2.2. Strain typing by RAPD-PCRFor e

2.2. Strain typing by RAPD-PCR
For each isolate, a loopful of cells grown on MRS agar was suspended
in 200 ml of 6% Chelex-100 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA),
heated at 100 C for 10 min, cooled on ice and centrifuged at
14,000 g for 10 min. Fifty microlitres of the supernatants (containing the DNA) were used as PCR templates. RAPD-PCR
analysis was performed with random primers KS, M13R2, R5 and
CC1 (Table 1). Each 25-ml PCR reaction contained 2.5 ml of 10 PCR
buffer, 3.5 mmol l1 of MgCl2, 0.2 mmol l1 of each dNTP,
0.8 mmol l1 of primer, 1 mg ml1 of BSA, 1 U of TAQ polymerase
(Invitrogen, Merelbeke, Belgium) and 2 ml of DNA.
The amplification program consisted of 2 min at 95 C and 40
cycles of denaturation at 95 C for 30 s (for M13R2 and KS) or for
1 min (for CC1 and R5), annealing for 1 min (Table 1) and elongation
at 72 C (1.5 min for M13R2 and KS and 2 min for CC1 and R5),
followed by a final elongation at 72 C for 5 min (primer M13R2) or
7 min (primers KS, CC1 and R5). GeneAmp PCR System 2700
(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) was used.
PCR products were separated by the QIAxcel System (QIAGEN,
Hilden, Germany) using a DNA Screening Cartridge and the AM320
separation method. RAPD profiles were normalised and analysed
with InfoQuest FP software version 4.5 (Bio-Rad Laboratories,
Hercules, CA, USA). Isolates from a single infant showing the same
band pattern on RAPD analysis were considered to belong to the
same genotype.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. สายพันธุ์พิมพ์ โดยเทคนิค RAPDสำหรับแต่ละ isolate, loopful ของเซลล์ที่เติบโตบนอาหารเลี้ยงเชื้อ MRS ถูกระงับใน 200 มล. 6% Chelex -100 (Bio-ล้อ เฮอร์คิวลิส CA, USA),ความร้อน 100 c เป็นเวลา 10 นาที ระบายความร้อนด้วยน้ำแข็ง และผลิตภัณฑ์ที่14,000 กรัมสำหรับ 10 นาทีห้าสิบ microlitres ของ supernatants (ประกอบด้วยดีเอ็นเอ) ถูกใช้เป็นแม่แบบ PCR เทคนิคอาร์เอพีดีทำการวิเคราะห์ ด้วยสุ่มไพรเมอร์ KS, M13R2, R5 และCC1 (ตารางที่ 1) ปฏิกิริยา PCR แต่ละ 25 ml มีอยู่ 2.5 มล.ของ 10 PCRบัฟเฟอร์ 3.5 mmol l 1 ของ MgCl2, 0.2 mmol l 1 ของแต่ละ dNTP0.8 mmol l 1 ของไพรเมอร์ พอลิเมอเรส U TAQ 1, ml 1 mg 1 ของบีเอสเอ(Invitrogen, Merelbeke เบลเยียม) และดีเอ็นเอ 2 mlขยายโปรแกรมที่ประกอบด้วย 2 นาทีที่ 95 C และ 40รอบของการแปรสภาพที่ 95 C 30 s (สำหรับ M13R2 และ KS) หรือ1 นาที (สำหรับ CC1 และ R5), หลอม 1 นาที (ตารางที่ 1) และการยืดตัวที่ 72 C (1.5 นาทีสำหรับ M13R2 และ KS และ 2 นาทีสำหรับ CC1 และ R5),ตาม ด้วยการยืดตัวสุดท้าย 72 c เป็นเวลา 5 นาที (รองพื้น M13R2) หรือ7 นาที (ไพรเมอร์ KS, CC1 และ R5) ระบบ GeneAmp PCR 2700ใช้ (ศาสตร์เชิงชีวภาพประยุกต์ เมืองฟอสเตอร์ CA, USA)ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกคั่น ด้วยระบบ QIAxcel (QIAGENHilden เยอรมนี) โดยใช้ตลับหมึกตรวจดีเอ็นเอและการ AM320วิธีการแยก อาร์เอพีดีโพรไฟล์ได้ทราบ และวิเคราะห์กับบริษัทอินโฟเควสท์ FP ซอฟต์แวร์เวอร์ชั่น 4.5 (เชื้อเฮอร์คิวลิส CA, USA) แยกจากเด็กเดียวแสดงเดียวกันรูปแบบวงการ RAPD วิเคราะห์พิจารณาว่าเป็นของจีโนไทป์เดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 สายพันธุ์พิมพ์โดย RAPD-PCR
สำหรับแต่ละแยกเป็น loopful ของเซลล์ที่ปลูกใน MRS agar ถูกระงับ
ใน 200 มล. 6% Chelex? -100 (Bio-Rad, Hercules, CA, USA)
ความร้อนที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที เย็นบนน้ำแข็งและหมุนเหวี่ยงที่
14,000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที ห้าสิบ microlitres ของ supernatants (ที่มีดีเอ็นเอ) ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบ PCR RAPD-PCR
วิเคราะห์ได้ดำเนินการกับไพรเมอร์แบบสุ่ม KS, M13R2, R5 และ
CC1 (ตารางที่ 1) แต่ละ 25 มล. PCR ปฏิกิริยาที่มีอยู่ 2.5 มล. 10? PCR
บัฟเฟอร์ 3.5 มิลลิโมลต่อลิตร 1 ของ MgCl2 0.2 มิลลิโมลต่อลิตร 1 ของแต่ละ dNTP,
0.8 มิลลิโมลต่อลิตร 1 ของไพรเมอร์ 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร 1 ของบีเอสเอ 1 U ของ Taq โพลิเมอร์
(Invitrogen, Merelbeke, เบลเยียม) และ 2 มล. ดีเอ็นเอ.
