The collections of Drosophila m. Ca

The collections of Drosophila m. Canton S wild-type embryos
were dechorionated in a solution of 5% sodium hypochlorite in
water for about 1.5 min in a small basket. Embryos were thoroughly washed with 0.07% NaCl/0.1% TritonX-100. The embryos
were then fixed with 4% paraformaldehyde in 10 mM phosphate
buffer containing 0.1 M NaCl and heptane (1/1: v/v) with gentle
shaking for 20 min at 25 C. After fixation, the aqueous phase
was completely removed and embryos were vigorously shaken in
a 1:1 mixture of heptane and methanol so that they were devitellinized. Embryos were then washed with methanol twice and
stored in 100% methanol at 85 C.26 Prior to WISH using fixed embryos, the supernatant, methanol, was exchanged with PBT solution (10 mM phosphate buffer, pH 7.0/0.1 M NaCl/0.1% Tween
20), and embryos were stored at 25 C for 15 min. After exchanging
PBT solution, the probe solution (30 lM OMUpy2 in PBT) was then
added to the fixed embryos, followed by incubation at 40 C for
30 min, then at 4 C for 2 h. The embryos treated with probes were
then washed with PBT once. Embryos were mounted on a glass
slide in 70% glycerol in PBS and observed by fluorescent microscopy using a 20  objective lens

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

คอลเลกชันของแมลงตัวอ่อนแบบธรรมชาติ Canton S เมตรถูก dechorionated ในสารละลาย 5% โซเดียมไฮเปอร์คลอไรด์ในน้ำประมาณ 1.5 นาทีในตะกร้าเล็ก โคลนถูกล้างให้สะอาด ด้วย 0.07% NaCl/0.1% TritonX-100 ต่อตัวอ่อนได้รับการแก้ไขแล้ว ด้วย paraformaldehyde 4% ในฟอสเฟต 10 มม.บัฟเฟอร์ที่ประกอบด้วย 0.1 M NaCl และ heptane (1/1: v/v) กับอ่อนโยนสั่นที่ 25 c 20 นาที หลังจากเพ่ง เฟสอถูกเอาออกอย่างสมบูรณ์ และโคลนถูกเขย่าแรง ๆ ในส่วนผสม 1:1 ของ heptane และเมทานอลเพื่อให้พวกเขาได้ devitellinized โคลนถูกแล้วล้าง ด้วยเมทานอลสองครั้ง และเก็บไว้ในเมทานอล 100% ที่ C.26 85 ก่อนในการใช้ตัวอ่อนถาวร supernatant เมทานอล รับแลกเปลี่ยนกับโซลูชัน PBT (10 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0/0.1 M NaCl/0.1% โลก20), และโคลนถูกเก็บไว้ 25 c เป็นเวลา 15 นาที หลังจากแลกเปลี่ยนโซลูชัน PBT โซลูชันโพรบ (30 lM OMUpy2 ใน PBT) นั้นลงตัวอ่อนถาวร ตาม ด้วยการบ่มที่ 40 C สำหรับ30 นาที แล้วที่ 4 C เป็นเวลา 2 ชม ตัวอ่อนที่รับการรักษา ด้วยโพรบได้จากนั้น ล้าง ด้วย PBT ครั้ง โคลนติดตั้งบนแก้วภาพนิ่งในกลีเซอรอล 70% ใน PBS และสังเกต ด้วยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ที่ใช้เลนส์วัตถุประสงค์ 20

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คอลเลกชันของแมลงหวี่เมตร แคนตัน S ชนิดป่าตัวอ่อน
ถูก dechorionated ในการแก้ปัญหาของโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 5% ใน
น้ำประมาณ 1.5 นาทีในตะกร้าขนาดเล็ก ตัวอ่อนถูกล้างให้สะอาดด้วย 0.07% โซเดียมคลอไรด์ / 0.1% TritonX-100 ตัวอ่อน
ได้รับการแก้ไขแล้วกับ 4% ใน paraformaldehyde 10 มิลลิฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ที่มี 0.1 M NaCl และ heptane (1/1: v / v) กับอ่อนโยน
สั่น 20 นาทีที่ 25 C? หลังจากตรึงเฟสน้ำ
จะถูกลบออกอย่างสมบูรณ์และตัวอ่อนถูกเขย่าอย่างแรงใน
1: 1 ผสม heptane และเมทานอลเพื่อให้พวกเขาได้รับการ devitellinized ตัวอ่อนถูกล้างแล้วกับเมทานอลสองครั้งและ
เก็บไว้ในเมทานอล 100% ที่? 85? C.26 ก่อนที่จะขอให้ใช้ตัวอ่อนคงสารละลายเมทานอลได้รับการแลกเปลี่ยนกับการแก้ปัญหา PBT (10 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 7.0 / 0.1 M NaCl / 0.1% Tween
20) และตัวอ่อนที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสนาน 15 นาที หลังจากการแลกเปลี่ยน
วิธีการแก้ปัญหา PBT ทางออกสอบสวน (30 LM OMUpy2 ใน PBT) จากนั้นก็
เพิ่มให้กับตัวอ่อนคงที่ตามมาด้วยการบ่มที่ 40 องศาเซลเซียสเป็น
เวลา 30 นาทีแล้วที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตัวอ่อนที่ได้รับการรักษาด้วยฟิวส์ถูก
ล้างแล้วกับ PBT ครั้งเดียว ตัวอ่อนที่ได้รับการติดตั้งบนกระจก
สไลด์ 70% กลีเซอรอลในพีบีเอสและตั้งข้อสังเกตโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงใช้ 20? เลนส์ใกล้วัตถุ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

คอลเลกชันของตัวอ่อนของแมลงหวี่กวางตุ้งของม.เป็น dechorionated ในสารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์ใน 5 ปีน้ำประมาณ 1.5 นาทีในตะกร้าเล็ก เมื่อถูกล้างให้สะอาดด้วย 0.07 % NaCl / 0.1 % tritonx-100 . ตัวอ่อนแล้วแก้ไขด้วยพาราฟอร์มาลดิไฮด์ 4% ใน 10 มิลลิเมตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่มี 0.1 โมลาร์ และเฮปเทน ( 1 / 1 : v / V ) อ่อนโยนสั่นสำหรับ 20 นาทีที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส หลังการตรึง เฟสน้ำถูกลบออกอย่างสมบูรณ์เมื่อมีแรงสะเทือนในและ1 : 1 ผสมของเฮปเทนและเมทานอลเพื่อที่พวกเขา devitellinized . เอ็มบริโอแล้วล้างด้วยเมทานอล สองครั้งเก็บไว้ใน 100 % เมทานอลที่ 85 c.26 ก่อนที่จะต้องการใช้ถาวรเจริญ , นำเมทานอล แลกเปลี่ยนกับ PBT ( 10 mm สารละลายฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 7.0 / 0.1 M NaCl / 0.1 tween20 ) และเมื่อเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที หลังจากการแลกเปลี่ยนPBT โซลูชั่นด้วยโซลูชั่น ( 30 omupy2 LM ใน PBT ) แล้วเพิ่มคงอ่อน ตามด้วยการบ่มที่ 40 C สำหรับ30 นาทีแล้ว ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ตัวอ่อนจึงถูกรักษาแล้วล้างด้วย 120 ครั้ง ตัวติดบนแก้วภาพนิ่งในกลีเซอรอล 70% ใน PBS และสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสงใช้วัตถุประสงค์ 20 เลนส์