Evidently, regulation of PCR input

Evidently, regulation of PCR input is essential for successful direct and rapid amplification; with too much input profiles become over-amplified and show increased base line noise and with too little input incomplete profiles are obtained. Samples at forensic laboratories mainly consist of textiles or swabs obtained from sampling various evidentiary items. We set out to develop a sampling technique that: (1) results in full STR profiles upon direct and rapid PCR, (2) is practical and applicable to both swabs and fabrics, (3) comes with minimal handling and contamination risks, and (4) leaves the remainder of the swab or fabric intact (dry) for standard analysis at a later stage. Blood (3 μL) was applied on cotton swabs, and five methods were tested: (1) twist swab twice or (2) 20 times in PCR tube (to enable this approach mini-tip swabs were used), (3) take out a fibre from swab, (4) cut the tip of the swab and (5) stub the swab with a mini tape-lift. We tested these five methods with a replicate number between 4 and 16, and found that only two methods resulted in full profiles for all direct amplifications namely the fibre method and the tape lifting approach (results not shown). The tape lifting method proved much more practical: easy to perform with a minimal risk of contamination (the tapes are treated extensively with UV light in a crosslinker to remove DNA contamination) and the swab remains completely intact for further use. Tape lifting (Fig. 2) can either be performed using a tape on a 12.7 mm2 stub holder from which an area of 5 mm2 is cut by a scalpel knife or by using a smaller tape placed on a 6.6 mm2 mini stub holder. The tape lifting method was also tested for bloodstains (3 μL undiluted and 3 μL 1:10 diluted blood) on various types of fabrics (Table 5), and proved successful. The fabrics have different characteristics: some hardly adsorb the blood (nylon), others easily release blood-containing fibres (wool) and some take up the blood tightly and hardly release fibres (course cotton). Therefore, the tape lift sampling number (times the stain is touched with the tape-lift stub) varied for the various fabrics depending on the release of blood and fibres as determined by visual inspection (Table 5). Only for denim no genotyping data were obtained which is probably due to PCR inhibition from denim components.