โปรแกรมขยายประกอบด้วย 2 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและ 40
รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที (สำหรับ M13R2 และ KS) หรือ
1 นาที (สำหรับ CC1 และ R5) หลอมเป็นเวลา 1 นาที (ตารางที่ 1) และการยืดตัว
ที่ 72? C (1.5 นาที M13R2 และ KS และ 2 นาทีสำหรับ CC1 และ R5)
ตามมาด้วยการยืดตัวสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที (ไพรเมอร์ M13R2) หรือ
7 นาที (KS ไพรเมอร์, CC1 และ R5 ) GeneAmp PCR ระบบ 2700
(Applied Biosystems, ฟอสเตอร์ซิตี, แคลิฟอร์เนีย, สหรัฐอเมริกา) ถูกนำมาใช้.
ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกออกโดยระบบ QIAxcel (QIAGEN,
ฮิลเดน, เยอรมนี) โดยใช้ตลับดีเอ็นเอคัดกรองและ AM320
วิธีการแยก โปรไฟล์ดีเอ็นเอเป็นปกติและวิเคราะห์
ด้วย INFOQUEST? ซอฟแวร์ FP รุ่น 4.5 (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ,
Hercules, CA, USA) แยกจากทารกเดียวแสดงเดียวกัน
รูปแบบวงดนตรีในการวิเคราะห์ดีเอ็นเอได้รับการพิจารณาว่าเป็นของ
จีโนไทป์เดียวกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . พิมพ์ชื่อเรื่องความเครียดโดยสำหรับแต่ละแยก เป็น loopful เซลล์ที่ปลูกบนนางวุ้นถูกระงับใน 200 ml 6 % chelex-100 ( ไบโอ ราด , Hercules , CA , USA )อุณหภูมิ 100 C 10 นาที เย็นแข็งและไฟฟ้าที่14 , 000 กรัมต่อ 10 นาทีห้าสิบ microlitres ของ supernatants ( ที่มี DNA PCR ) ถูกใช้เป็นแม่แบบ ชื่อเรื่องการวิเคราะห์ด้วยวิธีสุ่ม KS , m13r2 , r5 และcc1 ( ตารางที่ 1 ) แต่ละ 25 มิลลิลิตรเพื่อตรวจหาที่มีอยู่ 2.5 มล. 10 ดีเอ็นเอบัฟเฟอร์ 3.5 มิลลิโมล L1 ไอโซโทป , 0.2 มิลลิโมลของแต่ละ dntp L1 ,0.8 มิลลิโมล L1 ไพรเมอร์ 1 มิลลิกรัม ml1 บีเอสเอ 1 U ของทัค พอลิเมอเรส( Invitrogen merelbeke , เบลเยียม ) และ 2 ml ของดีเอ็นเอโปรแกรมขยายเป็น 2 นาทีที่ 95 องศาเซลเซียสและ 40รอบ ( 95 C 30 ( สำหรับ m13r2 และ KS ) หรือ1 นาที ( สำหรับขนาดและ cc1 R5 ) 1 นาที ( ตารางที่ 1 ) และการยืดตัว72 C ( 1.5 มิน m13r2 และ KS และ 2 นาทีและ cc1 R5 )ตามด้วยการยืดตัวสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ( ไพรเมอร์ m13r2 ) หรือ7 นาที ( ไพรเมอร์และ KS , cc1 R5 ) ระบบตรวจ geneamp 2700 บาท( Applied Biosystems ฟอสเตอร์ ซิตี้ , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) คือใช้ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกแยกออกโดยระบบ ( เพิ่ม qiaxcel ,ฮิลเดน , เยอรมนี ) โดยใช้การตรวจ DNA และ am320 ตลับวิธีการแยก โดยมีบันทึกและวิเคราะห์โปรไฟล์กับ infoquest FP ซอฟแวร์รุ่น 4.5 ( ห้องปฏิบัติการราดทางชีวภาพHercules , CA , USA ) ที่แยกได้จากทารกเพียงคนเดียวที่แสดงเหมือนกันวงดนตรีรูปแบบการวิเคราะห์ RAPD พบว่าเป็นของเดียวกันกับ .