2.3. Preparation of recombinant E.

2.3. Preparation of recombinant E. coli cells as biocatalysts for
biodiesel production from grease
Two milliliters overnight inoculum of the above constructed recombinant
E. coli strain [E. coli (Calb), E. coli (Tll), E. coli (Calb/Tll), or
E. coli (Calb-Tll)] was added to 100 mL LB medium supplemented
with 50 mg/L of kanamycin in a 500 mL Erlenmeyer flask. The culture
was incubated at 37 C and 250 rpm to reach an OD600nm of
0.6. Subsequently, lipase expression was induced by the addition
of isopropylthiogalactoside (IPTG) to a concentration 0.2 mM. The
culture was grown for another 4 h at 30 C and 250 rpm to OD600nm
of 3.0, and the cells were harvested by centrifugation at 3440 g for
5 min. Washing with water followed by centrifugation gave the
cell pallets as wet-cell biocatalysts. To prepare dry-cell biocatalysts,
the wet cells were lyophilized to remove water.
The expressing of the corresponding lipase was analyzed by
sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis
(SDS–PAGE). Cell-free extract was prepared by the disruption of
the harvested cells with homogenizer under 20 psi followed by
centrifugation. Soluble cell lysate (corresponding to 0.5 mL cell
culture) were loaded to SDS–PAGE, and the gels were stained with
Coomassie brilliant blue.
2.4. Specific activity of the recombinant E. coli cells for the hydrolys

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การเตรียมเซลล์ recombinant E. coli เป็น biocatalysts สำหรับผลิตไบโอดีเซลจากไขมันMilliliters สองนอน inoculum วททชสร้างข้างต้นต้องใช้ e. coli [E. coli (Calb), E. coli (Tll), E. coli (Calb/Tll), หรือเพิ่มเสริมปานกลาง 100 มลป. E. coli (Calb-Tll)]ด้วย 50 mg/L ของกานามัยซินใน mL 500 Erlenmeyer หนาว วัฒนธรรมมี incubated ที่ 37 C และ 250 rpm ถึงการ OD600nm ของ0.6 ในภายหลัง เอนไซม์ไลเปสนิพจน์ถูกเหนี่ยวนำ โดยการเพิ่มของ isopropylthiogalactoside (IPTG) ให้เข้มข้น 0.2 mM ที่วัฒนธรรมถูกปลูกในอีก 4 h ที่ 30 C และ 250 rpm เพื่อ OD600nm3.0 และเซลล์ถูกเก็บเกี่ยว โดย centrifugation ที่ 3440 กรัมสำหรับ5 นาทีล้าง ด้วยน้ำตาม ด้วย centrifugation ให้การแท่นวางสินค้าเซลล์เป็นเซลล์เปียก biocatalysts การเตรียมเซลล์แห้ง biocatalystsเซลล์เปียกได้ lyophilized เอาน้ำแสดงของเอนไซม์ไลเปสที่สอดคล้องกันถูกวิเคราะห์โดยโซเดียม dodecyl ซัลเฟต – polyacrylamide เจ electrophoresis(SDS-หน้า) สารสกัดเซลล์ฟรีถูกเตรียม โดยทีมของเซลล์ ด้วยต่ำกว่า 20 psi homogenizer harvested ตามด้วยcentrifugation ละลายเซลล์ lysate (ตรงกับเซลล์ 0.5 mLวัฒนธรรม) ถูกโหลด SDS-หน้า และเจมีสีด้วยสีฟ้าสดใส Coomassie2.4 กิจกรรมเฉพาะเซลล์ recombinant E. coli สำหรับการ hydrolys

