2.6. Preparation of protein extract

2.6. Preparation of protein extracts from liver and Western blot analysis
The livers were ground using radioimmunoprecipitation assay buffer containing
proteinase inhibitors. The homogenates were centrifuged at 12,000 r/min at 4 min
for 10 min. The protein concentrations of the supernatants were measured using
the Bradford assay. Up to 50lg of proteins were separated by sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis and transferred to nitrocellulose membranes (Millipore, Bedford, MA). The membrane was blocked with phosphate
buffer saline (PBS) containing 5% nonfat milk. After which, the membrane was incubated with antibodies against COX 2, NFjB or iNOS (Santa Cruz Biotechnology, USA)
at 4C overnight. The membrane was washed with PBS containing 0.1% Tween-20,
followed by incubation with an HRP-conjugated second antibody (Santa Cruz Biotechnology, USA). The signals were detected by an enhanced chemiluminescence
kit (Amersham Pharmacia Biotech, UK). The intensities were determined by densitometry using a Fujifilm-Multi gauge (Version 2.2) software

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.6 การเตรียมสารสกัดจากโปรตีนของตับและจากการวิเคราะห์ดวงตะวันตับถูกพื้นดินโดยใช้บัฟเฟอร์ทดสอบ radioimmunoprecipitation ที่มีสารยับยั้งเอนไซม์ homogenates ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 รอบ / นาที 4 นาทีเป็นเวลา10 นาที ความเข้มข้นของโปรตีน supernatants ถูกวัดโดยใช้การทดสอบแบรดฟอ ขึ้นอยู่กับ 50lg ของโปรตีนที่ถูกแยกออกจากข่าวคราวโซเดียมซัลเฟตโดเดซิลอะคริเลตและโอนไปยังเยื่อ nitrocellulose (คฟอร์ด, แมสซาชูเซต) เมมเบรนถูกบล็อกด้วยฟอสเฟตน้ำเกลือบัฟเฟอร์ (พีบีเอส) ที่มีนมไม่มีน้ำมัน 5% หลังจากที่เมมเบรนที่ถูกบ่มกับแอนติบอดีต่อ COX 2 NFjB หรือ iNOS (ซานตาครูซชีวภาพสหรัฐอเมริกา) วันที่ 4? C ในชั่วข้ามคืน เมมเบรนถูกล้างด้วยพีบีเอสที่มี 0.1% Tween-20 ตามด้วยการบ่มที่มีแอนติบอดี้ที่สอง HRP-ผัน (ซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ, สหรัฐอเมริกา) สัญญาณที่ถูกตรวจพบโดย chemiluminescence เพิ่มชุด(Amersham Pharmacia ไบโอเทคสหราชอาณาจักร) ความเข้มที่ถูกกำหนดโดยความหนาแน่นโดยใช้มาตรวัด Fujifilm หลาย (เวอร์ชั่น 2.2) ซอฟแวร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.6 การเตรียมโปรตีนสกัดจากตับและ Western blot การวิเคราะห์
ตับถูกใช้ในบัฟเฟอร์ที่มีพื้น radioimmunoprecipitation
โปรตัวยับยั้ง ซึ่งเป็นระดับที่ homogenates 12000 R / มินมิน
ที่ 4 เป็นเวลา 10 นาที ความเข้มข้นของโปรตีน supernatants ถูกวัดโดยใช้
( แบรดฟอร์ดถึง 50lg ของโปรตีนที่แยกได้จากโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตและ polyacrylamide gel electrophoresis และโอนไปยังไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน ( มิลลิ , ฟอร์ด , MA ) เยื่อที่ถูกปิดกั้นด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (
( PBS ) ที่ประกอบด้วย 5% ไม่มีไขมันนม หลังจากที่ , เมมเบรนที่มีแอนติบอดีต่อเชื้อค็อก 2 , nfjb หรือ inos ( สหรัฐอเมริกา Santa Cruz เทคโนโลยีชีวภาพ )
4  C ในชั่วข้ามคืนเยื่อแผ่นล้างด้วย pbs ที่ประกอบด้วย 0.1% tween-20
ตามด้วย , บ่มด้วย HRP และแอนติบอดีที่สอง ( สหรัฐอเมริกา Santa Cruz เทคโนโลยีชีวภาพ ) สัญญาณที่ตรวจพบได้โดยเพิ่มนโยบายแรงงาน
ชุด ( ที่มุ่งมั่น ไบโอเทค , UK ) ที่ถูกกำหนดโดยการใช้ความเข้ม densitometry Fujifilm หลายวัด ( รุ่น 2 ) ซอฟต์แวร์