2.3.6. Western blot analysisTo eval

2.3.6. Western blot analysisTo evaluate the castration effect on postmortem desmin degradation, longissimus muscle samples for western blot were obtained within15 min after slaughter (0 d), at deboning (1 d), and after aging (14 d)from bulls and steers harvested after 200 days on feed. In addition,muscle samples from bulls harvested at 0, 100, and 200 days on feedwere obtained within 15 min after slaughter (0 d), and after aging (14d), to evaluate the effect of time on feed on postmortem desmin degradation. Muscle samples were trimmed for epimysium and subcutaneous fat, minced, and then snap frozen in liquid nitrogen. Wholemuscle protein was extracted from 50 mg of powdered longissimussample in 1 mL of cold lysis buffer (7 M urea, 2 M thiourea, 4% CHAPS,40 mM DTT, 0.5 mM Phenylmethanesulfonyl fluoride, and 0.5 mMBenzamidine). Protein content was measured by the Bradford proteinmethod (Bradford, 1976) using premixed reagents (BioRad, Hercules,CA, USA). An equal amount of protein (60 µg) was separated through10% SDS-PAGE and then transferred to nitrocellulose membrane.Afterward, membranes were blocked with blocking solution (3% nonfatdry milk in TBST) for 1 h at room temperature. Blocked membraneswere incubated overnight at 4 °C with rabbit monoclonal antibody

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3.6 วิเคราะห์ดวงตะวัน
เพื่อประเมินผลการตัดอัณฑะในการย่อยสลาย desmin ชันสูตรศพตัวอย่างกล้ามเนื้อ longissimus สำหรับดวงตะวันที่ได้รับภายใน
15 นาทีหลังจากที่ฆ่า (0 ง) ที่ deboning (1 ง) และหลังจากริ้วรอย (14 ง)
จากวัวและนำพาเก็บเกี่ยว หลังจาก 200 วันในฟีด นอกจากนี้
กลุ่มตัวอย่างกล้ามเนื้อจากวัวเก็บเกี่ยวที่ 0, 100, และ 200 วันในฟีด
ที่ได้รับภายใน 15 นาทีหลังจากที่ฆ่า (0 d) และหลังจากริ้วรอย (14
ง) การประเมินผลของระยะเวลาในฟีดในการย่อยสลาย desmin ชันสูตรศพ . ตัวอย่างกล้ามเนื้อได้รับการตัดแต่งสำหรับเอพิไมเซียมและไขมันใต้ผิวหนังสับแล้วแน็ปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว ทั้ง
โปรตีนกล้ามเนื้อถูกสกัดจาก 50 มิลลิกรัม longissimus ผง
ตัวอย่างใน 1 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์สลายเย็น (7 M ยูเรีย 2 M thiourea, 4% CHAPS,
40 มิลลิ DTT, 0.5 มิลลิ Phenylmethanesulfonyl ลูออไรด์และ 0.5 มิลลิ
Benzamidine) ปริมาณโปรตีนที่ถูกวัดโดยแบรดฟอโปรตีน
วิธี (แบรด, 1976) โดยใช้น้ำยาผสม (BioRad, Hercules,
CA, USA) จำนวนเงินที่เท่ากันของโปรตีน (60 ไมโครกรัม) ถูกแยกออกมาผ่าน
10% SDS-PAGE และโอนไปยังเมมเบรน nitrocellulose แล้ว
ต่อจากนั้นเยื่อถูกบล็อกด้วยการแก้ปัญหาการปิดกั้น (3% ไม่มีน้ำมัน
