28 novel genes were systematically

28 novel genes were systematically selected and evaluated for qRT-PCR normalization. The result indicated that commonly used polyubiquitin (PUB), beta-actin (BAT), and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) were unsuitable reference genes because of the high sequence similarity and low primer specificity. According to the evaluation of RefFinder, cyclophilin 5 (CYP5) was ranked as the most stable reference gene for 27 tested samples under all experimental conditions and eighteen mycelial samples. Based on sequence analysis and expression analysis, our study suggested that gene characteristic, primer specificity of high homologous genes, allele-specificity expression of candidate genes and under-evaluation of reference genes influenced the accuracy and sensitivity of qRT-PCR analysis. This investigation not only revealed potential factors influencing the unsuitability of reference genes but also selected the superior reference genes from more candidate genes and testing samples than those used in the previous study. Furthermore, our study established a model for reference gene analysis by using the genomic sequence.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

นวนิยายยีน 28 ได้เลือกระบบ และประเมินฟื้นฟู qRT PCR ผลบุ polyubiquitin ที่ใช้ทั่วไป (ผับ), เบต้าแอกติน (ค้างคาว), และ glyceraldehyde 3-ฟอสเฟต dehydrogenase (GAPDH) มียีนอ้างอิงไม่เหมาะสมเนื่องจากความคล้ายคลึงกันของลำดับสูงและ specificity ต่ำพื้น ตามการประเมินของ RefFinder, cyclophilin 5 (CYP5) ถูกจัดอันดับเป็นยีนอ้างอิงมากที่สุดมั่นคง 27 ตัวอย่างทดสอบภายใต้เงื่อนไขทั้งหมดทดลองและตัวอย่าง mycelial สิบแปด ตามลำดับวิเคราะห์และวิเคราะห์นิพจน์ เราแนะนำว่า ลักษณะยีน specificity รองพื้นของยีนสูง homologous, allele specificity นิพจน์ของผู้สมัครและยีนอ้างอิงน้อยประเมินผลความแม่นยำและความไวของ qRT PCR วิเคราะห์ นี้ไม่เพียงเปิดเผยปัจจัยอาจมีอิทธิพลต่อการ unsuitability ของการอ้างอิง แต่ยัง เลือกอ้างอิงห้องยีนจากยีนตัวเลือกเพิ่มเติมและทดสอบตัวอย่างมากกว่าที่ใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ นอกจากนี้ เราสร้างแบบจำลองสำหรับอ้างอิงวิเคราะห์ยีนโดยลำดับ genomic

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

28 ยีนนวนิยายได้รับการคัดเลือกและประเมินผลอย่างเป็นระบบสำหรับการฟื้นฟู qRT-PCR ผลที่ได้แสดงให้เห็นว่าที่ใช้กันทั่วไป polyubiquitin (PUB) โปรตีนเบต้า (BAT) และ glyceraldehyde dehydrogenase 3 ฟอสเฟต (GAPDH) เป็นยีนอ้างอิงที่ไม่เหมาะสมเพราะความคล้ายคลึงกันตามลำดับและความจำเพาะสูงต่ำไพรเมอร์ ตามการประเมินผลของ RefFinder ที่ cyclophilin 5 (CYP5) อยู่ในอันดับที่อ้างอิงยีนมีเสถียรภาพมากที่สุดสำหรับ 27 ตัวอย่างทดสอบภายใต้เงื่อนไขการทดลองทั้งหมดสิบแปดตัวอย่างของเส้นใย จากการวิเคราะห์ลำดับและการวิเคราะห์การแสดงออกการศึกษาของเราแสดงให้เห็นว่าลักษณะของยีนจำเพาะไพรเมอร์ของยีนที่คล้ายคลึงกันสูงแสดงออกอัลลีล-จำเพาะของยีนและอยู่ภายใต้การประเมินผลของยีนที่มีอิทธิพลต่อการอ้างอิงความถูกต้องและความไวของการวิเคราะห์ qRT-PCR การตรวจสอบนี้ไม่เพียง แต่แสดงให้เห็นศักยภาพปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อความไม่เหมาะสมของยีนอ้างอิง แต่ยังเลือกยีนอ้างอิงที่เหนือกว่าจากยีนที่มากขึ้นและการทดสอบกลุ่มตัวอย่างกว่าที่ใช้ในการศึกษาก่อนหน้านี้ นอกจากนี้การศึกษาของเราเป็นที่ยอมรับแบบจำลองสำหรับการวิเคราะห์ยีนอ้างอิงโดยใช้ลำดับของจีโนม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

28 นวนิยายยีนมีระบบประเมินข้าพเจ้า PCR และการฟื้นฟู . " ผลการศึกษาพบว่า มักใช้ polyubiquitin ( ผับ ) , เบต้าแอคติน ( ค้างคาว ) และกลีเซอรัลดีไฮด์ 3-phosphate dehydrogenase ( gapdh ) ยีนอ้างอิงที่ไม่เหมาะสมเพราะความเหมือนและความจำเพาะสูงลำดับสีน้อย ตามการประเมินของ reffinder ,cyclophilin 5 ( cyp5 ) ได้รับการจัดอันดับเป็นยีนอ้างอิงที่มีเสถียรภาพมากที่สุดสำหรับ 27 การทดสอบตัวอย่างภายใต้เงื่อนไขและมีจำนวน 18 คน บนพื้นฐานของการวิเคราะห์และการวิเคราะห์การแสดงออกลำดับการศึกษาของเราพบว่ามีความจำเพาะสูงยีนเมอร์โฮโมโลกัสยีนต่อการแสดงออกของยีนในกลุ่มผู้สมัคร และภายใต้อิทธิพลของยีนอ้างอิงการประเมินความถูกต้องและความไวของการวิเคราะห์ PCR ข้าพเจ้า . คดีนี้ไม่เพียง แต่พบปัจจัยที่อาจมีอิทธิพลต่อความไม่เหมาะสมของยีนอ้างอิงแต่ยังเลือกยีนอ้างอิงจากผู้สมัครกว่ายีนและตัวอย่างการทดสอบกว่าที่ใช้ในการศึกษาก่อนหน้า นอกจากนี้การสร้างรูปแบบการวิเคราะห์ยีนอ้างอิงโดยใช้ลำดับจีโนม .