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 เตรียมความพร้อมของ recombinant
อีโคไลเซลล์เป็นเอนไซม์สำหรับการผลิตไบโอดีเซลจากไขมันสองมิลลิลิตรเชื้อค้างคืนที่กล่าวมาสร้าง
recombinant
อี coli สายพันธุ์ [อี coli (Calb) เชื้อ E. coli (TLL) เชื้อ E. coli (Calb / TLL)
หรืออี coli (Calb-TLL)] ถูกบันทึกอยู่ในกลาง 100 มล LB เสริม
50 มิลลิกรัม / ลิตรของกานามัยซินในขวด 500 มิลลิลิตร Erlenmeyer วัฒนธรรมถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและ 250 รอบต่อนาทีในการเข้าถึง OD600nm ของ 0.6 ต่อมาการแสดงออกของเอนไซม์ไลเปสได้ที่เกิดจากการเพิ่มของ isopropylthiogalactoside (IPTG) ความเข้มข้น 0.2 มม วัฒนธรรมปลูกอีก 4 ชั่วโมงที่ 30 องศาเซลเซียสและ 250 รอบต่อนาทีเพื่อ OD600nm 3.0 และเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 3,440 กรัมสำหรับ5 นาที ซักผ้าด้วยน้ำตามด้วยการหมุนเหวี่ยงให้พาเลทมือถือเป็นเอนไซม์เปียกเซลล์ เพื่อเตรียมความพร้อมเอนไซม์แห้งเซลล์เซลล์เปียกแห้งเพื่อเอาน้ำ. แสดงของเอนไซม์ไลเปสที่เกี่ยวข้องได้วิเคราะห์โดยโซเดียมข่าวคราวซัลเฟตโดเดซิลอะคริเลต(SDS-PAGE) สารสกัดจากเซลล์ฟรีถูกจัดทำขึ้นจากการหยุดชะงักของเซลล์เก็บเกี่ยวกับโฮโมจีไนมีอายุต่ำกว่า 20 ปอนด์ต่อตารางนิ้วตามด้วยการหมุนเหวี่ยง lysate เซลล์ที่ละลายน้ำได้ (ตรงกับ 0.5 มิลลิลิตรเซลล์วัฒนธรรม) ถูกโหลดไปยังระบบ SDS-PAGE และเจลที่ถูกย้อมด้วยสีCoomassie สดใสสีฟ้า. 2.4 กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของ recombinant อีโคไลเซลล์ hydrolys

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การเตรียมเซลล์ E . coli เซลล์เป็นจากัวร์สำหรับการผลิตไบโอดีเซลจากไขมัน

2 มิลลิลิตรค้างคืนเชื้อดังกล่าวข้างต้นสร้างรีคอมบิแนนท์
E . coli สายพันธุ์ [ E . coli ( calb ) , E . coli ( TII ) , E . coli ( calb / TII ) หรือ
E . coli ( calb TII ) ] เติม 100 ml ปอนด์ MS
กับ 50 มก. / ล. ในเออร์เลนเมเยอร์น 500 มิลลิลิตร ขวดเหล้า วัฒนธรรม
ถูกบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส และ  250 รอบต่อนาทีจะถึง od600nm ของ
0.6 ต่อมาพบการเพิ่มการแสดงออกของ isopropylthiogalactoside
( เอนไซม์ ) ความเข้มข้น 0.2 มิลลิเมตร
เพาะ ปลูก อีก 4 ชั่วโมง 30  C 250 รอบต่อนาที เพื่อ od600nm
ของ 3.0 , และเซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดยการปั่นเหวี่ยงที่ 1 g
5 นาที ล้างด้วยน้ำ ตามด้วยปั่นให้
เซลล์พาเลทเป็นจากัวร์เซลล์เปียก เตรียมจากัวร์เซลล์แห้ง , เซลล์เปียกได้

แห้ง เอาน้ำ การแสดงออกของเอนไซม์ไลเปสที่สอดคล้องกันโดยใช้
โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS - polyacrylamide gel electrophoresis
( หน้า ) สารสกัดจากเซลล์ฟรีถูกเตรียมโดยการหยุดชะงักของ
เก็บเกี่ยวเซลล์โฮโมจีไนภายใต้ 20 psi ตามด้วย
3 .lysate เซลล์ ( เซลล์วัฒนธรรมที่สอดคล้องกับ
0.5 มิลลิลิตรโหลด SDS - หน้า และเจลถูกย้อมด้วยสีเหล่านี้น่าจะเป็นสีฟ้าสดใส
.
2.4 . กิจกรรมที่เฉพาะเจาะจงของเซลล์ E . coli เซลล์สำหรับ hydrolys