DNA was isolated with the Genomic D

DNA was isolated with the Genomic DNA extraction kit
(Genomics BioSci. and Tech. Co., Taiwan) from muscle tissue
according to the manufacturer’s recommendations. A partial
fragment of the mitochondrial (mtDNA) COI gene was amplified
by polymerase chain reaction (PCR) using Taq DNA polymerase
(MDbio, Taipei) with universal primers LCO1490:59-GGTCAACAAATCATAAAGATA
TTGG-39 and HCO2198:59-
TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-39 [20]. Each 25 ml
reaction contained 10–50 ng DNA, 10 mM Tris HCl (pH 8.3),
50 mM KCl, 1.5 mM MgCl2, 1 U Taq DNA polymerase,
0.2 mM dNTPs, and 0.3 mM of each primer. The mixture was
amplified with a cycling profile of 2 min at 94uC, followed by 34
cycles at 95uC (30 s), 54uC (30 s), and 70uC (40 s). The nucleotide
sequences of the PCR products were determined using an ABI 377
automated sequencer with the forward and reverse primers used
for amplification. Sequences were aligned using CLUSTAL W
[21] and followed by manual editing using Sequencher 4.2 (Gene
Code, Ann Arbor, MI, USA). Sequences used in this study were
submitted to the NCBI GenBank database (accession: KF606764–
KF606860). Obtained sequences were blasted through NCBI and
BOLD web-based systems. The hits with the highest query
coverage and maximum identical values (.98%) were chosen as
reference sequences. These sequences, as well as 44 more
(representing 22 species) downloaded from GenBank, including
31 voucher and 13 non-voucher samples (Table S1), were added to
the aligned sequences generated in this study for further
phylogenetic analyses.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอที่ถูกแยก ด้วยชุดสกัด Genomic DNA(Genomics BioSci และเทคโนโลยี Co. ไต้หวัน) จากเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อตามคำแนะนำของผู้ผลิต เป็นบางส่วนมีขยายส่วนของยีน COI mitochondrial (mtDNA)โดยพอลิเมอเรสปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) ใช้ Taq DNA พอลิเมอเรส(MDbio ไทเป) กับไพรเมอร์สากล LCO1490:59-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG 39 และ HCO2198:59-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-39 [20] ละ 25 mlปฏิกิริยามีอยู่ 10 – 50 ng ดีเอ็นเอ 10 มม.ทริสเรทติ้ง HCl (pH 8.3),KCl, MgCl2, 1 U Taq DNA พอลิเมอเรส 1.5 มม. 50 มม.dNTPs 0.2 mM และ 0.3 มม.แต่ละพื้น มีส่วนผสมขยาย โดยใช้โปรไฟล์ที่ขี่จักรยาน 2 นาทีที่ 94uC ตาม 34รอบที่ 95uC (30 s), 54uC (30 s), และ 70uC (40 s) นิวคลีโอไทด์ลำดับผลิตภัณฑ์ PCR ถูกกำหนดใช้ 377 ABIsequencer อัตโนมัติ ด้วยไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับที่ใช้สำหรับขยาย มีจัดลำดับใช้ CLUSTAL W[21] และไปมาแล้ว โดยการแก้ไขด้วยตนเองโดยใช้ Sequencher 4.2 (ยีนรหัส Ann Arbor, MI สหรัฐอเมริกา) ลำดับที่ใช้ในการศึกษานี้ได้ส่งไปยังฐานข้อมูล NCBI GenBank (ทะเบียน: KF606764 –KF606860) ลำดับที่ได้รับถูกทำลาย โดย NCBI และตัวหนาระบบเว็บ ชมกับแบบสอบถามสูงสุดความครอบคลุมและสูงสุดเหมือนกันค่า (98%) ถูกเลือกให้เป็นอ้างอิงลำดับ ลำดับเหล่านี้ เป็น 44 เพิ่มเติม(แทนพันธุ์ 22) ดาวน์โหลดจาก GenBank รวมทั้ง31 สำคัญและไม่สำคัญ 13 ตัวอย่าง (ตาราง S1), เพิ่มการลำดับการจัดตำแหน่งที่สร้างขึ้นในการศึกษานี้สำหรับเพิ่มเติมวิเคราะห์ phylogenetic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอที่แยกกับชุดสกัดดีเอ็นเอจีโนม
