Parasite burden was determined by q

Parasite burden was determined by quantitative real-time PCR
(qPCR). DNA was purified from cardiac biopsies with QIAamp DNA
Mini Kit following the manufacturer’s instructions. A standard
curve was generated using dog DNA spiked with serial dilutions
of T. cruzi DNA. PCR reactions contained 100 ng of dog DNA, 0.5 m
of primers TCZ-F 5-GCTCTTGCCCACAMGGGTGC-3 and TCZ-R 5-
CCAA- GCAGCGGATAGTTCAGG-3, and 10 L of EXPRESS SYBR
GreenERTM qPCR Supermix (Invitrogene) in a final volume of 20 L.
Reactions were run in triplicate on an EcoTM Real-Time PCR System
(Illumina, USA) as follows: 50 ◦C for 2 min and 40 cycles of 95 ◦C for
10 s, 55 ◦C for 15 s 72 ◦C for 5 s. High-resolution melting curves were
determined at the end of the amplification. The standard curve had
a slope of
−3.221, R2 = 0.9989 and an efficiency of 104.35%.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กำหนดภาระงานปรสิต โดย PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์(qPCR) ดีเอ็นเอที่บริสุทธิ์จากประสาทการตรวจชิ้นเนื้อหัวใจกับดีเอ็นเอ QIAampมินิชุดตามคำแนะนำของผู้ผลิต มาตรฐานสร้างเส้นโค้งโดยใช้ spiked กับ dilutions ลำดับดีเอ็นเอของสุนัขของต. cruzi ดีเอ็นเอ ปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย 100 ng ของสุนัขดีเอ็นเอ 0.5 mไพรเมอร์ TCZ-F 5 - GCTCTTGCCCACAMGGGTGC-3 และที่ 5 TCZ-R-CCAA-GCAGCGGATAGTTCAGG-3 และ 10 L SYBR เอ็กซ์เพรสGreenERTM qPCR Supermix (Invitrogene) ในปริมาตรสุดท้ายของ 20 L.ปฏิกิริยาถูกเรียกใช้ใน triplicate ระบบการ EcoTM Real-Time PCR(Illumina สหรัฐอเมริกา) ได้ดังนี้: 50 ◦C 2 นาทีและรอบ 40 ของ 95 ◦C สำหรับ10 s, ◦C 55 สำหรับ 15 ◦C s 72 5 s ได้ละเอียดละลายเส้นโค้งได้กำหนดเมื่อสิ้นสุดการขยาย มีเส้นโค้งมาตรฐานความชันของ−3.221, R2 = 0.9989 และมีประสิทธิภาพ 104.35%

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ภาระปรสิตถูกกำหนดโดยปริมาณ real-time PCR
(qPCR) ดีเอ็นเอบริสุทธิ์จากการตรวจชิ้นเนื้อหัวใจกับ QIAamp DNA
มินิชุดทำตามคำแนะนำของผู้ผลิต มาตรฐาน
เส้นโค้งที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ดีเอ็นเอสุนัขถูกแทงด้วยเจือจางอนุกรม
ของ T. ดีเอ็นเอ cruzi ปฏิกิริยา PCR ที่มีอยู่ 100 ng ของดีเอ็นเอสุนัข 0.5? เมตร
ของไพร TCZ-F 5? -GCTCTTGCCCACAMGGGTGC-3? และ TCZ-R 5? -
? CCAA- GCAGCGGATAGTTCAGG-3 ?, และ 10 ลิตร EXPRESS SYBR
?. GreenERTM qPCR Supermix (Invitrogene) ในปริมาณสุดท้ายของ 20 ลิตร
ปฏิกิริยาวิ่งในเพิ่มขึ้นสามเท่าใน EcoTM ระบบ Real-Time PCR
( Illumina สหรัฐอเมริกา) ดังต่อไปนี้: 50 ◦Cเป็นเวลา 2 นาทีและ 40 รอบ 95 ◦Cสำหรับ
10 วินาที, 55 ◦Cสำหรับ 15 วินาที 72 ◦Cเป็นเวลา 5 วินาที ความละเอียดสูงโค้งละลายถูก
กำหนดในตอนท้ายของการขยาย กราฟมาตรฐานมี
ความลาดเอียงของ
-3.221, R2 = 0.9989 และประสิทธิภาพของ 104.35%

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ภาระถูกกำหนดโดยปริมาณปรสิตแบบ PCR
( qpcr ) ดีเอ็นเอบริสุทธิ์จากเนื้อเยื่อหัวใจกับ qiaamp ดีเอ็นเอ
มินิชุดตามคําแนะนําของผู้ผลิต เส้นโค้งมาตรฐาน
ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ดีเอ็นเอสุนัขที่ได้ถูกแทงด้วยซีเรียลเจือจาง
ของ cruzi ดีเอ็นเอ ปฏิกิริยา PCR ที่มีอยู่ 100 นาโนดีเอ็นเอสุนัข , 0.5  M
5 ไพรเมอร์ tcz-f  - gctcttgcccacamgggtgc-3  tcz-r  -
5 และccaa - gcagcggatagttcagg-3  และ 10  l บริการ SYBR
greenertm qpcr supermix ( invitrogene ) ในเล่มสุดท้ายของ 20  L .
ปฏิกิริยาวิ่งทั้งสามใบในเวลาจริงระบบ ecotm )
( Illumina , USA ) ดังนี้ : 50 ◦ C 2 นาทีและ 40 รอบ 95 ◦ C
10 , 55 ◦ C 15 s 72 ◦ C เป็นเวลา 5 วินาที ความละเอียดสูงละลายเส้นโค้งถูก
ตัดสินในตอนท้ายของการขยาย .เส้นโค้งมาตรฐานมีความลาดชัน

− 3.221 , R2 = 0.9989 และประสิทธิภาพของ 104.35 %