นมแห้งใน TBST) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง เยื่อถูกบล็อค
ถูกบ่มค้างคืนที่ 4 องศาเซลเซียสกับกระต่ายแอนติบอดี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3.6 การวิเคราะห์ซับตะวันตก
ในการประเมินผลการย่อยสลายของการเสื่อมสภาพศพ desmin ตัวอย่างกล้ามเนื้อริบบิ้นสำหรับซับตะวันตกได้รับภายใน
15นาทีหลังจากฆ่า (0 d) ที่ deboning (1 d) และหลังจากอายุ (14 d)
จากวัวและ steers เก็บเกี่ยวหลังจาก๒๐๐วันบนฟีด นอกจากนี้
ตัวอย่างกล้ามเนื้อจากวัวเก็บเกี่ยวที่ 0, ๑๐๐, และ๒๐๐วันในอาหาร
ได้รับภายใน15นาทีหลังจากการฆ่าสังหาร (0 d) และหลังจากอายุ (14
d) เพื่อประเมินผลของเวลาบนฟีดในการย่อยสลายศพ desmin ตัวอย่างกล้ามเนื้อถูกตัดแต่งสำหรับ epimysium และไขมันใต้ผิวหนัง, สับ, แล้ว snap แช่แข็งในไนโตรเจนของเหลว. ทั้ง หมด
โปรตีนจากกล้ามเนื้อถูกสกัดจาก๕๐มิลลิกรัมของผงยาว
ตัวอย่างใน 1 mL ของบัฟเฟอร์สลายเย็น (ยูเรีย 7 M, 2 M thiourea, 4% CHAPS,
๔๐ mM DTT, ๐.๕ mM ฟลูออไรด์ Phenylmethanesulfonyl และ๐.๕ mM
เบน zamidine). ปริมาณโปรตีนที่วัดได้จากโปรตีนแบรดฟอร์ด
วิธีการ (แบรดฟอร์ด, ๑๙๗๖) โดยใช้สารเคมีผสม (BioRad, Hercules,
สหรัฐอเมริกา) ปริมาณโปรตีนที่เท่ากัน (๖๐μ g) ถูกแยกออกผ่าน
10% SDS-หน้าแล้วถ่ายโอนไปยังเมมเบรน nitrocellulose
หลังจากนั้นเยื่อถูกบล็อคด้วยการแก้ปัญหาการบล็อค (3% nonfat
นมแห้งใน TBST) สำหรับ1ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง เยื่อที่ถูกบล็อก
ถูก incubated ในเวลากลางคืนที่4° c พร้อมกับกระต่าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แถบ 2.3.6 การวิเคราะห์ Western Blot
เพื่อศึกษาผลของการลบศักยภาพในการย่อยสลายของโปรตีนหลังความตายเราได้รวบรวมตัวอย่างกล้ามเนื้อที่ยาวที่สุดในหนู
หลังจากการฆ่าสัตว์ที่ถูกฆ่าแล้ว
วัวและวัวที่ได้รับจากร้อยวันต่อมา ยิ่งกว่านั้น
ตัวอย่างกล้ามเนื้อของวัวที่ได้รับอาหารจากธรรมชาติ
ภายในห้านาทีหลังจากการฆ่าและหลังจากอายุ
เพื่อศึกษาผลของเวลาการให้อาหารต่อการย่อยสลายของโปรตีนหลังความตาย ตัดตัวอย่างกล้ามเนื้อเพื่อดูว่ามีกล้ามเนื้อและไขมันใต้ผิวหนังสับและแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวได้อย่างรวดเร็ว โดยสมบูรณ์
การสกัดโปรตีนกล้ามเนื้อจากผงกล้ามเนื้อที่ยาวที่สุด
บัฟเฟอร์สำหรับการแตกตัวแบบเย็นชนิด 1-มลิตร
40-m-dtt 0.5 MM เบนโซอิลซัลโฟนิลฟลูออไรด์และ 0.5 MM
เบนโซเอตไมด์ การหาปริมาณโปรตีนโดยแบรดฟอร์ด
วิธีการที่ใช้โดยวิธีไบโอรัดและเฮอร์คิวลิส
รัฐแคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริการัฐ ปริมาณโปรตีนที่เท่ากัน
10-%s sds-page แล้วโอนไปยังไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน
แล้วปิดฟิล์มด้วยสารละลายปิด
นมแห้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง ฟิล์มปิด
การใช้โมโนโคลนอลแอนติบอดีในกระต่ายฟักไข่ 4-temperature ค้างคืน