In order to confirm that genes clon

In order to confirm that genes cloned downstream PtipA in pIJ6902 can be expressed in E. coli, we studied the expression of the EGFP gene cloned in the vector. The EGFP gene from pIJ8660 (Sun et al., 1999) was cloned into pIJ6902 by NdeI and EcoRI restriction, the ATG start codon of the gene overlapping the NdeI site. The pIJ6902-EGFP construct was easily obtained in DH5α, indicating that the cloning issues met above are dependent on the nature of the cloned sequence. Several clones were isolated and assayed for fluorescence in a microplate reader. Cultures of clones carrying the empty pIJ6902 showed a fluorescence signal relative to the cell amount (RFU/OD600nm) of about 4200, corresponding to the autofluorescence baseline of E. coli cells (Fig. 3, left panel).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อยืนยันว่า ยีนโคลน PtipA ปลายน้ำใน pIJ6902 สามารถแสดงใน E. coli เราศึกษาค่าของยีน EGFP โคลนในเวกเตอร์ ยีน EGFP จาก pIJ8660 (Sun et al., 1999) ถูกโคลนลงใน pIJ6902 โดย NdeI และ EcoRI จำกัด รหัสพันธุกรรมเริ่มต้น ATG ของยีนซ้อนเว็บไซต์ NdeI สร้าง pIJ6902 EGFP ได้กล่าวใน DH5α บ่งชี้ว่า ปัญหา cloning ตามข้างต้นจะขึ้นอยู่กับลักษณะของลำดับการโคลน หลายโคลนถูกแยกต่างหาก และ assayed สำหรับ fluorescence ในอ่าน microplate วัฒนธรรมของโคลนแบก pIJ6902 ว่างเปล่าพบสัญญาณ fluorescence สัมพันธ์กับเซลล์จำนวน (RFU/OD600nm) ประมาณ 4200 ที่สอดคล้องกับหลัก autofluorescence ของเซลล์ E. coli (Fig. 3 แผงด้านซ้าย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อยืนยันว่ายีนที่โคลน PtipA ปลายน้ำใน pIJ6902 สามารถแสดงออกใน E. coli ที่เราศึกษาการแสดงออกของยีน EGFP โคลนในเวกเตอร์ ยีน EGFP จาก pIJ8660 (Sun et al., 1999) เป็นโคลนเข้าไปใน pIJ6902 โดย NdeI และข้อ จำกัด EcoRI ที่ codon เริ่มต้น ATG ของยีนที่ทับซ้อนกันเว็บไซต์ NdeI สร้าง pIJ6902-EGFP ได้อย่างง่ายดายในDH5αแสดงให้เห็นว่าปัญหาการโคลนพบดังกล่าวข้างต้นจะขึ้นอยู่กับลักษณะของลำดับโคลนที่ โคลนหลายคนถูกแยกและ assayed สำหรับการเรืองแสงในเครื่องอ่าน microplate วัฒนธรรมของโคลนถือว่าง pIJ6902 แสดงให้เห็นว่าเป็นญาติสัญญาณเรืองแสงกับปริมาณเซลล์ (RFU / OD600nm) ประมาณ 4200 ที่สอดคล้องกับพื้นฐานของ Autofluorescence เซล E.coli (รูปที่. 3 แผงด้านซ้าย)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อยืนยันว่า ยีนที่โคลนจาก ptipa ใน pij6902 สามารถแสดงออกใน E . coli , เราศึกษาการแสดงออกของยีนที่โคลนได้ egfp ในเวกเตอร์ การ egfp ยีนจาก pij8660 ( Sun et al . , 1999 ) ถูกโคลนเข้าไปใน pij6902 โดย ndei EcoRI และข้อ จำกัด , ATG รหัสพันธุกรรมเริ่มต้นของยีนซ้อนเว็บไซต์ ndei . การ pij6902 egfp สร้างได้ง่ายๆในα DH5 ,ระบุว่าการโคลนนิ่งปัญหาพบข้างต้นจะขึ้นอยู่กับลักษณะของโคลนตามลําดับ โคลนหลายแยกซีรั่มสำหรับผู้อ่านและเรืองแสงในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย . วัฒนธรรมของโคลนแบก pij6902 ว่างเปล่าพบเรืองสัญญาณเทียบกับปริมาณเซลล์ ( RFU / od600nm ) ประมาณ 4200 , สอดคล้องกับ autofluorescence พื้นฐานของ E . coli เซลล์ ( รูปที่ 3 , แผงด้านซ้าย )