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อย่างเห็นได้ชัด ระเบียบของ PCR ในการป้อนข้อมูลเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการประสบความสำเร็จโดยตรง และอย่างรวดเร็วขยาย มีโปรไฟล์การป้อนเข้ามากเกินไปกลายเป็นเกินขยาย และแสดงเสียงเส้นฐานเพิ่มขึ้น และ มีโพรไฟล์ที่ไม่สมบูรณ์เข้าน้อยเกินไปจะได้รับ ตัวอย่างที่ห้องปฏิบัติการทางนิติวิทยาศาสตร์ส่วนใหญ่ประกอบด้วยสิ่งทอหรือสวับที่ได้จากการสุ่มตัวอย่างสินค้าต่าง ๆ evidentiary เรามุ่งพัฒนาเทคนิคการสุ่มตัวอย่างที่: (1) ผลลัพธ์ในโปรไฟล์ STR เต็มเมื่อ PCR โดยตรง และรวดเร็ว, (2) เป็นจริง และใช้ได้กับสวับและผ้า, (3) มีการจัดการน้อยที่สุดและการปนเปื้อน และ (4) ใบส่วนที่เหลือของสำลีก้านหรือผ้าเหมือนเดิม (แห้ง) สำหรับวิเคราะห์มาตรฐานในภายหลัง เลือด (3 μL) ใช้ในฝ้าย และทดสอบวิธีที่ห้า: สองสำลีก้านบิด (1) หรือ (2) 20 ครั้งใน PCR หลอด (เพื่อให้สิ่งนี้มินิวิธีใช้สวับ), (3) จะออกจากเส้นใยจากสำลีก้าน, (4) ตัดปลายสำลีก้านการ และ (5) stub สำลีก้าน ด้วยเทปมินิลิฟต์ เราทดสอบวิธีการเหล่านี้ห้า มีจำนวน replicate ระหว่าง 4 และ 16 และพบว่า สองวิธีผลในโปรไฟล์เต็มสำหรับ amplifications โดยตรงทั้งหมดคือวิธีการที่เส้นใยและเทปยกวิธี (ไม่แสดงผล) เทปยกวิธีพิสูจน์ทางปฏิบัติมากขึ้น: การ มีความเสี่ยงน้อยที่สุด (เทปรับอย่างกว้างขวาง ด้วยรังสียูวีแสง crosslinker เอาดีเอ็นเอปน) การปนเปื้อนและการเช็ดล้างยังคงสภาพสมบูรณ์สำหรับการใช้งาน เทปยก (2 รูป) สามารถจะทำได้โดยใช้เทปบนที่ใส่เหลือ 12.7 mm2 ซึ่งพื้นที่ 5 mm2 ถูกตัด โดยมีด scalpel หรือใช้เทปขนาดเล็กวางบนที่ใส่มินิเหลือ 6.6 mm2 เทปยกวิธียังทดสอบสำหรับ bloodstains 3 μL undiluted และ 3 μL 1:10 ปรับลดเลือด) ในหลายประเภทของผ้า (ตาราง 5), และประสบผลสำเร็จ ผ้ามีลักษณะแตกต่างกัน: บางชื้นแทบเลือด (ไนล่อน), อื่น ๆ ได้ปล่อยเส้นใยที่ประกอบด้วยเลือด (ขนสัตว์) และบางส่วนใช้เลือดแน่น และแทบไม่ปล่อยใย (ฝ้ายหลักสูตร) ดังนั้น เลขยกตัวอย่างเทป (สีย้อมจะสัมผัสกับ stub เทปยกเท่า) แตกต่างกันสำหรับผ้าต่าง ๆ ขึ้นอยู่กับการเปิดตัวของเลือดและเส้นใยตามกำหนดตรวจสอบ (ตาราง 5) สำหรับยีนส์ genotyping ข้อมูลไม่ได้รับซึ่งจะเนื่องจากยับยั้ง PCR จากส่วนประกอบของยีนส์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เห็นได้ชัดว่ากฎระเบียบของการป้อนข้อมูล PCR เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการประสบความสำเร็จขยายโดยตรงและรวดเร็ว; ที่มีโปรไฟล์การป้อนข้อมูลมากเกินไปกลายเป็นมากกว่าการขยายและเพิ่มขึ้นโชว์เสียงเส้นฐานและมีการป้อนข้อมูลน้อยเกินไปโปรไฟล์ที่ไม่สมบูรณ์จะได้รับ ตัวอย่างที่ห้องปฏิบัติการนิติวิทยาศาสตร์ส่วนใหญ่ประกอบด้วยสิ่งทอหรือ swabs ที่ได้รับจากการสุ่มตัวอย่างรายการหลักฐานต่างๆ ที่เรากำหนดไว้ในการพัฒนาเทคนิคการสุ่มตัวอย่างที่: (1) ผลในโปรไฟล์ STR เต็มจำนวนเมื่อโดยตรงและรวดเร็ว PCR (2) เป็นจริงและใช้ได้กับทั้ง swabs และผ้า (3) มาพร้อมกับน้อยที่สุดการจัดการและการปนเปื้อนเสี่ยงและ ( 4) ใบส่วนที่เหลือของไม้กวาดหรือผ้าเหมือนเดิม (แห้ง) สำหรับการวิเคราะห์มาตรฐานในระยะต่อมา เลือด (3 ไมโครลิตร) ถูกนำมาใช้ในฝ้ายห้าและวิธีการได้รับการทดสอบ (1) กวาดบิดสองครั้งหรือ (2) 20 ครั้งใน PCR Tube (เพื่อให้สามารถใช้วิธีนี้ swabs มินิปลายถูกนำมาใช้), (3) จะออก ใยสำลี (4) ตัดปลายไม้กวาดและ (5) ต้นขั้วไม้กวาดที่มีมินิเทป-Lift เราได้ทดสอบเหล่านี้ห้าวิธีที่มีจำนวนซ้ำระหว่างวันที่ 4 และ 16 และพบว่ามีเพียงสองวิธีการส่งผลในโปรไฟล์เต็มรูปแบบสำหรับเครื่องขยายเสียงโดยตรงทั้งหมดคือวิธีการที่เส้นใยและวิธีการยกเทป (ผลไม่แสดง) วิธีเทปยกพิสูจน์มากการปฏิบัติมากขึ้นง่ายต่อการดำเนินการที่มีความเสี่ยงน้อยที่สุดของการปนเปื้อน (เทปได้รับการปฏิบัติอย่างกว้างขวางกับแสงยูวีในเชื่อมขวางเพื่อลบปนเปื้อนดีเอ็นเอ) และไม้กวาดที่ยังคงสมบูรณ์เหมือนเดิมสำหรับการใช้งานต่อไป ยกเทป (รูปที่. 