(ฟังก์ชั่น BioSci. และ Tech. Co. , ไต้หวัน)
จากเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อตามคำแนะนำของผู้ผลิต บางส่วนส่วนของยล (mtDNA) ยีน COI ถูกขยายโดยวิธีPolymerase chain reaction (PCR) โดยใช้โพลิเมอร์ Taq DNA (MDbio ไทเป) ด้วยไพรเมอร์สากล LCO1490: 59-GGTCAACAAATCATAAAGATA TTGG-39 และ HCO2198: 59- TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-39 [20 ] แต่ละ 25 มล. ปฏิกิริยาที่มีอยู่ 10-50 นาโนกรัมดีเอ็นเอ 10 มิลลิ Tris HCl (pH 8.3) 50 มิลลิ KCl 1.5 มิลลิ MgCl2 1 U Taq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์, 0.2 มิลลิ dNTPs และ 0.3 มิลลิของแต่ละไพรเมอร์ ส่วนผสมที่ถูกขยายด้วยรายละเอียดการขี่จักรยาน 2 นาทีที่ 94uC ตามด้วย 34 รอบที่ 95uC (30 s), 54uC (30 วินาที) และ 70uC (40 วินาที) เบื่อหน่ายลำดับของผลิตภัณฑ์ PCR ได้รับการพิจารณาโดยใช้ ABI 377 ซีเควนอัตโนมัติกับไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ที่ใช้สำหรับการขยาย ลำดับถูกจัดชิดโดยใช้ Clustal W [21] และตามมาด้วยการแก้ไขคู่มือการใช้ SEQUENCHER 4.2 (ยีนรหัสAnn Arbor, MI, USA) ลำดับที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ได้ถูกส่งไปยังฐานข้อมูล NCBI GenBank (เข้า: KF606764- KF606860) ลำดับที่ได้มาทำลายผ่าน NCBI และBOLD ระบบที่ใช้เว็บ เพลงฮิตที่มีการค้นหามากที่สุดความคุ้มครองและค่านิยมที่เหมือนกันสูงสุด (0.98%) ถูกเลือกให้เป็นลำดับการอ้างอิง ลำดับเหล่านี้เช่นเดียวกับ 44 มากขึ้น(เป็นตัวแทนของ 22 ชนิด) ที่ดาวน์โหลดมาจาก GenBank รวมทั้งวันที่31 และ 13 บัตรกำนัลตัวอย่างที่ไม่ใช่บัตรกำนัล (S1 ตาราง) ถูกเพิ่มเข้าไปในลำดับชิดที่สร้างขึ้นในการศึกษาต่อไปนี้การวิเคราะห์สายวิวัฒนาการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แยกดีเอ็นเอกับดีเอ็นเอแยกชุด
( ไร biosci . และเทคโนโลยี Co . , ไต้หวัน ) จาก
เนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อ ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เศษเสี้ยวบางส่วน
ของไมโตคอนเดรีย ( แสดง ) ยีนผมก็ขยาย
โดยเทคนิคพีซีอาร์ ( PCR ) โดยใช้แท็ก DNA polymerase
( mdbio ไทเป ) ด้วยไพรเมอร์สากล lco1490:59-ggtcaacaaatcataaagata
-
hco2198:59 ttgg-39 และtaaacttcagggtgaccaaaaaatca-39 [ 20 ] แต่ละ 25 ml
ปฏิกิริยาคือ 10 - 50 นาโนดีเอ็นเอ , HCl หรือ 10 มม. ( pH 8.3 )
. 50 มม. 1.5 มม. MgCl2 ใช้ดีเอ็นเอได้ดี
1 u , 0.2 มม. dntps และ 0.3 มม. ของแต่ละรองพื้น ส่วนผสม
ขยายกับจักรยานโปรไฟล์ของ 2 นาทีที่ 34
94uc ตามรอบที่ 95uc ( 30 ) 54uc ( 30 ) และ 70uc ( 40 วินาที )
ยีนที่ลำดับของผลิตภัณฑ์ PCR ซึ่งใช้ abi 377
มูลค่ากับไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ใช้
สำหรับเด็ก . ลำดับการใช้ clustal ชิด w
[ 21 ] และตามด้วยการแก้ไขคู่มือการใช้ sequencher 4.2 ( ยีน
รหัส , Ann Arbor , มิชิแกน , สหรัฐอเมริกา ลําดับที่ใช้ ในการศึกษาครั้งนี้พบ ncbi
ส่งไปยังฐานข้อมูล ( หนังสือ : kf606764 –
kf606860 )ได้ลำดับถูกพ่นผ่าน ncbi
ระบบเว็บและตัวหนา ที่ฮิตสูงสุดสอบถาม
ครอบคลุมและสูงสุดค่าเหมือนกัน ( 98% ) ได้รับเลือกเป็น
ลำดับการอ้างอิง ลำดับเหล่านี้เป็น 44 มากขึ้น
( แสดงถึง 22 ชนิด ) ดาวน์โหลดได้จากขนาด รวมทั้ง
31 ใบ 13 ใบไม่ตัวอย่าง ( ตาราง S1 ) เพิ่ม

,ลำดับการสร้าง ดูแล ในการศึกษานี้เพื่อวิเคราะห์วิวัฒนาการต่อไป
.