Actinomycetes were grown in liquid

Actinomycetes were grown in liquid media M1 (Zhang et al., 2006) until a high abundance of cells was observed. DNA extractions were performed using the Gentra Puregene kit (Quiagen, Valencia, CA). DNA was quantified using NanoDrop ND-1000 (Wilmington, DE, USA). Polymerase Chain Reaction (PCR) was performed to amplify the 16S rRNA gene of all isolates using the universal eubacterial primers 27F and 1520R (Farris and Olson, 2007; Stach et al., 2003). The PCR mix consisted of 10 μl of nuclease free water, 12.5μl of GoTaq DNA polymerase, 1 μl (40 ng/μl) of each primer, and 1 μl (100 ng/μl) of DNA template. All reactions were performed using a 2720 Version 2.08 thermo cycler (Applied Biosystems, CA, USA), using the following thermocycler program: an initial denaturation at 95 °C for 2.5 minutes, followed by 35 cycles of 95 °C for 30 seconds, 45 °C for 30 seconds, 72 °C for 1 minute, and a final extension during the last cycle of 72 °C for 10 minutes. Results of PCR reactions were observed on 1% agarose gels.
Sequencing and

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Actinomycetes ได้เติบโตในสื่อของเหลว M1 (Zhang et al., 2006) จนกระทั่งความสูงของเซลล์ที่ถูกตรวจสอบ สกัดดีเอ็นเอได้ดำเนินการโดยใช้ชุด Gentra Puregene (Quiagen, Valencia, CA) ดีเอ็นเอถูก quantified ใช้ NanoDrop ND-1000 (วิลมิ DE สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) ทำการขยายยีน rRNA 16S ของแยกทั้งหมดโดยใช้ไพรเมอร์ eubacterial สากล 27F และ 1520R (Farris และโอลสัน 2007 Stach และ al., 2003) ผสม PCR ประกอบด้วย 10 μl nuclease ฟรีน้ำ 12.5μl GoTaq ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส μl 1 (40 ng/μl) แต่ละพื้น และ μl 1 (100 ng/μl) ของดีเอ็นเอแม่แบบ ปฏิกิริยาทั้งหมดที่ดำเนินการโดยใช้ที่ 2720 2.08 รุ่นเทอร์โม cycler (Biosystems ใช้ CA, USA), ใช้โปรแกรม thermocycler ดังต่อไปนี้: denaturation เป็นเริ่มต้นที่ 95 ° C 2.5 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ของ 95 ° C เวลา 30 วินาที 45 ° C เวลา 30 วินาที 72 ° C เวลา 1 นาที และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายในรอบสุดท้าย 72 องศาเซลเซียส 10 นาที ผลของปฏิกิริยา PCR ได้สังเกตบน 1% agaroseลำดับเบส และ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

actinomycetes มีปลูกอยู่ในสื่อของเหลว M1 (Zhang et al., 2006) จนกระทั่งความอุดมสมบูรณ์สูงของเซลล์ที่ได้รับการตั้งข้อสังเกต สกัดดีเอ็นเอถูกดำเนินการโดยใช้ชุด Gentra Puregene (Quiagen, วาเลนเซีย, CA) ดีเอ็นเอถูกวัดโดยใช้ NanoDrop ND-1000 (Wilmington, DE, USA) วิธี Polymerase chain reaction (PCR) ได้รับการดำเนินการเพื่อขยาย 16S rRNA ยีนของทุกไอโซเลทโดยใช้ไพรเมอร์ eubacterial สากล 27F และ 1520R (Farris และโอลสัน, 2007. Stach et al, 2003) ผสม PCR ประกอบด้วย 10 ไมโครลิตรของนิน้ำฟรี12.5μlของ GoTaq ดีเอ็นเอโพลิเมอร์ 1 ไมโครลิตร (40 ng / ไมโครลิตร) ของแต่ละไพรเมอร์และ 1 ไมโครลิตร (100 ng / ไมโครลิตร) ของแม่ดีเอ็นเอ ปฏิกิริยาทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้ 2720 รุ่น 2.08 Cycler เทอร์โม (Applied Biosystems, CA, USA) โดยใช้โปรแกรมเครื่อง thermocycler ต่อไปนี้: denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2.5 นาทีตามด้วย 35 รอบ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที 45 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, 72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีและขยายสุดท้ายในระหว่างรอบสุดท้ายของ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ผลของปฏิกิริยา PCR ถูกตั้งข้อสังเกตในวันที่ 1% agarose เจล.
ลำดับและ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แอคติโนมัยซีสโตใน M1 เหลว ( Zhang et al . , 2006 ) จนสูงความอุดมสมบูรณ์ของเซลล์พบว่า . ดีเอ็นเอที่สกัดได้ใช้เจนทราพิวรียีน Kit ( quiagen , Valencia , CA ) การใช้ดีเอ็นเอตรวจ nanodrop nd-1000 ( Wilmington , DE , USA )ปฏิกิริยาลูกโซ่ ( PCR ) คือการขยายเบส 16S rRNA ยีนของเชื้อโดยใช้ไพรเมอร์และสากล eubacterial 27f 1520r ( ฟาร์ริส และ โอลเซ่น , 2007 ; สแตช et al . , 2003 ) ร่วมผสม จำนวน 10 μลิตรนิวเคลียสน้ำฟรี , 12.5 μ L ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส gotaq 1 μ L ( 40 กรัม / μ L ) ของแต่ละสี และ 1 μ L ( 100 ng / μ L ) ของแม่แบบดีเอ็นเอเกิดปฏิกิริยาการใช้รุ่น 2.08 thermo cycler 2720 ( Applied Biosystems , CA , USA ) , การใช้โปรแกรมต่อไปนี้ : เริ่มต้นเทอมอไซเคล ์ ( ที่ 95 องศา C 2.5 นาที ตามด้วย 35 รอบ 95 องศา C เป็นเวลา 30 วินาที , 45 ° C เป็นเวลา 30 วินาที , 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที และ สุดท้ายเป็นส่วนขยายในรอบสุดท้ายของ 72 ° C เป็นเวลา 10 นาทีผลของปฏิกิริยา PCR พบบน 1% เจล ( .
และลำดับ