2) สามารถทำได้โดยใช้เทปในฐานะผู้ถือ 12.7 mm2 ต้นขั้วจากการที่พื้นที่ 5 mm2 ถูกตัดด้วยมีดผ่าตัดหรือโดยใช้เทปขนาดเล็กที่วางอยู่บนผู้ถือต้นขั้ว 6.6 mm2 มินิ วิธีเทปยกยังได้รับการทดสอบสำหรับคราบเลือด (3 ไมโครลิตรเจือปนและ 3 ไมโครลิตร 01:10 เลือดเจือจาง) เกี่ยวกับประเภทต่างๆของผ้า (ตารางที่ 5) และประสบความสำเร็จ ผ้าที่มีลักษณะแตกต่างกัน: บางคนแทบจะไม่ดูดซับเลือด (ไนล่อน), อื่น ๆ ได้อย่างง่ายดายปล่อยเส้นใยที่มีเลือด (ขนสัตว์) และบางคนใช้เวลาถึงเลือดให้แน่นและแทบจะไม่ปล่อยเส้นใยฝ้าย (แน่นอน) จึงทำให้จำนวนเทปยกสุ่มตัวอย่าง (เท่าคราบสัมผัสกับต้นขั้วเทป-Lift) ที่แตกต่างกันสำหรับผ้าต่างๆขึ้นอยู่กับการเปิดตัวของเลือดและเส้นใยตามที่กำหนดโดยการตรวจสอบภาพ (ตารางที่ 5) เฉพาะสำหรับยีนส์ไม่มีข้อมูล genotyping ได้รับซึ่งอาจเป็นเพราะการยับยั้ง PCR จากองค์ประกอบผ้ายีนส์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เห็นได้ชัดว่า ระเบียบของข้อมูลเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับความสำเร็จโดยตรงและ Rapid Amplification ; เยอะกว่าใส่โปรไฟล์กลายเป็นขยายและแสดงเส้นฐานและเพิ่มเสียงที่มีน้อยเกินไป ใส่ไม่ครบโปรไฟล์ได้ ตัวอย่างที่ห้องปฏิบัติการนิติเวชส่วนใหญ่ประกอบด้วยสิ่งทอ หรือได้จากหลักฐานต่าง ๆจากรายการคน เราเริ่มพัฒนาเทคนิคการสุ่มตัวอย่างที่ : ( 1 ) ผลลัพธ์ในรูปแบบ STR เต็มเมื่อได้โดยตรงและรวดเร็วและ ( 2 ) จะเป็นประโยชน์ และใช้ได้ทั้งลำตัวและผ้า ( 3 ) มาพร้อมกับความเสี่ยงการจัดการที่น้อยที่สุดและการปนเปื้อน และ ( 4 ) ออกจากส่วนที่เหลือของผ้าหรือผ้าเหมือนเดิม ( แห้ง ) วิเคราะห์มาตรฐานในขั้นตอนภายหลัง เลือด ( 3 μ L ) ใช้กับ swabs ฝ้าย และวิธีการทดสอบ ( 1 ) บิดไม้ถูพื้น สองครั้ง หรือ ( 2 ) 20 ครั้งในหลอด PCR ( เพื่อให้วิธีการนี้มิทิป swabs ใช้ ) , ( 3 ) เอาเส้นใยจากผ้า ( 4 ) ตัดปลายไม้กวาดและ ( 5 ) โครงการ swab ด้วยเทป mini ยก เราใช้วิธีนี้กับทำซ้ำหมายเลขระหว่าง 4 และ 16 และพบว่ามีเพียงสองวิธีที่ส่งผลโดยตรง amplifications โปรไฟล์เต็ม คือ เส้นใย และวิธีเทปยกเข้าหา ( ผลลัพธ์ไม่แสดง ) เทปยกวิธีพิสูจน์จริงมากขึ้น : ง่ายเพื่อดำเนินการที่มีความเสี่ยงน้อยที่สุดของการปนเปื้อน ( เทปปฏิบัติอย่างกว้างขวางกับแสงยูวีในรอบเพื่อลบปนเปื้อนดีเอ็นเอ ) และกวาดที่ยังคงสมบูรณ์ครบถ้วนสำหรับการใช้งานต่อไป เทปยก ( รูปที่ 2 ) สามารถจะดำเนินการโดยใช้เทปบนตอไม้ที่ 12.7 แน่นยึดพื้นที่ 5 แน่นถูกตัดด้วยมีดหรือมีดโดยใช้เทปขนาดเล็กวางบน 6.6 แน่นมิโซระถือ เทปยกวิธียังทดสอบรอยเลือด ( 3 μ L เจือปน 3 μ L 1 : 10 และเจือจางเลือด ) ในรูปแบบต่างๆของผ้า ( ตารางที่ 5 ) และได้พิสูจน์ความสำเร็จ ผ้ามีลักษณะที่แตกต่างกันบางส่วนแทบจะดูดซับเลือด ( ไนลอน ) คนอื่น ๆได้อย่างง่ายดายปล่อยเลือดที่ประกอบด้วยเส้นใย ( ขนสัตว์ ) และใช้เลือดไว้แน่น และไม่ค่อยปล่อยเส้นใยผ้า ( หลักสูตร ) ดังนั้นเทปยกจำนวนตัวอย่าง ( ครั้งรอยสัมผัสกับเทปยกโคน ) หลากหลายเพื่อผ้าต่างๆ ขึ้นอยู่กับรุ่นของเลือดและเส้นใยที่กำหนดโดยการตรวจสอบภาพ ( ตารางที่ 5 ) สำหรับยีนส์ไม่มีเขตข้อมูลซึ่งอาจเกิดจากการยับยั้งจากส่วนประกอบและผ้ายีนส์