน Whatman หมายเลข 1filter กระดาษของรูพรุนขนาด 125 มม.และ centrifuged (REMIC-24BL) ที่ 5000 รอบต่อนาทีใน 30 นาทีที่ 4◦C Ammoniumsulphate ถูกเพิ่มช้าลงไฟล์-trate วัฒนธรรมเซลล์อิสระที่เข้ม 75% เพื่อ precipitate โปรตีน withcontinuous สั่น และช้อนคนแม่เหล็ก โปรตีน precipi tated ถูกคั่น ด้วย centrifugation ที่ 5000 rpmfor 30 นาที และละลายใน 0.5 mmol/L phosphatebuffer, pH 7, dialysed และเก็บไว้ แหล่งนี้ของ crudeenzyme ถูกใช้สำหรับเพิ่มเติมเอนไซม์จำแนก Ateach ขั้นตอน กิจกรรมรติเอสและโปรตีนรวม contentwere ใน spectrophotometer.2.7 มีรังสีอัลตราไวโอเลต วิเคราะห์เชิงปริมาณของกิจกรรมรติเอส proteaseThe ในสารกรองวัฒนธรรมของ tilis ย่อยเกิดถูก assayed ใน 0.5 mL ของ 0.65%gelatin กับพื้นผิว และ 1 mL ของฟรีเซลล์ culturefiltrate เป็นแหล่งเอนไซม์ที่ประกอบด้วยส่วนผสม ส่วนผสมคือ bated incu ที่ 37◦C สำหรับ 10 นาที และ 5 มิลลิลิตรของกรด mmol/Ltrichloroacetic 110 (TCA) ถูกเพิ่มเข้าไป reactionmixture เพื่อหยุดปฏิกิริยาเอนไซม์ Reactionmixture ถูก centrifuged (REMI C-24BL) ที่ 5000 rpmfor 30 นาที และ supernatant ถูกเก็บรวบรวม ไป 2 mLof ที่ supernatant เพิ่ม 1 mL ของรีเอเจนต์วาง Folin 25% (25 mLof รีเอเจนต์ผสมกับ 100 mL ใช้กลั่นแก้ว waterbefore) และ 5 mL ของละลายด่าง (500 mmol/L ofNa2CO3) และส่วนผสมอุณหภูมิห้อง incubatedat หลังจาก 30 นาที รติเอส activ-ity ถูกอ่านที่ 650 nm ในเครื่องทดสอบกรดด่าง (U-2900UV/VIS) เอนไซม์ เอนไซม์ฆ่าความร้อน และพื้นผิวควบคุมพร้อมถูกรักษาไว้ Oneunit รติเอสกิจกรรมถูกกำหนดเป็น ofenzyme ยอดเงินที่ต้องปลดปล่อย 1 โมล tyrosine/mL ต่อนาที โปรตีนของสารกรองวัฒนธรรมถูก estimatedby วิธีผูกย้อมของแบรดฟอร์ด [34] เอนไซม์ถูกคำนวณจากสูตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

และ 0.55 % ( w / v ) เพื่อแทนที่แหล่งคาร์บอนและไนโตรเจน ตามลำดับ ผลผลิตเอนไซม์โปรตีเอส ตัดสินใจหลังจาก 72 ชั่วโมง ofincubation ที่ 37 องศาเซลเซียส ◦เขย่า 150 – 200 รอบต่อนาที afterproduction ผลตอบแทนอยู่ที่ประมาณ 31 . 2.6 การแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของวัฒนธรรม proteasethe เก็บเกี่ยวหลังจาก 2 วัน การเจริญเติบโต atroom อุณหภูมิเอนไซม์ที่เตรียม wassubjected กับแอมโมเนียมซัลเฟตตกตะกอน และ theharvested วัฒนธรรมถูกกรองผ่าน whatman ไม่ 1filter กระดาษ 125 มิลลิเมตร และขนาดของรูพรุนระดับ ( remic-24bl ) ที่ 5 , 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ◦ C แอมโมเนียมซัลเฟตเพิ่มอย่างช้าๆเพื่อวัฒนธรรมการสังเคราะห์ใน trate 75% การตกตะกอนโปรตีน , สั่นและหมุน - แม่เหล็กการ precipi tated โปรตีนแยกโดยการเหวี่ยงแยกที่ 5 , 000 rpmfor 30 นาทีและละลายได้ใน 0.5 มิลลิโมล / ลิตรโมลาร์พีเอช 7 , dialysed และเก็บไว้ แหล่ง crudeenzyme ถูกใช้สำหรับการหาเอนไซม์เพิ่มเติม มลภาวะและขั้นตอน , protease activity contentwere โปรตีนรวมวัดในรังสีอัลตราไวโอเลตวัสดุ ปีวิเคราะห์เชิงปริมาณของกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอส proteasethe ใน culture filtrate ของ บ. ย่อย tilis ซีรั่มในส่วนผสมที่มี 0.5 ml 0.65 % เจลาตินเป็นฐานรอง 1 มิลลิลิตร และการสังเคราะห์เอนไซม์ culturefiltrate เป็นแหล่งที่มา ส่วนผสม incu ลด 37 ◦ C เป็นเวลา 10 นาที และ 5 ml 110 มิลลิโมล / ltrichloroacetic acid ( TCA ) ถูกเพิ่มไปยัง reactionmixture ยุติเอนไซม์ปฏิกิริยาการ reactionmixture คือระดับ ( เรมิ c-24bl ) ที่ 5 , 000 rpmfor 30 นาที และนำกำลังรวบรวม 2 mlof น่าน 5 มิลลิลิตรของสารละลายด่าง ( 500 มิลลิโมล / ลิตร ofna2co3 ) และ 1 มิลลิลิตร 25% folin ฟีนอล 3 ( 25 mlof สารเคมีเจือจางด้วย 100 ml ของแก้วกลั่น waterbefore ใช้ ) เพิ่มส่วนผสม คือ อุณหภูมิของห้อง incubatedat . หลังจาก 30 นาทีActiv ity คืออ่านที่โปร 650 nm ในเครื่อง ( u-2900uv / VIS ) การควบคุมพร้อมกันประกอบด้วย เอนไซม์ เอนไซม์และสารความร้อนฆ่าถูกเก็บรักษาไว้ oneunit กิจกรรมเอนไซม์โปรติเอสถูกกำหนดไว้เป็นจำนวนเงิน ofenzyme ต้องปลดปล่อย 1 มิลลิลิตรต่อนาทีต่อ  แต่อย่างใด ปริมาณโปรตีนของ culture filtrate คือ estimatedby ย้อมผูกวิธี Bradford [ 34 ]กิจกรรมของเอนไซม์คำนวณได้จากสูตร