The enzymatic activities of PDE4D c

The enzymatic activities of PDE4D catalytic domain and
inhibition of isolated compounds were assayed in a reaction
mixture containing 50 mM Tris–HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2,
0.5 mM dithiothreitol, 10 μM inhibitor (dissolved in DMSO)
or equivalent volume of DMSO without inhibitor (for
negative control) and 20 000–30 000 cpm per assay substrate
3H-cAMP at room temperature for 15 min. Then the
reaction was terminated by addition of 0.2 M ZnSO4 and the
unreacted 3H-cAMP was precipitated out by 0.2 N Ba(OH)2
whereas remained in the supernatant. The radioactivity in
the supernatant was measured in 2.5 mL of Ultima Gold
liquid scintillation cocktails by a liquid scintillation counter.
Each testwas repeated at least for three times. In this bioassay,
a PDE4D inhibitor rolipram was used as the reference
compound.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรมของ PDE4D โดเมนตัวเร่งปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบ และยับยั้งการแยกสารได้ assayed ในปฏิกิริยาการส่วนผสมที่ประกอบด้วยทริสเรทติ้ง – HCl (pH 7.5), MgCl2, 10 มม. 50 มม.dithiothreitol 0.5 mM, 10 μM เตอร์ (ละลายใน DMSO)หรือเทียบเท่าระดับเสียงของ DMSO โดยไม่มีผล (สำหรับลบตัวควบคุม) และ 20 000 000 – 30 หน้า/นาทีต่อพื้นผิวทดสอบ3H ค่ายที่อุณหภูมิห้องใน 15 นาที นั้นปฏิกิริยาถูกยกเลิก โดยเพิ่มเติม 0.2 M ZnSO4 และค่าย 3H unreacted ถูกตะกอนออก โดย 0.2 N Ba (OH) 2ในขณะที่ยังคงอยู่ใน supernatant Radioactivity ในsupernatant ถูกวัดใน 2.5 mL ของทวีดอัลติมาทองค็อกเทล scintillation เหลว โดยเคาน์เตอร์ scintillation เหลวTestwas แต่ละน้อยซ้ำครั้งที่สาม ใน bioassay นี้rolipram ผล PDE4D ถูกใช้เป็นการอ้างอิงผสม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กิจกรรมของเอนไซม์ที่เร่งปฏิกิริยาของ pde4d โดเมนและยับยั้งการแยกสารที่

ในปฏิกิริยาเอนไซม์ผสมที่ประกอบด้วย 50 มม. โดย– HCl ( pH 7.5 ) , MgCl2 10 mm
บัตรแข็ง 0.5 มม. 10 ม. μซึ่งละลายใน DMSO )
หรือเทียบเท่าปริมาณ DMSO โดยไม่ยับยั้ง (
ควบคุมเชิงลบ ) และ 20 , 000 - 30 000 CPM ต่อค่าย 3H (
) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที จากนั้น
ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดยเพิ่ม 0.2 M znso4 และเข้าสู่ค่าย 3
มาตกตะกอนออกมา โดย 0.2 N Ba ( OH ) 2
ในขณะที่ยังคงอยู่ในน่าน . กัมมันตภาพรังสีใน
น่านวัดใน 2.5 มล. ของของเหลวประกายทอง
ค็อกเทลประกายของเหลว
แต่ละเคาน์เตอร์ สำหรับซ้ำอย่างน้อยสามครั้ง ในวิธีนี้
เป็น pde4d ยับยั้ง rolipram ใช้เป็นอ้างอิง
สารประกอบ